Генетическое влияние генетических факторов, влияющих на эффективность десмопрессина при легкой/умеренной гемофилии А (GIDEMHA)

GIDEMHA — это обсервационное, ретроспективное и многоцентровое клинико-биологическое исследование, проведенное в центрах лечения гемофилии (ЦЛГ) французского Гранд-Уэста, включая ЦЛГ Анжера, Бреста, Кана, Нанта, Ренна и Тура.

Целями исследования GIDEMHA являются:

• Описание фармакокинетики (ФК) постдесмопрессинового (DDAVP) FVIII в большой ретроспективной когорте пациентов с легкой/умеренной HA,
• Исследование связанных с пациентами факторов, влияющих на эту ФК FVIII,
• Построение прогностических популяционных и байесовских моделей

Критерии включения:

• Мужчины любого возраста с легкой или умеренной формой гемофилии
• Терапевтический тест с ДДАВП проводится с 2010 года,
• Измерения уровня фактора VIII проводились не менее 2 раз во время терапевтического теста, непосредственно перед инфузией DDAVP и через 30 или 60 минут после нее,
• Полное генотипирование гена F8 для генетической диагностики гемофилии

Критерий исключения:

• Пациенты с ингибитором фактора VIII
• Отказ от участия в исследовании
• Невозможно понять французское письмо исследования о невозражении и информации.

Описание терапевтических тестов DDAVP:

Процедура терапевтического теста DDAVP была одинаковой для всех исследовательских центров, как это рекомендовано международными и французскими руководствами. ДДАВП всегда вводили внутривенно в дозе 0,3-0,4 мкг.кг-1 разводят в 50 мл физиологического раствора в течение 30 минут. Параметры гемостаза должны были быть оценены до и по крайней мере через 30 или 60 минут после инфузии DDAVP. Последующие измерения, выполненные в Т2ч, Т4ч и Т6ч после инфузии, также записываются во время теста.

Собранные данные:

Все данные, собранные в этом исследовании, были получены из медицинских файлов на момент терапевтического испытания DDAVP. Они включают:

• Уровни активности FVIII, измеренные с помощью одноэтапного анализа свертывания из плазмы, собранной в 0,109 М цитрате натрия (свежей или хранившейся при -80°C). Эти уровни FVIII измеряли непосредственно до и после инфузии DDAVP (до 24 часов, если это возможно).
• Молекулярный анализ гена F8.
• Группа крови
• дозы ДДАВП
• Уровни фактора фон Виллебранда во время теста DDAVP
• Возраст
• Масса
• Полиморфизмы генов, влияющих на клиренс FVIII, если таковые имеются
• Уровни ДДАВП в крови после инфузий ДДАВП (только для пациентов с ГТС Ренна и включены в течение последних 5 лет)

Фармакодинамические параметры до/после введения DDAVP Следующие фармакокинетические параметры рассчитывали с использованием активности FVIII в зависимости от времени: базовый уровень FVIII, пик FVIII (самый высокий уровень, измеренный после введения DDAVP), восстановление FVIII (recFVIII = пик FVIII / базовый FVIII), период полувыведения FVIII ( FVIII T1/2) и клиренс, а также площадь FVIII под кривой (FVIII AUC). Все параметры, кроме T1/2, были оценены с использованием некомпартментного метода. AUC FVIII рассчитывали с использованием трапецеидальной зависимости активности FVIII от времени дозирования, экстраполированной на базовый уровень, на основе последней наблюдаемой концентрации.

Константу скорости элиминации (Ke) рассчитывали с использованием подхода однокомпонентной модели по следующему уравнению: C=C0*e(-Ke.t) где C, C0, Ke и t обозначают соответственно пост-DDAVP активность FVIII, пиковую активность FVIII, константу скорости элиминации и время после введения DDAVP. Статистику согласия для конечной фазы исключения скорректировали по количеству точек, использованных при оценке Ke, и только те, которые R2>0,90, были сохранены для дальнейшего анализа. FVIII T1/2 рассчитывали как Ln(2)/Ke. T1/2 и AUC рассчитывались только в том случае, если уровни FVIII измерялись не менее 4 раз в разное время, при этом были доступны базовые и пиковые уровни FVIII. Чтобы проверить метод, исследователи провели 2 дополнительных измерения FVIII (через 12 часов и 24 часа) у последних 10 включенных в исследование пациентов. Это позволило сравнить T1/2 FVIII, полученный по 5 точкам (от T0 до T6h), с полученным по 7 точкам (от T0 до T24h).

Баллы для измерения ответа на DDAVP

Для качественной оценки биологического ответа на DDAVP исследователи использовали критерии, ранее описанные Stoof et al [11]:

• Абсолютный ответ был либо «полным» (пик FVIII ≥0,5 МЕ.мл-1), «частичным» (FVIII ≥0,3 - <0,5 МЕ.мл-1) или «нулевым» (FVIII <0,3 МЕ.мл-1). .
• Относительный ответ определяли как «полный» (recFVIII >3), «частичный» (recFVIII ≥2–<3) или «нулевой» (recFVIII <2).

Две другие оценки, абсолютная продолжительность и относительная продолжительность, были построены для определения эволюции ответа DDAVP с течением времени. Они также включали каждые 3 группы (короткие, средние и длинные) на основе данных, собранных от всех включенных пациентов, по крайней мере, 20% пациентов в группе:

• Абсолютная продолжительность определяла время, в течение которого уровень FVIII составлял ≥ 0,5 МЕ/мл-1 после пика FVIII. Он был либо «коротким» (≤3 ч), «средним» (> 3–6 ч) или «длинным» (> 6 ч).
• Относительная продолжительность соответствовала T1/2 FVIII и была либо «короткой» (≤3 ч), «средней» (>3–<5 ч) или «длительной» (≥5 ч).

Эти 4 балла были определены для всех пациентов, но статистический анализ по мутациям проводился только для так называемых «горячих точек» мутаций F8, определяемых как ≥5 пациентов, имеющих аналогичный дефект гена.

Статистический анализ. Описательные характеристики были проанализированы с медианными значениями, их 25-75% межквартильными диапазонами (IQR) и минимально-максимальными значениями (MIN-MAX). Непараметрические тесты Крускала-Уоллиса и Манна-Уитни использовались для сравнения непрерывных переменных между группами. Для сравнения пропорций в таблицах непредвиденных обстоятельств был проведен точный критерий Фишера, и было рассчитано отношение шансов. Для парного сравнения непрерывных значений использовалась одномерная линейная логистическая регрессия. Кривые выживаемости с FVIII ≥0,5 МЕ.мл-1 различных мутаций горячей точки F8 сравнивали методом Каплана-Мейера. Для качественных значений AR и AD для 4 групп мутаций были рассчитаны положительная прогностическая ценность (PPV), отрицательная прогностическая ценность (NPV), чувствительность и специфичность. Для каждого статистического анализа был определен приблизительно 95% доверительный интервал (95% ДИ), а значение p <0,05 считалось статистически значимым. SPSS 17.0 (SPSS Inc. Чикаго, Иллинойс, США) и GraphPad 5.0 (Prism Software Inc. Сан-Диего, Калифорния) использовались для проведения статистического анализа.