Influenza genetica dei fattori genetici che influenzano l'efficacia della desmopressina nell'emofilia A lieve/moderata (GIDEMHA)

GIDEMHA è uno studio clinico-biologico osservazionale, retrospettivo e multicentrico condotto nei centri di trattamento dell'emofilia (HTC) dell'interregione francese Grand-Ouest, inclusi gli HTC di Angers, Brest, Caen, Nantes, Rennes e Tours.

Gli obiettivi dello studio GIDEMHA sono:

• Descrizione della farmacocinetica (PK) del FVIII post-desmopressina (DDAVP) in un'ampia coorte retrospettiva di pazienti con HA lieve/moderato,
• Ricerca di fattori correlati ai pazienti che influenzano questo FVIII PK,
• Costruzione di modelli predittivi di popolazione e bayesiani

Criterio di inclusione:

• Maschi di qualsiasi età con emofilia lieve o moderata
• Test terapeutico con DDAVP realizzato dal 2010,
• Misurazioni dei livelli di fattore VIII effettuate almeno 2 volte durante il test terapeutico, appena prima dell'infusione di DDAVP e 30 o 60 minuti dopo,
• Genotipizzazione completa del gene F8 per la diagnosi genetica dell'emofilia

Criteri di esclusione:

• Pazienti con un inibitore anti-fattore VIII
• Rifiuto di partecipare allo studio
• Impossibile comprendere la lettera di non opposizione e le informazioni in francese dello studio

Descrizione dei test terapeutici DDAVP:

La procedura del test terapeutico DDAVP era identica per tutti i centri sperimentatori come raccomandato dalle linee guida internazionali e francesi. Il DDAVP è stato sempre somministrato per via endovenosa alla dose di 0,3-0,4 μg.kg-1 diluito in 50 mL di soluzione salina in 30 minuti. I parametri emostatici dovevano essere valutati prima e almeno 30 o 60 minuti dopo l'infusione di DDAVP. Durante il test vengono registrate anche le successive misurazioni effettuate a T2h, T4h e T6h dopo l'infusione.

Dati raccolti:

Tutti i dati raccolti in questo studio sono stati emessi dalle cartelle cliniche al momento del test terapeutico DDAVP. Loro includono:

• Livelli di attività di FVIII misurati con un saggio di coagulazione a una fase da plasmi raccolti in citrato di sodio 0,109 M (fresco o conservato a -80°C). Questi livelli di FVIII sono stati misurati appena prima e dopo l'infusione di DDAVP (fino a 24 ore se disponibili).
• Analisi molecolare del gene F8.
• Gruppo sanguigno
• Dosi di DDAVP
• Livelli del fattore Von Willebrand durante il test DDAVP
• Età
• Peso
• Polimorfismi di geni che influenzano la clearance del FVIII, se disponibili
• Livelli ematici di DDAVP dopo le infusioni di DDAVP (solo per i pazienti dell'HTC di Rennes e inclusi negli ultimi 5 anni)

Parametri farmacodinamici pre/post-DDAVP I seguenti parametri farmacocinetici sono stati calcolati utilizzando l'attività del FVIII in funzione del tempo: FVIII basale, picco di FVIII (livello più alto misurato dopo la somministrazione di DDAVP), recupero del FVIII (recFVIII= picco di FVIII / FVIII basale), emivita del FVIII ( FVIII T1/2) e clearance, e area di FVIII sotto la curva (FVIII AUC). Tutti i parametri tranne T1/2 sono stati stimati utilizzando il metodo non compartimentale. L'AUC del FVIII è stata calcolata utilizzando il trapezio dall'attività del FVIII rispetto al tempo di somministrazione estrapolato al basale, sulla base dell'ultima concentrazione osservata.

La costante di velocità di eliminazione (Ke) è stata calcolata utilizzando l'approccio del modello a un compartimento con la seguente equazione: C=C0*e(-Ke.t) dove C, C0, Ke e t denotano rispettivamente l'attività di FVIII post-DDAVP, l'attività di picco di FVIII, la costante di velocità di eliminazione e il tempo dopo la somministrazione di DDAVP. La statistica della bontà di adattamento per la fase di eliminazione terminale è stata aggiustata per il numero di punti utilizzati nella stima di Ke, e solo quelli R2>0,90 sono stati conservati per ulteriori analisi. FVIII T1/2 è stato calcolato come Ln(2)/Ke. T1/2 e AUC sono stati calcolati solo se i livelli di FVIII sono stati misurati almeno in 4 tempi diversi, con livelli basali e di picco di FVIII disponibili. Per convalidare il metodo, i ricercatori hanno effettuato 2 misurazioni aggiuntive di FVIII (a 12 e 24 ore) negli ultimi 10 pazienti arruolati. Questo ha permesso di confrontare il FVIII T1/2 ottenuto da 5 punti (da T0 a T6h) con quello ottenuto da 7 punti (da T0 a T24h).

Punteggi per misurare la risposta al DDAVP

Per valutare qualitativamente la risposta biologica al DDAVP, i ricercatori hanno utilizzato criteri precedentemente riportati da Stoof et al [11]:

• La risposta assoluta era "completa" (picco FVIII ≥0,5 IU.mL-1), "parziale" (FVIII ≥0,3 - <0,5 IU.mL-1) o "null" (FVIII <0,3 IU.mL-1) .
• La risposta relativa è stata definita come "completa" (recFVIII >3), "parziale" (recFVIII ≥2 - <3) o "null" (recFVIII <2).

Altri due punteggi, durata assoluta e durata relativa, sono stati costruiti per determinare l'evoluzione della risposta DDAVP nel tempo. Inoltre comprendevano ciascuno 3 gruppi (breve, medio e lungo) sulla base dei dati raccolti da tutti i pazienti inclusi, con almeno il 20% di pazienti per gruppo:

• La durata assoluta ha determinato il tempo in cui il livello di FVIII era ≥ 0,5 IU.mL-1 dopo il picco di FVIII. Era "breve" (≤3h), "medio" (>3h - ≤6h) o "lungo" (>6h).
• La durata relativa corrispondeva al FVIII T1/2 ed era "breve" (≤3h), "media" (>3h - <5h) o "lunga" (≥5h).

Questi 4 punteggi sono stati determinati per tutti i pazienti, ma le analisi statistiche per mutazione sono state eseguite solo per le cosiddette mutazioni F8 "hot spot", definite come ≥5 pazienti con un difetto genetico simile.

Analisi statistiche Le caratteristiche descrittive sono state analizzate con valori mediani, i loro intervalli interquartile 25-75% (IQR) e valori minimo-massimo (MIN-MAX). I test non parametrici Kruskal-Wallis e Mann-Whitney sono stati utilizzati per confrontare le variabili continue tra i gruppi. Il test esatto di Fisher è stato eseguito per confrontare le proporzioni nelle tabelle di contingenza ed è stato calcolato l'odds ratio. Per il confronto accoppiato di valori continui è stata utilizzata una regressione logistica lineare univariata. Le curve di sopravvivenza con FVIII ≥0,5 IU.mL-1 di diverse mutazioni hot spot F8 sono state confrontate con il metodo Kaplan-Meier. Per i valori qualitativi di AR e AD dei 4 gruppi di mutazione, sono stati calcolati il ​​valore predittivo positivo (PPV), il valore predittivo negativo (NPV), la sensibilità e la specificità. È stato determinato un intervallo di confidenza approssimativo del 95% (IC 95%) per ogni analisi statistica e un valore p <0,05 è stato considerato statisticamente significativo. SPSS 17.0 (SPSS Inc. Chicago, IL, USA) e GraphPad 5.0 (Prism Software Inc. San Diego CA) sono stati utilizzati per eseguire le analisi statistiche.