遗传病基因鉴定

建议识别和招募患有上述特定疾病的个人和/或家庭。 从所有成年受试者中收集 10-20 毫升（2-4 茶匙）外周血。 将根据儿童的年龄/体型从儿童身上采集较少量的血液。 在某些情况下，作为收集外周血的充分替代方法，将使用面颊拭子（Epicentre Biotechnologies）收集口腔细胞。 每个谱系的所有相关在世成员都将被要求免费参与，仅以研究为基础。 基因组 DNA 将通过标准方法提取并用作聚合酶链式反应 (PCR) 扩增反应的模板。 将在标记处对个体进行基因分型并对候选基因进行测序。

基本上将使用两种方法：

1. 可能提供候选基因知识的情况包括文献综述、疾病生物学、对生物学途径的理解、染色体重排、模式生物体中的突变体等。 当候选基因存在时，建议使用连锁的微卫星和/或单核苷酸多态性 (SNP) PCR 引物对来自家庭的 DNA，以确定疾病和标记是否存在共分离，从而确定疾病基因与疾病之间是否存在联系。先前映射的标记。

   如果疾病似乎与候选基因有关，侧翼所有编码外显子的 PCR 引物将用于扩增外显子和内含子/外显子边界，然后进行测序以检测致病突变。 可以使用一个网站来设计引物以扩增候选基因外显子 (http://genome.ucsc.edu/cgi-bin/hgGateway ). 如果存在非常强的候选基因，将对受影响的个体样本进行候选基因测序，而无需先进行连锁研究。

2. 当不存在明显的候选基因，并且已收集到足够大的家族时，建议使用 Affymetrix SNP 微阵列进行人类全基因组连锁搜索。 我们之前已经成功地使用过这种方法 (Shrimpton et al 2004)，利用全基因组连锁分析和 Human Mapping 10K Array (Affymetrix Inc., Santa Clara, CA)。 10K 阵列允许同时对超过 11,200 个映射的 SNP 进行基因分型，这些 SNP 以 210 KB 的间隔分布在整个人类基因组中。 Affymetrix 100K 和 500K 阵列也可用。 SNP 基因型信息将使用 Varia (Silicon Genetics) 和/或 Merlin 软件进行分析。 该数据将用于定义临界区。 如果检测到具有统计学意义的分离，则将评估关键区域内的候选基因并按照其成为疾病基因的可能性进行排序。 然后将如上所述对候选基因进行测序。

概括。

1. 从连锁研究、强有力的间接证据或表型线索中识别候选疾病基因。
2. 对候选基因进行测序以检测致病突变。
3. 评估检测到的变异。