远程缺血调节对心血管功能的急性和慢性影响

本研究是在 Attikon 大学医院第二大学心脏病学系进行的前瞻性随机试验。 270 名 STEMI 患者在直接 PCI 后 48 小时内被随机分配到两个远程调节 (RIC) 方案或除标准治疗外不进行任何干预（对照组）。 在基线血管功能评估 (T0) 后，第一个方案使用两个缺血性刺激，通过双臂臂袖充气以 200 mmHg 持续 5 分钟，间隔 15 分钟。 每次缺血刺激后都会进行血管功能评估（T1、T2），并在第二次袖带放气 (T3) 后 25 分钟进行最终评估。 第二个协议与第一个相同，只是省略了第二个局部缺血刺激。 这两种协议之前都是假调节程序，通过在将它们放置在普通肱骨位置周围后袖带膨胀省略。 RIC 协议还将在 30 名健康志愿者中执行。 在基线 (T0) 和每个方案结束时 (T3) 抽取血样。 所有患者均为窦性心律，排除标准包括指标事件期间 Killip 等级>2、服用硝酸盐、既往已知冠状动脉或其他心血管疾病史、既往 PCI 或冠状动脉旁路手术 (CABG)，以及慢性炎症和全身性疾病。 此外，研究人员将进行为期两年的随访，以评估 a) 通过超声心动图研究估计左心室收缩末期容积 (LVESV) 来评估左心室收缩力的变化 b) 内皮糖萼和动脉硬度的变化。

使用动脉眼压测量法（Complior, Alam Medical, Vincennes, France）通过颈动脉-股动脉脉搏波速度 (PWV) 评估动脉硬度；正常值 <10 m/s。 PWV 计算为颈动脉和股动脉脉搏触诊部位之间的距离除以波之间的传输时间 (m/s)。 所有测量均由同一名检查员执行，该检查员对所利用的缺血协议视而不见（观察者内变异性 = 5%）。

使用 Sidestream 暗场成像（Microscan、Glycocheck、Microvascular Health Solutions Inc.、美国犹他州盐湖城）测量舌下动脉微血管系统（直径跨度为 5 至 25 μm）的灌注边界区域 (PBR)。 PBR 是细胞贫乏层，由流动的红细胞 (RBC) 和微血管腔表面上的血浆之间的相分离产生。 PBR 包括允许细胞渗透的糖萼成分。 因此，增加的灌注边界区域 (PBR) 与红细胞更深地渗透到糖萼中一致，表明糖萼屏障特性的丧失并且是糖萼厚度减少的标志。 这构成了评估动脉糖萼的标准化、可重复、独立于操作员的方法，因此被提议作为内皮完整性评估的一种手段。

丙二醛 (MDA) 使用商业试剂盒（牛津生物医学研究公司，罗切斯特山，密歇根州，脂质过氧化比色法；测量范围 1-20 nmol/L；分别为 3.39% 和 4.75% 的测定内和测定间变异性）通过分光光度法测定丙二醛 (MDA) ). IL-6 通过高灵敏度免疫测定 [人 IL-6 量子激肽（高灵敏度）] 测量，检测值低至 0.094（测定内变异性 <5%）。

微小 RNA (Mirs) 是小的单链非编码 RNA 分子，包含 19-25 个核苷酸，可调节转录后基因表达以响应细胞或环境刺激 [38]。 它们在血清中的非侵入性和稳定性允许使用存档的血清样本快速估计它们的表达。 特定的 MiRs 与心血管疾病和 IRI 的发病机制有关。 MiR-144 作为关键的 RIC 介质，而 miR-150 和 miR-499 在心肌 IRI 动物模型中抑制细胞凋亡和纤维化 [40, 41]。 此外，miR-21 已被证明可以减少大鼠 IRI 后的梗塞面积和早期左心室 (LV) 重塑。 相反，miR-208 通过肥大和不良重塑诱导发挥有害作用。 根据制造商的说明，使用 NucleoSpin miRNA Plasma Kit（MACHEREY-NAGEL GmbH & Co. KG，Duren，Germany）从样品中获得血清 miRNA。 使用逆转录和实时逆转录酶聚合酶链反应 (RT-PCR) 对测试的 miRNA 和管家基因 U6sn 的表达模式进行定量测定。 使用对每个 miRNA 特异的环状逆转录引物合成茎环互补 DNA (cDNA)。 根据制造商的说明，使用 Roche Light Cycler 荧光定量 PCR 系统（ABI，美国），使用 Mir-X™ MicroRNA 定量试剂盒（Clontech Laboratories，美国）进行逆转录和定量。 所有样品一式三份扩增，每个实验重复三次以确认再现性。 使用 2-ΔΔCt 方法计算表达水平的倍数变化。 用于PCR的引物是：

名称 序列 miR-150 F：5'-TCTCCCAACCTGTTACCAGT- 3' R：5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3' miR-208 F：5'-CTTTTGGCCCGGGTTATAC-3' R：5'-CTGACATCCTCTAGGCTGG-3' miR-144 F：5 '-GGGGGTACAGTATAGATGAT-3' R: 5'-TGCGTGTCGTGGAGTC-3' miR-499 F: 5'-CAAAGTCTTCACTTCCCTGCCA-3' R: 5'-GATGTTTACTCCTCTCCACGTGATC-3' miR-21 F: 5'-CCCGCCTAGCTTATCAGACTG-3' R: 5'-GCCGTCGGTGTCAACATCA-3' miR-145 F: 5'-GGCGTCCAGTTTTCCCAG-3' R: 5'-CAGTGCTGGGTCCGAGTGA-3' U6sn F: 5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3' R: 5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3' 曾经被认为是NO 代谢的惰性副产物，硝酸盐 (NO-3-) 和亚硝酸盐 (NO2-) 最近已被证明在 NO 再生过程中起着循环底物的作用，它独立于经典的 L-精氨酸-NO-合酶(NOS) 途径。 这在心肌缺血的情况下尤为重要，因为后者级联在缺氧环境中逐渐失活。 因此，硝酸盐-亚硝酸盐 (NOx) 池应被视为 NO 生物活性的储存库，可在低氧张力状态下补充 NOS。 血浆中硝酸盐/亚硝酸盐的浓度是使用 Griess 反应和市售试剂盒（开曼硝酸盐/亚硝酸盐比色测定试剂盒 780001）确定的，如我们之前所述。 每个血浆样品通过 10kDa 分子量截止过滤器（带有 Omega 膜的 Pall Nanosep® 离心装置，Sigma Aldrich：Z722065）进行超滤。 在超滤血浆之前，用超纯水预先冲洗过滤器。 然后，将 500μL 血浆在 4οC 下以 14.000xg 离心 30 分钟。 40μL滤液用于测定硝酸盐/亚硝酸盐，加入Griess试剂并使用阅读器Infinite 200 PRO系列（Tecan）在540nm处测量每个孔的吸光度。 根据制造商的说明，分别使用 Graph Pad prism 版本 7 (Graph Pad Software, Inc.) 通过硝酸盐/亚硝酸盐标准曲线确定硝酸盐/亚硝酸盐的浓度。 结果以μmol/L表示。

此外，研究人员将在招募后 1 年和 2 年进行超声心动图研究，以调查研究的 3 组（2 个 RIC 方案和无干预）的左心室功能是否不同。

STATA v.11 和 SPSS v.22 用于分析数据。 Shapiro-Wilk 检验用于检验数据是否呈正态分布，而 Levene 检验用于检验数据的同方差性。 所有非参数变量都使用 Wilcoxon 检验进行比较，以比较基线值和干预后值，并将其转换为多变量分析的等级。 在所有分析中，研究人员使用 p < 0.05 的两个尾部检验。 研究人员使用参数 (Pearson r) 和非参数 (Spearman rho) 相关系数来检查横截面关联。 对临床和生物学数据进行方差分析 (ANOVA) 以测试各组之间的差异，并且在使用先前发布的方法进行分析之前，所有非参数变量都被转换为等级。 用于重复测量的 ANOVA（一般线性模型，SPSS 22，SPSS Inc，芝加哥，伊利诺伊州）应用于 (a) 测量被检查的血管功能和生化标志物（前者在 T0、T1、T2 和 T3 和基线时）和终止后者的协议），时间参数用作主体内因素，以及（b）使用包括年龄在内的模型测试 2 种 RIPost 协议（单膨胀与双膨胀）和假程序之间的差异，性别、BMI、血脂异常、糖尿病、高血压、伴随药物治疗、MI 位置、心肌酶和患病冠状血管数量（>70% 狭窄）作为协变量。 还检查了研究组与模型中包含的协变量之间的相互作用，同时还计算了所检查标记物的测量时间与研究组之间相互作用的 F 和 p 值。 当不满足通过 Mauchly 检验评估的球形假设时，将使用 Greenhouse-Geisser 校正。 使用 Bonferroni 校正执行事后比较。 p值<0.05被认为具有统计学意义。 血管和生化标记物的观察者间和观察者内变异性 (%) 计算为第一次和第二次测量值之间差异的 SD，并表示为 30 名健康志愿者的平均值的百分比。