Omalizumab u neatopického astmatu

Primárním cílem studie je získat principiální důkaz, že léčba omalizumabem udržuje plicní funkce, kontrolu symptomů a kvalitu života ve skupině neatopických, středně těžkých/těžkých astmatiků, jejichž pravidelná antiastmatická léčba je jednotná a redukovaná na dobu 8 let. týden po léčbě omalizumabem/placebem, zatímco druhá léčba pokračuje.

Sekundárním cílem je zjistit, zda omalizumab ve srovnání s placebem snižuje bronchiální zánět a lokální produkci IgE v bronchiální sliznici u stejné skupiny astmatiků.

Měření klinického výsledku

Skupiny léčené omalizumabem a placebem budou porovnány z hlediska změn v následujících klinických výsledcích (pro opakovaná měření, jako je denní maximální průtok a symptomy, budou porovnány průměrné hodnoty prvních a posledních 10 dnů příslušného studijního období).

1. před omezením stávající antiastmatické léčby (prvních 12 týdnů studie):

   • Pre-bronchodilatační FEV1 (primární výsledná míra)
   • Ranní a večerní špičkový výdechový průtok
   • Vydechovaný oxid dusnatý
   • Skóre denních a nočních symptomů
   • Celkové dávky záchranného beta2-agonisty
   • Úplné dny bez příznaků
   • Validované skóre kvality života astmatu

2. během fáze snížení antiastmatické terapie (následných 8 týdnů studie):

   • Primárním výsledným měřítkem bude exacerbace onemocnění definovaná jako potřeba záchranné perorální kortikosteroidní medikace pro zhoršení příznaků a/nebo zhoršení plicních funkcí, jak bylo dohodnuto mezi pacientem a studujícím lékařem
   • Sekundární výsledná měření budou zahrnovat všechna měření uvedená v části (a) výše, pokud je nelze měřit z důvodu exacerbace onemocnění (primární výsledná míra)

Měření výsledků laboratoře

Ty budou pocházet z imunologické, imunohistochemické a molekulární analýzy biopsií periferní krve a průdušek odebraných všem pacientům na začátku a na konci prvních 12 týdnů studie před snížením antiastmatické léčby a budou zahrnovat změny v:

• Stanovení kolagenu typu I, III, IV a V a tenascinu
• Cévní struktury a angiogenní stimuly (kolagen typu IV, CD31 a lidský VEGF (29,30)
• Zánětlivé buňky (eozinofily, T buňky, B buňky, plazmatické buňky, makrofágy, neutrofily, žírné buňky)
• Pohárkové buňky budou barveny pomocí monoklonální protilátky anti-Muc-5AC
• Imunoglobulin E a jeho vysoko- a nízkoafinitní receptory budou barveny pomocí specifických monoklonálních protilátek jako v našich předchozích studiích. B lymfocyty (CD20+) a plazmatické buňky (CD138+) budou vyšetřeny na expresi volných kappa a lambda IgE lehkých řetězců pomocí dvojité, sekvenční IHC.

Analýza barvení: Celé oblasti obarvených řezů biopsie budou podrobeny obrazové analýze pomocí systému Zeiss Vision KS300, který umožňuje objektivní, nezkreslenou analýzu digitálního obrazu pomocí výkonného jazyka maker.

Koncentrace cytokinů a chemokinů v homogenátech endobronchiální tkáně: Tyto budou měřeny v homogenátech 2 biopsií elektrochemiluminiscencí za použití SECTOR Imager 6000 a testovacích souprav vyrobených společností Meso Scale Discovery. Základní sada MS6000 Human TH1/TH2 10-Plex bude použita k měření IFN-gama, IL-1beta, IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, IL-12p70, IL-13, TNF- alfa. Základní sada MS6000 Human Chemokine 9-Plex Base Kit bude použita k měření Eotaxinu, Eotaxinu-3, IL-8, IP-10, MCP-1, MCP-4, MDC, MIP-1beta, TARC.

Syntéza IgE: Dvě biopsie od každého pacienta budou později rychle zmrazeny v RNA pro následnou analýzu exprese transkriptů přepínacího kruhu a zralé a zárodečné mRNA IgE jako v naší předchozí nedávné publikaci a klonování genů C-epsilon H-řetězce pro hledání důkazů klonální expanze B buněk způsobené superantigeny B buněk. Budou dvě biopsie

\homogenizované pro extrakci B buněk pro klonování a analýzu produkce IgE pomocí antigenového mikročipu.

Sérum: Uchované vzorky séra odebrané v době bronchoskopie budou analyzovány na kompletní antigen-specifický IgE repertoár pomocí microarray a anti-Fc-epsilon-RI aktivitu pomocí in vitro testu degranulace bazofilů.