National Psoriasis Foundation – studie biomarkerů transmembránového proteinu specifického pro dendritické buňky (DC-Stamp)

Psoriatická artritida (PsA), fenotypicky heterogenní porucha, je charakterizována poškozením kloubů pozorovaným u více než poloviny pacientů s časným onemocněním. Zatímco látky protinádorového nekrotického faktoru (TNF) výrazně zlepšily příznaky a symptomy a snížily poškození kloubů, skutečnost, že pouze zlomek pacientů dosáhne úplné remise, podtrhuje obrovskou neuspokojenou potřebu této populace. Dosud nebyl identifikován biomarker, který by mohl stratifikovat pacienty podle závažnosti a mohl by sloužit jako hlavní indikátor léčebné odpovědi.

Naše laboratoř prokázala, že cirkulující prekurzory osteoklastů (OCP) jsou u pacientů s PsA zvýšené. OCP po anti-TNF terapii rychle klesá a hladiny jsou vyšší u subjektů s erozivní artritidou ve srovnání s těmi, kteří nemají žádné rentgenové změny. OCP jsou odvozeny z CD14+ monocytů a test zahrnuje kultivační techniky, které jsou nákladné, drahé a náročné na práci. Vyvinuli jsme protilátku (1A2) k transmembránovému proteinu specifickému pro dendritické buňky (DC-STAMP), potenciálnímu markeru populace OCP, pro analýzu průtokovou cytometrií. Zjistili jsme, že: 1) hladina exprese monocytů DC-STAMP korelovala s in vitro tvorbou osteoklastů; 2) exprese DC-STAMP je významně zvýšená v PBMC od PsA subjektů ve srovnání s kontrolami; 3) TNF dramaticky upreguloval expresi DC-STAMP in vitro; 4) povrchová exprese DC-STAMP po anti-TNF terapii poklesla; 5) podskupiny CD3+ buněk také exprimují DC-STAMP na buněčné membráně. Na základě těchto předběžných údajů jsou navrženy tři hypotézy:

1. DC-STAMP+ CD3+ T buňky patří do podskupiny Th17, která usnadňuje tvorbu OC;
2. DC-STAMP je marker závažnosti onemocnění u PsA;
3. DC-STAMP je biomarker léčebné odpovědi u PsA.

K testování těchto hypotéz navrhujeme tři konkrétní cíle.

Cíl 1 Aby bylo možné zjistit, zda buňky DC-STAMP+CD3+ patří do podskupiny buněk Th17, budou PBMC barveny protilátkami specifickými pro Th17 u subjektů PsA se zvýšenou expresí DC-STAMP. Budeme také zkoumat roli T buněk v osteoklastogenezi přímo pomocí kokultivačních experimentů a jako kontroly použijeme monocytové kultury bez přidaných lymfocytů. Exprese DC-STAMP na cirkulujících dendritických buňkách bude zkoumána ex vivo pomocí 11-barevné průtokové cytometrie.

Cíl 2 K určení, zda je zvýšená exprese DC-STAMP spojena se závažnějšími rysy PsA, bude stanovena exprese DC-STAMP u 40 subjektů PsA a bude korelována s klinickými proměnnými artritidy a kožní choroby, CRP a poškození rentgenovým zářením.

Cíl 3 Abychom zjistili, zda je DC-STAMP marker odpovědi na léčbu anti-TNF, přijmeme 20 pacientů s PsA v Cíli 2 se zvýšenou expresí DC-STAMP a rozdělíme je do 2 skupin. Deset subjektů dostane methotrexát a deset bude léčeno anti-TNF. Korelace mezi proměnnými DC-STAMP (procento 1A2+ děleno 1A2 - buňky X 100) a proměnnými podrobně popsanými v cíli 2 bude analyzována v těchto 2 léčebných skupinách ve 2 různých časových bodech.