Reakce omega-3-indexu na konzumaci drůbežích potravin přirozeně obohacených omega-3 polynenasycenými mastnými kyselinami

POZADÍ

Výživa a zdraví Odhaduje se, že suboptimální diety jsou zodpovědné za 20 % předčasné (chorobami zprostředkované) úmrtnosti na celém světě a 20 % veškeré zátěže nemocemi, měřeno roky života s přizpůsobením zdravotnímu postižení (DALY). Vazby mezi stravou a nemocí jsou stále více chápány jako trojí zátěž, totiž; podvýživa; skrytý hlad (strava s nedostatkem esenciálních aminokyselin, esenciálních mastných kyselin, vitamínů a minerálů); a globální epidemie nadváhy a obezity [1]. Celkově světová populace konzumuje obrovské přebytky kalorií, cukrů a soli, zatímco příjem celozrnných výrobků, ovoce, zeleniny, ořechů, semen a mořských plodů pocházejících z omega-3 polynenasycených mastných kyselin (PUFA) ve většině zemí, bez ohledu na bohatství, jsou nedostatečné pro zdraví [1,2].

Omega-3 polynenasycené mastné kyseliny (omega-3-PUFA) Existují čtyři dlouhé řetězce omega-3-PUFA. Kyselina alfa-linolenová (ALA 18:3n-3) se nachází v rostlinách. Zbývající tři omega-3 PUFA, které jsou delší a více nenasycené (kyselina eikosapentaenová, EPA 20:5n-3, kyselina dokosapentaenová, DPA 22:5n-3 a kyselina dokosahexaenová, DHA 22:6n-3), jsou velké část nalezená v mastných mořských plodech.

Omega-3-PUFA a lidské zdraví Diety s nízkým obsahem omega-3 mastných kyselin pocházejících z mořských plodů (kyselina eikosapentaenová (EPA) a kyselina dokosahexaenová (DHA)), příklad skrytého hladu, byly nedávno hodnoceny jako šesté nejvýznamnější dietní riziko. faktor – 1,5 milionu úmrtí a 33 milionů DALY na celém světě lze připsat tomuto nedostatku [2,3]. Pravidelná konzumace tučných ryb a zvýšené hladiny EPA a DHA v krvi jsou silně spojeny s ochranou před infarktem, mrtvicí, obezitou, depresí a demencí v pozdějším věku [4-9]. Kromě toho je DHA nezbytná pro vývoj mozku během dětství a dětství – nízký příjem má za následek sníženou intelektuální kapacitu a duševní zdraví, zhoršené učení ve škole a případné horší životní příležitosti [10-15].

Příjem a množství omega-3-PUFA po celém světě Navzdory většině mezinárodních směrnic doporučujících konzumaci alespoň jedné porce tučných ryb týdně (>250 mg/den EPA a DHA) [16,17] je přijímání této rady nedostatečné. Mnoho lidí, zejména děti, nekonzumuje vůbec žádné mořské plody [18]. Kromě toho celosvětově klesají populace volně žijících ryb a nejsou dostatečné k tomu, aby světové populaci poskytly byť jen jednu porci týdně [19]. Akvakultura se v posledních letech neustále rozvíjí, ale většina chovaných ryb je závislá na doplňování rybího tuku z úlovků volně žijících ryb. To se stalo vzácným, drahým a neudržitelným zdrojem. V důsledku toho hladiny EPA a DHA u chovaných ryb značně poklesly, takže k dodání 250 mg EPA a DHA/den jsou nyní zapotřebí alespoň dvě porce/týden chovaného lososa [20,21]. Není proto překvapivé, že celosvětově pouze malá menšina (<20 %) vykazuje optimální hladiny omega-3 PUFA v krvi [22].

Obohacení běžně konzumovaných potravin omega-3-PUFA jako řešení celosvětového nedostatku řas poskytuje alternativní, udržitelnější zdroj omega-3-PUFA. To je základ Omega-Pro od Humanitiv, krmiva s olejem z řas původně vyvinutého společností Devenish Nutrition, které při podávání drůbeži a prasatům vede k kuřecímu masu, vejcím a vepřovému masu obohacenému omega-3-PUFA. Chuťové testy ukázaly, že obohacené potraviny jsou stejně chutné nebo chutnější než standardní potraviny [23]. Nedávno dokončená randomizovaná dvojitě zaslepená kontrolovaná studie u 161 zdravých dospělých ukázala, že pravidelná konzumace kuřecího masa a vajec obohacených omega-3-PUFA poskytla dalších 120 mg/den EPA a DHA (48 % denního doporučeného příjmu). Studie uvádí, že konzumací přirozeně obohacených potravin se nejen zlepšil stav omega-3, ale také se snížil krevní tlak a srdeční frekvence [24]. Závěry a důsledky této studie lze shrnout následovně;

• Kuřecí maso a vejce obohacené omega-3-PUFA poskytuje spotřebitelům atraktivní doplňkovou možnost nebo alternativu ke konzumaci tučných ryb.
• Pokud by bylo globálně dosaženo podobného zvýšení hladin omega-3-PUFA, jako bylo pozorováno ve studii, dalo by se předejít 10–15 % kardiovaskulárních příhod a bylo by možné dosáhnout dalších 1–2 let zdravého života.
• Na rozdíl od mnoha zásahů do životního stylu nejsou zdravotní přínosy závislé na ochotě lidí provádět dlouhodobé změny ve stravování, ale na široké dostupnosti řady levných, běžně konzumovaných, přirozeně obohacených potravin.

Zátěž nemocí a stav omega-3-PUFA v Saúdské Arábii Kardiovaskulární onemocnění, zejména ischemická choroba srdeční a cévní mozková příhoda, jsou hlavní příčinou nemocnosti a úmrtnosti v Saúdské Arábii a představují 44 % všech úmrtí a 17 % všech DALY v roce 2017 [2]. Duševní poruchy, včetně Alzheimerovy demence a deprese, byly v poslední době v Saúdské Arábii hodnoceny jako čtvrtá nejdůležitější příčina zátěže nemocemi a představují 9 % všech DALY [2]. Vysoký index tělesné hmotnosti a nutriční rizikové faktory jsou 2 hlavní rizikové faktory špatného zdraví v Saúdské Arábii [2].

Nedávná analýza provedená organizací Global Burden of Disease Collaborators naznačuje, že nedostatek omega-3 PUFA je v zemích Středního východu ještě důležitějším nutričním rizikovým faktorem než celosvětově (4. místo na Středním východě oproti 6. celosvětově) [3].

Průzkum zveřejněný v roce 2014 popsal velmi pravidelnou konzumaci ryb mezi obyvateli pobřežního města Jeddah – Saúdové a nesaúdští Arabové uvedli, že ryby zařazují v průměru 2,2 a 3,1 jídel týdně [25]. Většina konzumovaných druhů ryb však byly bílé ryby a obsahovaly pouze malé množství DHA a EPA (rozsah 0-500 mg/100 g). Ještě větší obavy vyvolává druhý novější průzkum, který byl proveden v Najranu v roce 2018. V této vnitrozemské provincii pouze 23 % respondentů uvedlo, že jí ryby alespoň jednou týdně, 31 % uvedlo, že jí ryby pouze jednou za měsíc, a 12 % nikdy nejedlo žádnou rybu [26]. Celkově se odhaduje, že každý občan Saúdské Arábie sní méně než 9 kg ryb ročně [27,28]. Naproti tomu patří k největším světovým konzumentům kuřecího masa, každý sní přibližně 47 kg kuřecího masa a 120 vajec ročně [27,28]. Pokud jde o hladiny EPA a DHA v krvi v saúdské populaci, studie z roku 2015 s 2 672 účastníky (1 544 mužů a 1 128 žen) uvádí průměrný index omega-3 3,91 % (směrodatná odchylka 1,45 %) [29]. To je podstatně méně než optimální index omega-3 ve výši 8 % [22].

Odůvodnění studie V této randomizované, dvojitě zaslepené, kontrolované studii se snažíme kvantifikovat dopad pravidelné konzumace kuřecího masa a vajec obohacených omega-3 PUFA po dobu čtyř měsíců u zdravé saúdské populace.

STUDIJNÍ CÍLE A CÍLE.

Primárním cílem této studie bude vyhodnotit reakci červených krvinek na index omega-3 indexu omega-3 zdravých dospělých Saúdské Arábie na pravidelnou konzumaci kuřecího masa a vajec obohacených omega-3 PUFA. Omega-3 index červených krvinek se vypočítá jako součet EPA a DHA vyjádřený jako procento celkových mastných kyselin v membránách erytrocytů (červených krvinek). Index omega-3 červených krvinek byl zvolen jako primární výsledek studie, protože; jeho menší variabilita v čase ve srovnání s hodnotami v plazmě [30,31]; jeho silné korelace s hladinami EPA a DHA v lidské srdeční tkáni a ve více relevantních orgánech na zvířecích modelech [32,33]; a konečně kvůli jeho prokázané predikci kardiovaskulárních příhod a mortality ze všech příčin [34–36].

Mezi sekundární cíle patří;

• Hodnocení reakcí červených krvinek a plazmy EPA, DPA a DHA na pravidelnou konzumaci kuřecího masa a vajec obohacených omega-3 PUFA.
• Porovnání výchozích hladin červených krvinek a plazmy EPA, DPA a DHA mezi obyvateli Saúdské Arábie, kteří pravidelně konzumují tučné ryby s těmi, kteří pravidelně nekonzumují tučné ryby, a
• Posouzení, zda reakce indexu omega-3 červených krvinek a plazmy na potraviny obohacené omega-3-PUFA se liší mezi těmi, kteří ano, a těmi, kteří ne, zařazují do své týdenní stravy mastné ryby.

ZKUŠEBNÍ DESIGN.

Půjde o randomizovanou dvojitě zaslepenou intervenční studii. Soud bude proveden v souladu s Helsinskou deklarací.

ÚČASTNÍCI STUDIE

Do studie bude přijato 80 zdravých, komunitních obydlí.

RANDOMIZACE A MASKOVÁNÍ

Účastníci budou náhodně rozděleni do jedné ze dvou větví;

• Kontrolní/placebová intervence: Konzumace minimálně 4 porcí standardního kuřecího masa a minimálně 4 standardních vajec týdně po dobu 4 měsíců.
• Experimentální intervence: Konzumace alespoň 4 porcí kuřecího masa obohaceného omega-3-PUFA a alespoň 4 vajec obohacených omega-3-PUFA týdně po dobu 4 měsíců.

STUDIJNÍ PROVÁDĚNÍ

Účastníci budou navštěvovat studijní centrum při screeningu a vstupních návštěvách a na konci studie (4. měsíc). Budou kontaktováni telefonicky v měsíčních intervalech (1., 2. a 3. měsíc).

Při screeningové návštěvě bude odebrán komplexní životní styl a lékařská anamnéza, bude vyplněn dotazník o frekvenci jídla, který zachytí příjem potravy za předchozí rok; bude uspořádán 3denní záznam o jídle, který bude zachycovat aktuální příjem stravy účastníků; a bude hodnoceno splnění kritérií pro zařazení a vyloučení.

Při základní návštěvě, pokud jsou splněna všechna kritéria pro zařazení a vyloučení, budou účastníci randomizováni buď do kontrolní, nebo do intervenční větve studie.

Při vstupních návštěvách a návštěvách ve 4. měsíci se změří výška, váha, obvod pasu a boků, což umožní výpočet indexu tělesné hmotnosti a poměru pas-boky. Při těchto dvou návštěvách kliniky budou odebrány vzorky krve nalačno, aby bylo možné měřit hladiny EPA, DPA a DHA v plazmě a červených krvinkách a také aby bylo možné uchovat alikvoty plazmy pro budoucí výzkumná měření. Účastníci budou požádáni, aby se postili, nepili čaj nebo kávu, nekouřili a nezapojovali se do intenzivního cvičení od půlnoci (minimálně 8 hodin), před návštěvou základní linie a na konci studie. Účastníci mohou tyto dopoledne pít vodu a užívat základní léky.

Při telefonických hovorech v 1., 2. a 3. měsíci a při návštěvě ve 4. měsíci bude posouzena frekvence konzumace kuřecího masa, vajec a ryb během předchozího týdne, stejně jako souběžná medikace a zdravotní stav účastníků.

Účastníci budou požádáni, aby se po dobu trvání studie vyvarovali užívání doplňků omega-3 PUFA s dlouhým řetězcem.

VÝŽIVOVÝ INTERVENCE

Drůbeží maso a vejce budou obohaceny krmením kuřat kompletním krmivem obsahujícím řasy, které jsou bohatým zdrojem omega-3 PUFA (OmegaPro, Humanitiv, Meath, Irsko). Kuřecí maso obohacené o omega-3 PUFA (celá kuřata, prsa, stehna a bubínky) a vejce nebo příslušná kontrolní slepice a kontrolní vejce budou účastníkům studie v pravidelných intervalech (týdenních nebo dvoutýdenních) doručována domů, aby oba, a až tři další členové rodiny, budou moci sníst alespoň 4 porce za týden kuřecího masa a alespoň 4 vejce týdně po dobu 4 měsíců studie. Kuřecí maso bude dodáno zmrazené a vejce budou dodána chlazená.

MĚŘENÍ HLADIN MASTNÝCH KYSELIN V PLAZMĚ A ČERVENÝCH BUNIECÍCH

Měření hladin EPA, DPA a DHA v plazmě a v červených krvinkách bude provedeno v laboratoři se specifickými odbornými znalostmi v oblasti lipidových analýz. Celkové lipidy budou extrahovány z plazmy a červených krvinek pomocí modifikované Folchovy metody [37,38]. Fosfolipidy budou separovány od neutrálních lipidů jednorozměrnou tenkovrstvou chromatografií. Methylestery mastných kyselin budou připraveny přímou transesterifikací a separovány pomocí plynové chromatografie-hmotnostní spektrometrie umožňující kvantifikaci 28 různých píků mastných kyselin. Plazmatické hladiny omega-3-PUFA budou vyjádřeny v mikrogramech/gram a hladiny červených krvinek jako procento celkových mastných kyselin v membránách erytrocytů. Omega-3 index erytrocytů nebo červených krvinek se vypočítá jako součet EPA a DHA vyjádřený jako procento celkových mastných kyselin v membránách erytrocytů.

STATISTICKÁ ANALÝZA

Analýzy a podávání zpráv Studie bude analyzována na základě záměru léčit. Standardní souhrnné statistiky (průměr, směrodatná odchylka, medián, rozmezí, %) budou použity k popisu základních charakteristik účastníků.

Opakovaná měření ANOVA bude použita k porovnání 2 studijních skupin. Studie bude vykazována v souladu s prohlášením CONSORT (Consolidated Standards of Reporting Trials) 2010.

Úvahy o velikosti vzorku Primárním koncovým bodem bude změna omega-3-indexu červených krvinek po 4 měsících. V předchozích studiích byla zjištěna směrodatná odchylka opakovaných měření indexu omega-3 erytrocytů 0,5 %. Studie tedy s 80 účastníky bude mít více než 95% schopnost detekovat 1% rozdíl ve změně od výchozí hodnoty v indexu omega-3 mezi těmi, kteří jedí obohacené potraviny a těmi, kteří jedí kontrolní potraviny, při 2stranném alfa. -úroveň 0,05.

REFERENCE

1. Globální panel pro zemědělství a potravinové systémy pro výživu 2020. Budoucí potravinové systémy: Pro lidi, naši planetu a prosperitu. Londýn. SPOJENÉ KRÁLOVSTVÍ.
2. Institut pro metriky a hodnocení zdraví (2018) GBD Porov. Seattle, WA: IHME, University of Washington. http://vizhub.healthdata.org/gbd-compare. (přístup květen 2023).
3. GBD 2017 Diet Collaborators. Účinky dietních rizik na zdraví ve 195 zemích, 1990–2017: systematická analýza studie globální zátěže nemocí v roce 2017. Lanceta. 393, 1958-1972 (2019).
4. Chowdhury, R. a kol. Asociace mezi konzumací ryb, omega 3 mastnými kyselinami s dlouhým řetězcem a rizikem cerebrovaskulárních onemocnění: systematický přehled a metaanalýza. BMJ. 345, e6698 (2012).
5. Chowdhury, R. a kol. Asociace dietních, cirkulujících a doplňkových mastných kyselin s koronárním rizikem: systematický přehled a metaanalýza. Ann. Internovat. Med. 160, 398-406 (2014).
6. Mozaffarian, D. a kol. Plazmatické fosfolipidy s dlouhým řetězcem -3 mastné kyseliny a celková a příčinně specifická mortalita u starších dospělých – kohortová studie. Ann. Internovat. Med. 158, 515-525 (2013).
7. de Oliveira Otto, M.C.et al. Cirkulující a dietní omega-3 a omega-6 polynenasycené mastné kyseliny a výskyt KVO v multietnické studii aterosklerózy J. Am. Srdce. Doc. 2, 1-17 (2013).
8. Albar SA. Dietní Omega-6/Omega-3 polynenasycené mastné kyseliny (PUFA) a Omega-3 jsou spojeny s obecnou a abdominální obezitou u dospělých: Britský národní dietní a nutriční průzkum. Cureus. 12. října 2022;14(10):e30209. doi: 10.7759/cureus.30209. PMID: 36381926; PMCID: PMC9650245.
9. Wu, A., Ding, Y., Wu, F., Li, R., Hou, J. & Mao, P. Příjem omega-3 mastných kyselin a rizika demence a Alzheimerovy choroby: metaanalýza. Neurosci. Biobehav. Rev. 48, 1-9 (2015).
10. Lauritzen L, Brambilla P, Mazzocchi A, Harslof LB, Ciappolino V, Agostoni C. Účinky DHA na vývoj a funkci mozku. Živiny 2016;8(1):6.
11. Oyen J, Kvestad I, Midtbo LK, Graff IE, Hysing M, Stormark KM, Markhus MW, Baste V, Froyland L, Koletzko B a kol. Příjem tučných ryb a kognitivní funkce: FINS-KIDS, randomizovaná kontrolovaná studie u předškolních dětí. BMC Med 2018;16(1):41.
12. Demmelmair H, Oyen J, Pickert T, Rauh-Pfeiffer A, Stormark KM, Graff IE, LieO, Kjellevold M, Koletzko B. Vliv konzumace lososa atlantického na kognitivní výkon předškolních dětí – randomizovaná kontrolovaná studie. Clin Nutr 2019;38(6):2558-68.
13. Teisen MN, Vuholm S, Niclasen J, Aristizabal-Henao JJ, Stark KD, Geertsen SS, Damsgaard CT, Lauritzen L. Účinky příjmu mastných ryb na kognitivní a socioemoční funkce u zdravých 8-9letých dětí: FiSK Junior randomizovaná studie. Am J Clin Nutr 2020;00:1-10.
14. Sorensen LB, Damsgaard CT, Dalskov SM, Petersen RA, Egelund N, Dyssegaard CB, Stark KD, Andersen R, Tetens I, Astrup A a kol. Dietou vyvolané změny ve stavu železa a n-3 mastných kyselin a asociace s kognitivní výkonností u 8-11letých dánských dětí: sekundární analýzy optimální pohody, rozvoje a zdraví pro dánské děti prostřednictvím zdravé nové nordické dietní školy Studium stravování. Br J Nutr 2015;114(10):1623-37.
15. Handeland K, Oyen J, Skotheim S, Graff IE, Baste V, Kjellevold M, Froyland L, Lie O, Dahl L, Stormark KM. Příjem tučných ryb a výkonnost pozornosti u dospívajících ve věku 14–15 let: FINS-TEENS – randomizovaná kontrolovaná studie. Nutr J 2017;16(1):64.
16. Panel EFSA pro dietetické produkty, výživu a alergie. Vědecké stanovisko k dietním referenčním hodnotám pro tuky, včetně nasycených mastných kyselin, polynenasycených mastných kyselin, mononenasycených mastných kyselin, transmastných kyselin a cholesterolu. Věstník EFSA. 8(3), 1461 (2010).
17. Ministerstvo zdravotnictví a sociálních služeb USA a ministerstvo zemědělství USA. 2015-2020 Dietní pokyny pro Američany. 8. vydání. prosince 2015. Dostupné na http://health.gov/dietaryguidelines/2015/guidelines/ (2015).
18. Micha, R., a kol. Globální, regionální a národní úrovně spotřeby dietních tuků a olejů v letech 1990 a 2010: systematická analýza zahrnující 266 průzkumů výživy specifických pro jednotlivé země. BMJ. 348, g2272 (2014).
19. Golden, C.D. a kol. Pokles úlovků ryb ohrožuje lidské zdraví. Příroda. 534, 317-320 (2016).
20. Sprague, M., Dick, J.R. & Tocher, D.R. Vliv udržitelných krmiv na hladiny omega-3 mastných kyselin s dlouhým řetězcem u lososa atlantického chovaného na farmě, 2006-2015. Sci. Rep. 6, http://dx.doi.org/10.1038/srep21892 (2016).
21. Sprague, M., Fawcett, S., Betancor, M. B., Struthers, W., & Tocher, D. R. (2020). Variace ve nutričním složení chovaných filetů lososa atlantického (Salmo salar L.) s důrazem na obsah EPA a DHA. Journal of Food Composition and Analysis, 94 (srpen). https://doi.org/10.1016/j.jfca.2020.103618
22. Stark, K.D., Van Elswyk, M.E., Higgins, M.R., Weatherfordd, C.A. & Salem, N. Globální průzkum omega-3 mastných kyselin, kyseliny dokosahexaenové a eikosapentaenové, v krevním oběhu zdravých dospělých. Prog. Lipid Res. 63, 132-152 (2016).
23. OmegaPro - Devenish [Internet]. www.devenishnutrition.com. [citováno 10. dubna 2023]. Dostupné z: https://www.devenishnutrition.com/products-services/poultry/c/specialist-products1/omegapro
24. Stanton, A. V., James, K., Brennan, M. M., O'Donovan, F., Buskandar, F., Shortall, K., El-Sayed, T., Kennedy, J., Hayes, H., Fahey, A. G. , Pender, N., Thom, S.A.M., Moran, N., Williams, D.J., & Dolan, E. (2020). Omega-3 index a reakce krevního tlaku na konzumaci potravin přirozeně obohacených o omega-3 polynenasycené mastné kyseliny: randomizovaná kontrolovaná studie. Vědecké zprávy, 10(1), 1-10. https://doi.org/10.1038/s41598-020-71801-5
25. Burger, J., Gochfeld, M., Batang, Z., Alikunhi, N., Al-Jahdali, R., Al-Jebreen, D., Al-Suwailem, A. (2014). Chování a míra konzumace ryb u původních a nepůvodních lidí v Saúdské Arábii. Environmentální výzkum. https://doi.org/10.1016/j.envres.2014.05.014
26. Khan, A. Q., Aldosari, F., & Hussain, S. M. (2018). Chování konzumace ryb a postoj k chovu ryb v Království Saúdské Arábie (KSA). Journal of the Saudi Society of Agricultural Sciences, 17(2), 195-199. https://doi.org/10.1016/j.jssas.2016.04.003.
27. Saúdové patří mezi největší světové spotřebitele kuřecího masa. Saudi Gazette dne 14. března 2016. http://english.alarabiya.net/en/business/markets/2016/03/14
28. Soubor metadat průzkumu GDD | Globální dietní databáze [Internet]. globaldietarydatabase.org. [citováno 10. dubna 2023]. Dostupné z: https://globaldietarydatabase.org/complete-survey-metadata
29. Bassam, T., Superko, H. R., Caulfield, M., (2015). Riziko kardiovaskulárních onemocnění připisované hladinám rybího tuku (omega-3 mastné kyseliny) v krvi se u mužů a žen v Saúdské Arábii významně liší. Journal of Saudi heart Association. http://dx.doi:10.1016/j.jsha.2015.05.202
30. Harris, W. S. & Thomas, R. M. Biologická variabilita krevních omega-3 biomarkerů. Clin. Biochem. 43, 338-340 (2010).
31. Harris, W. S., Varvel, S. A., Pottala, J. V., Warnick, G. R. & McConnell, J. P. Srovnávací účinky akutní dávky rybího oleje na hladiny omega-3 mastných kyselin v červených krvinkách versus plazma: Důsledky pro klinickou užitečnost. J. Clin. Lipidol. 7, 433-440 (2013).
32. Metcalf, R. G. a kol. Vztah mezi krví a atriálními mastnými kyselinami u pacientů podstupujících operaci srdečního bypassu. Dopoledne. J. Clin. Nutr. 91, 528-534 (2010).
33. Fenton, J. I., Gurzell, E. A., Davidson, E. A. & Harris, W. S. PUFA červených krvinek odrážejí fosfolipidové PUFA složení hlavních orgánů. Prostagl. Leukot. Essent. Tlustý. Kyseliny. 112, 12-23 (2016).
34. Harris, W. S., Del Gobbo, L. & Tintle, N. L. Index omega-3 a relativní riziko úmrtnosti na koronární srdeční choroby: Odhad z 10 kohortových studií. Ateroskleróza. 262, 51-54 (2017).
35. Kleber, M. E., Delgado, G. E., Lorkowski, S., Marz, W. & von Schacky, C. Omega-3 mastné kyseliny a mortalita u pacientů odeslaných na koronarografii. Ludwigshafenská studie rizik a kardiovaskulárního zdraví. Ateroskleróza. 252, 175-181 (2016).
36. Harris, W. S., Tintle, N. L., Etherton, M. R. & Vasan, R. S. Hladiny omega-3 mastných kyselin s dlouhým řetězcem v erytrocytech jsou nepřímo spojeny s úmrtností as výskytem kardiovaskulárních onemocnění: The Framingham Heart Study. J. Clin. Lipidol. 12, 718-727 (2018).
37. Folch, J., Lees, M. & Stanley, G. H. S. Jednoduchá metoda pro izolaci a čištění celkových lipidů ze zvířecích tkání. J. Biol. Chem. 226, 497-509 (1957).
38. Moilanen, T. & Nikkari, T. Vliv skladování na složení mastných kyselin lidského séra. Clin. Chim. Acta. 114, 111-116 (1981).