Effekter af koffein på EEG Theta/Beta-forhold og kognitiv kontrol

BAGGRUND OG FORSKNINGSMÅL

Kognitiv kontrol er en væsentlig del af kognitiv funktion, der tillader top-down, målstyret kontrol over stimulus-drevne, automatiske processer. Hjernens præfrontale cortex (PFC) spiller sandsynligvis en vigtig rolle i mange aspekter af kognitiv kontrol, herunder måldrevet opmærksomhed, arbejdshukommelse og følelsesregulering. Tidligere EEG-studier, der undersøger kognitiv kontrol, har identificeret en potentiel elektrofysiologisk markør for PFC-medieret kognitiv kontrol. Disse undersøgelser har fundet ud af, at forholdet mellem EEG-målte theta- og beta-hjerneoscillationer er forhøjet hos børn med ADHD (som generelt oplever dårlig kognitiv kontrol) og hos uselekterede voksne med dårlig opmærksomhedskontrol. Dette theta/beta-forhold (TBR) menes at afspejle, i hvilket omfang præfrontal hjerneaktivitet udviser regulatorisk kontrol over mere posteriore og subkortikale hjerneområder, hvilket har gjort dette mål nyttigt til diagnosticering og behandling af lidelser relateret til dårlig kognitiv kontrol som f.eks. ADHD.

I denne undersøgelse foreslår efterforskerne en ny metode til yderligere at validere TBR som en elektrofysiologisk markør for kognitiv kontrol ved at administrere koffein til deltagerne. Koffein er almindeligt kendt for at forbedre forskellige aspekter af kognitiv kontrol, hvilket forventes at gå sammen med et fald i TBR.

Det er vigtigt, at kognitiv kontrol drager fordel af både vedligeholdelsen af ​​opgaverelevante repræsentationer og den fleksible opdatering af disse repræsentationer. Disse kognitive kontrolfunktioner kan være afhængige af noget forskellige områder af hjernen. Nemlig, hvor vedligeholdelse af opgaverelevante repræsentationer kan være mere afhængige af PFC-funktion, kan den fleksible opdatering af disse repræsentationer stole mere på dopaminerg aktivitet i striatum. Theta/beta-forholdet som en markør for PFC-aktivitet kan således specifikt afspejle opgaverelevant vedligeholdelse af information, og kontrast af dette EEG-mål til et mål for striatal dopaminaktivitet kan kaste mere lys over arten af ​​TBR. I den nuværende undersøgelse vil efterforskerne gøre det ved at måle spontane øjenblinkhastigheder (EBR), som har vist sig at være følsomme over for dopaminerg striatal aktivitet.

Det første mål med nærværende undersøgelse vil være yderligere at validere theta/beta ratio (TBR) som en elektrofysiologisk markør for PFC-medieret kognitiv kontrol ved at administrere koffein til raske deltagere. Forskerne forventer, at (1a) theta/beta-forholdet vil være omvendt relateret til kognitiv kontrolpræstation (opmærksomhedsfokus, opmærksomhedsforskydning, arbejdshukommelse; målt med TACT og N-back; muligvis hovedsageligt relateret til TACT-fokuspræstation), (1b) koffein vil øge kognitiv kontrol ydeevne, (1c) koffein vil mindske theta/beta ratio, og at (1d) disse gavnlige effekter af koffein på kognitive præstationer vil blive medieret af dette fald i theta/beta ratio.

Det andet formål med denne undersøgelse vil være at undersøge, om TBR og EBR differentielt modererer koffeins effekt på kognitiv kontrol. Da disse mål sandsynligvis afspejler aktiviteten af ​​forskellige hjerneområder, kan de nemlig forudsige forskellige (muligvis omvendt U-formede) effekter af koffein afhængigt af deres baseline aktivitet. For eksempel kan det kun være gavnligt at øge striatal dopamin gennem koffeinforbrug, når den initiale striatal dopaminerge aktivitet (som afspejlet af baseline EBR) ikke er for høj i første omgang, fordi når det er det, kan dette resultere i en stigning i distraherbarhed, snarere end forbedret kognitiv fleksibilitet. Som sådan forventer efterforskerne, at (2a) baseline TBR vil moderere virkningerne af koffein på kognitiv kontrol ydeevne (muligvis hovedsageligt TACT fokus ydeevne), og at (2b) baseline EBR vil moderere virkningerne af koffein på kognitiv kontrol funktion (muligvis primært TACT skiftende ydeevne).

Det tredje mål med denne undersøgelse vil være at undersøge koffeins virkninger på følelsesmæssig behandling og TBR's rolle heri. Det er vigtigt, at koffein traditionelt er blevet anset for at øge trusselsrelateret behandling og angst, især i højere doser. Et stigende antal dyreforsøg viser dog, at små doser koffein faktisk kan være angstdæmpende. Til dels kan dette skyldes en stigning i kognitive og opmærksomhedsmæssige kontrolevner. Nemlig, selvom relationen er kompleks, påvirker angst og opmærksomhedskontrol hinanden gensidigt. Angst kan øge årvågenheden for trusselsrelateret behandling, hvorimod opmærksomhedskontrol kan beskytte mod dette. En optimal dosis koffein kunne teoretisk set øge opmærksomhedskontrollen i det omfang, at dette reducerer overbearbejdning af trusselsrelateret information. De dosisafhængige virkninger af dopamin, nor-adrenalin og koffein forudsiger dog, at denne optimale dosis afhænger af basale niveauer af disse transmittere og derfor muligvis af angst, som er forbundet med øget dopamin- og nor-adrenalinaktivitet. Den potentielle anvendelighed af moderate doser af koffein som et profylaktisk lægemiddel mod (opmærksomme symptomer på) angst kan så afhænge kritisk af en sådan mulig modererende påvirkning af angst. I denne undersøgelse undersøgte efterforskerne denne sammenhæng ved at tage højde for de modererende virkninger af egenskabsangst i virkningerne af koffein på følelsesmæssig behandling. Forskerne forventer, at (3a) højere TBR vil være relateret til øget interferens på EST, (3b) en moderat dosis koffein vil mindske følelsesmæssig interferens på EST, (3c) virkningerne af koffein på følelsesmæssig interferens vil blive medieret af en ændring i TBR, og at (3d) effekterne af koffein på følelsesmæssig interferens vil blive modereret af individuelle forskelle i karaktertræk angst.

Egenskabsangst vil blive målt via selvrapportering ved brug af STAI-t, der vil blive tilføjet som en kovariat i de analyser, hvor sammenhængen mellem TBR og AC undersøges. Endelig vil efterforskerne i denne undersøgelse undersøge flere andre mulige forvirrende faktorer i forholdet mellem koffeinforbrug og kognitiv kontrol, herunder selvrapporteringsmålinger af egenskabs- og tilstandskontrol, angst, søvnighed og ADHD-symptomer.

STUDERE DESIGN

Et dobbeltblindt, randomiseret, placebokontrolleret, cross-over forsøg. Efter en første træningssession vil deltagerne besøge laboratoriet to gange, adskilt af cirka en uge. I disse to laboratoriesessioner vil deltagerne oralt indtage en kapsel indeholdende 200 mg ren koffein (en tilsvarende mængde koffein findes i ca. 2 kopper kaffe) og en kapsel indeholdende et placebofyldstof (randomiseret og dobbeltblind administration). Blindning og randomisering af kapselallokering vil blive udført af apoteket på Leiden University Medical Center (LUMC).

DELTAGERE

Fyrre raske kvindelige frivillige (i alderen 18-26 år) vil deltage i denne undersøgelse. Deltagerne vil være temmelig naive over for koffeinforbrug (drikke ≤100 mg koffein, eller ca. en kop kaffe, om dagen), og vil blive bedt om at afholde sig fra koffein- og alkoholforbrug i 12 timer før starten af ​​laboratoriesessionerne. Deltagerne vil være studerende, der rekrutteres ved Leiden University gennem forskellige annoncer (f.eks. på universitetets campus). Deltagere, der har trukket sig fra undersøgelsen, vil, når det er muligt, blive erstattet af en anden tilfældigt udvalgt deltager. Til sådanne erstatningsdeltagere har LUMC-farmaceuten forberedt blindede kapsler indeholdende placebo og koffein i samme rækkefølge som den oprindelige deltager, som de erstatter.

PROCEDURER

Efter online screeningsprocedurer vil kvalificerede deltagere blive testet på samme tid på tre separate dage. Testsessioner vil finde sted mellem kl. 10.00 og 17.00 og varer cirka 2 timer pr. session. Deltagerne vil blive bedt om at afholde sig fra alkohol- og koffeinforbrug i 12 timer før forsøgets start. På den første testdag (trænings-)dag vil deltagerne udfylde spørgeskemaer, der vurderer demografi, egenskabsniveauer for opmærksomhedskontrol (ACS), trait angstniveauer (STAI trait subscale), sædvanlig søvnighed (ESS) og ADHD symptomer (ADHD Rating Scale-IV) . Ydermere vil der blive målt hviletilstands-EEG (8 minutter i skiftevis 1 minuts blokke med åbne/lukkede øjne) og spontan EBR (én øjenåben blok på 4 minutter). Derudover vil deltagerne blive fortrolige med de kognitive opgaver (TACT; N-Back; EST). Deltagerne vil gennemføre disse foranstaltninger for at reducere nyheds- eller læringseffekter i efterfølgende testsessioner. På hver testdag vil der blive administreret statslige spørgeskemaer (aktuel søvnighed, KSS; opmærksomhedskontrol, VAS; og angst, STAI state subscale) mellem hver 4 min (EBR) og 8 min (EEG) baseline måling og ved slutningen af ​​dagen (dvs. administreret to gange på den første træningsdag og tre gange på dagen 2/3 forbrugsdage).

Den anden testdag vil være cirka en uge efter den første testdag. Inden kapselindtagelse vil EEG og EBR blive målt. Deltagerne vil derefter modtage en kapsel indeholdende enten koffein (200 mg) eller placebo (dobbeltblind, randomiseret administration). Efter 30 minutters pause (da koffein tager omkring en halv time at blive aktiv), vil EBR og EEG blive målt igen. Endelig vil deltagerne fuldføre de samme kognitive opgaver, som de udførte på den første dag.

På den tredje testdag vil testprotokollen for den anden dag blive gentaget, med undtagelse af at den anden resterende koffein (200 mg) eller placebokapsel vil blive administreret.

KOGNITIVE STYREOPGAVER

Alle kognitive opgaver (TACT; N-Back; Emotional Stroop Task) programmeres og udføres på en computer ved hjælp af E-Prime (v2.0). De kognitive kontrolopgaver er beskrevet nedenfor.

1. To-faktor Attentional Control Task (TACT): TACT er en global/lokal kongruensopgave, som har til formål at måle opmærksomhedsfokusering og opmærksomhedsforskydning. I denne opgave får deltagerne vist en stor pil, der består af flere mindre pile, der peger i samme (kongruente) eller modsatte (inkongruente) retning. Deltagerne instrueres i at reagere på retningen af ​​den store pil eller mindre pile så hurtigt som muligt uden at lave for mange fejl. De kan gøre det ved at trykke på venstre eller højre piletast på et tastatur ved at bruge pege- og langfingeren på deres dominerende hånd. Før en pil vises, ser deltagerne en grå skærm i 500ms, hvorefter ordet "Large" i farven blå eller "Small" i farven gul vises i 500ms, hvilket angiver, hvilken pil deltagerne skal svare på. Efter en 250ms grå skærm vises pilen i midten af ​​skærmen, som forsvinder efter 2000ms, eller når der gives et svar. Ved hvert forsøg vises pilen i en lidt anden position for at sikre, at deltagerne ser på pilen i stedet for at fiksere på nogle få pixels på skærmen (hvilket i teorien kunne være tilstrækkeligt til at identificere pilenes retning).

   I den opmærksomhedsfokuserede del af opgaven gennemfører deltagerne to blokke med hver 52 forsøg. I den ene blok reagerer deltagerne kun på retningen af ​​den store pil, og i den anden blok reagerer deltagerne kun på retningen af ​​de mindre pile. TACT-fokuspræstation måles ved at trække RT'er på kongruente forsøg (dvs. forsøg, hvor ingen hæmning af distraktion af ikke-overvågede pile er nødvendig) fra RT'er på inkongruente forsøg (dvs. forsøg, hvor deltagerne skal hæmme deres reaktion på distraktionen af ikke-overvågede pile). Som sådan indikerer mindre forskelle i RT'er bedre fokusydelse. I opgavens opmærksomhedsforskydningsdel gennemfører deltagerne to blokke af 120 forsøg, adskilt af en pause på et minut, hvor retningen på pilen, som deltagerne skal svare på, ændres for hver sjette forsøg (dvs. 40 skift i alt) . TACT-skiftydelse beregnes ved at trække RT'er fra de sidste to forsøg før et opmærksomhedsskift fra RT'er på de første to forsøg efter et opmærksomhedsskifte (dvs. forsøg, hvor deltagerne flyttede deres opmærksomhed fra at se på større til mindre pile eller omvendt). Som sådan indikerer mindre forskelle i RT'er bedre skiftende ydeevne. De to forsøg før og efter et skift er altid inkongruente for at øge sværhedsgraden (og dermed sandsynligvis vagtomkostningerne) ved denne opgave. Rækkefølgen af ​​fokusblokke (dvs. store pile eller mindre pile først), og rækkefølgen af ​​først at fuldføre fokus- eller skiftblokke, udlignes i forhold til deltagerne. Forsøg, hvor deltagerne giver forkerte svar, eller usandsynligt langsomme eller hurtige svar, analyseres ikke yderligere.

2. N-Back-opgave: N-back-opgaven er en opgave, der vurderer forskellige arbejdshukommelsesprocesser. I N-Back-opgaven får deltagerne sekventielt vist bogstaver. Deltagerne skal angive, om det aktuelle bogstav matcher bogstavet vist n steder før, ved hjælp af 1 ("samme bogstav") eller 2 ("andet bogstav") på et tastatur. 1-ryg og 3-ryg opgaver blev administreret, da koffein sandsynligvis har den største indflydelse på 3-ryg opgaveudførelse, og måske ikke har stor indflydelse på 1-back og 2-back opgaveudførelse. For hver n-ryg tilstand vises 75 bogstaver i alt, hvoraf 25 (33%) er hits (dvs. forsøg, der blev vist n pladser tilbage). De første tre forsøg i hver blok er aldrig mål. Hvert bogstav vises i 500ms, som efterfølges af en 1500ms blank skærm. Deltagerne kan svare på brevet i hele dette 2000ms interval. Forud for hver n-rygtilstand modtager deltagerne instruktioner og eksempler på opgaven (under supervision af forskeren på træningsdagen), og gennemfører 21 træningsforsøg (7 hitforsøg), for at sikre sig, at de forstår opgaven. Rækkefølgen af ​​1-back og 3-back afslutning vil blive udlignet i forhold til deltagerne. Ydeevne måles ved at undersøge nøjagtighedsscore (% korrekte) og ved at undersøge RT'er på korrekt besvarede forsøg.
3. Emotional Stroop Task (EST): EST er en variant af den traditionelle Stroop-opgave (hvor deltagerne skal navngive farven på et ord, der er trykt i et andet farvenavn, f.eks. navngiv farven på ordet "rød" skrevet med blåt blæk). I EST vises følelsesladede billeder, hvorpå en farvet firkant er overlejret. Deltagerne skal reagere på firkantens farve og skal som sådan hæmme billedernes distraherende indflydelse. Billeder er valgt fra IAPS-databasen og er udvalgt baseret på deres balance- og ophidselsesvurderinger for at repræsentere tre billedforhold: neutral, negativ og positiv. For hver af billedbetingelserne vises 4 billeder (hver gang med firkanten på en anden placering: øverst eller nederst x venstre eller højre) 8 gange (dvs. 32 forsøg pr. betingelse, 96 forsøg i alt). Farven på firkanten er tilfældigt valgt blandt tre mulige muligheder (rød, gul eller blå) på hver prøve. Under hvert forsøg vises først et billede i 200ms, hvorefter en farvet firkant lægges oven på dette billede på en af ​​fire mulige steder. Deltagerne får derefter 1800 ms til at svare på farven på firkanten, hvilket de kan gøre ved hjælp af farvede knapper i en standard svarboks. Derefter vises en 2000ms grå skærm, hvorefter næste billede vises. Forud for selve opgaven gennemfører deltageren 24 øvelsesforsøg, hvor der vises neutrale billeder. Ydeevne på Emotional Stroop-opgaven måles ved at undersøge RT'er på de negative og positive tilstandsforsøg sammenlignet med RT'er på neutrale tilstandsforsøg på korrekt besvarede forsøg.

SPØRGESKEMAER

Alle egenskabsspørgeskemaer (ACS; STAI-t; ADHD Rating Scale-IV; ESS) programmeres og udfyldes på en computer ved hjælp af E-Prime (v2.0). Statsspørgeskemaer (STAI-s; VAS AC-s; KSS) udfyldes med pen og papir. Spørgeskemaerne er beskrevet nedenfor.

1. Attentional Control Scale (ACS): En modificeret hollandsk oversættelse af ACS vil blive administreret til deltagerne. ACS har til formål at måle træk opmærksomhedskontrol, som vurderet med 20 udsagn, der måler opmærksomhedsforskydning (f.eks. "Jeg kan hurtigt skifte fra en opgave til en anden"), opmærksomhedsfokus (f.eks. "Min koncentration er god, selvom der er musik i rum omkring mig") og fleksibel tankegang (f.eks. "Jeg har svært ved at komme på nye ideer hurtigt"). Deltagerne skal angive, i hvilket omfang udsagnene afspejler deres opmærksomhedskontrol på en 4-punkts skala, der spænder fra 1 ("næsten aldrig") til 4 ("altid").
2. State-Trait Anxiety Index (egenskabsunderskala; STAI-t): Trækskalaen for den hollandske STAI består af 20 punkter, der måler egenskabsangst (f.eks. "Jeg bekymrer mig for meget over noget, der virkelig ikke betyder noget"). Deltagerne kan svare på disse punkter ved hjælp af en 4-punkts vurderingsskala, der spænder fra 1 ("næsten aldrig") til 4 ("næsten altid").
3. ADHD Rating Scale-IV: En modificeret hollandsk oversættelse af ADHD Rating Scale-IV vil blive administreret til deltagerne. Dette spørgeskema består af 23 punkter, der måler ADHD-symptomer på hyperaktivitet/impulsivitet (f.eks. "Jeg føler mig rastløs") og uopmærksomhed (f.eks. "Jeg bliver hurtigt distraheret"). Deltagerne bliver bedt om at vurdere, i hvilket omfang punktet har været gældende for dem i løbet af de seneste 6 måneder, på en skala fra 0 ("Aldrig eller sjældent") til 3 ("Meget ofte").
4. Epworth Sleepiness Scale (ESS): ESS bruges som et mål for sædvanlig søvnighed. På ESS bliver deltagerne bedt om at vurdere, hvor sandsynligt det er, at de vil døse hen i otte sædvanlige og nylige situationer (f.eks. "Mens de ser fjernsyn"), ved at bruge en skala fra 0 ("Ville aldrig døse") til 3 ( "Stor chance for at døse").
5. State-Trait Anxiety Index (tilstandsunderskala; STAI-s): Den hollandske STAIs tilstandsskala består af 20 punkter, der måler, hvordan angste deltagere føler sig i dette øjeblik (f.eks. "Jeg føler mig rolig", "Jeg bekymrer mig"). Deltagerne kan svare på disse punkter ved hjælp af en 4-punkts vurderingsskala, der spænder fra 1 ("Slet ikke") til 4 ("Meget").
6. Karolinska Sleepiness Scale (KSS): KSS er en 9-punkts VAS, der vurderer subjektiv, øjeblikkelig søvnighed. Deltagerne bliver bedt om at rapportere, hvor opmærksomme eller søvnige de er på en skala fra 1 ("Meget opmærksom") til 9 ("Meget søvnig (kampsøvn)").
7. VAS AC-s: VAS opmærksomhedskontrolskalaen består af seks punkter, der vurderer deltagernes aktuelle følelser af opmærksomhedskontrol (f.eks. "Jeg har problemer med at koncentrere mig"). Deltagerne skal angive, i hvor høj grad emnet afspejler deres aktuelle opmærksomhedskontrol ved at markere 100 mm linjer, forankret med "Ikke overhovedet" og "Meget" på venstre og højre side.

EBR- OG EEG-MÅLING

1. Spontane øjenblinkhastigheder (EBR): Spontan EBR vil blive indsamlet på 4 min. øjeåben blok ved hjælp af vertikal EOG, som registrerer spændingsforskelle mellem to elektroder placeret over og under øjet. I disse 4 min. interval, vil deltagerne blive bedt om at se på et centralt punkt i rummet i en afslappet tilstand. Individuel EBR vil blive beregnet ved at dividere det samlede antal øjenblink i løbet af de 4 min. interval med 4.
2. Spontan EEG: Spontan EEG vil blive optaget i 8 min. kontinuerligt i skiftevis 1-min. blokke af øjne åbne/øjne lukkede optagelse. EEG-optagelser vil blive optaget på tværs af hovedbunden ved hjælp af 16 elektroder, placeret i henhold til det internationale 10/20-system, ved hjælp af ActiveTwo BioSemi-systemet. Elektroder vil blive placeret ved venstre og højre mastoid for offline re-reference af hovedbundssignalerne til gennemsnittet af mastoidsignalerne. For at måle øjen- og blinkbevægelser vil elektrookulogram (EOG) elektroder blive placeret over og under venstre øje (lodret EOG) og ekstern canthi af hvert øje (horisontal EOG). Offline databehandling vil blive udført i Brain Vision Analyzer V2.02. Et 0,1 Hz højpasfilter, 100 Hz lavpasfilter og 50 Hz notch-filter vil blive anvendt. Data vil blive analyseret i fire sekunders segmenter. Dataene vil automatisk blive korrigeret for øjenartefakter, og segmenter, der indeholder resterende artefakter, vil blive fjernet. En hurtig Fourier-transformation (med en opløsning på 0,25 Hz, ved hjælp af et hamming-vindue på 10%) vil blive anvendt til at beregne arealeffekttætheden for beta- (13-30 Hz) og theta- (4-7 Hz) frekvensbåndene. Effekttæthederne for de tre frontale elektroder beregnes i gennemsnit til mål for frontal beta og frontal theta effekttæthed og bruges til at beregne theta/beta-forhold, som vil blive log-transformeret i tilfælde af ikke-normalitet.

DATABEHANDLING

Afvigende fjernelse for hver kognitiv opgave vil blive udført på prøve-til-forsøg-basis (eksklusive usandsynligt hurtige og/eller langsomme svar) for hver deltager. Først vil en grov RT-fjernelse blive anvendt, hvorefter en mere sofistikeret fjernelse af yderforsøg vil blive gennemført. Baseret på tidligere undersøgelser med disse opgaver vil følgende forsøg blive fjernet:

1. TAKT: forsøg hurtigere end 200 ms eller langsommere end 1200 ms, hvorefter forsøg, der er gennemført hurtigere eller langsommere end 2,5 SD'er af den gennemsnitlige RT for den pågældende opgave, vil blive fjernet.
2. N-Back: forsøg hurtigere end 300ms vil blive fjernet.
3. EST: forsøg hurtigere end 300 ms eller langsommere end 1200 ms, hvorefter forsøg gennemført hurtigere eller langsommere end 2,5 SD'er af den gennemsnitlige RT for den pågældende opgave vil blive fjernet.

Der er nogle beviser for stabiliteten af ​​TBR og EBR over tid, hvilket er i overensstemmelse med den opfattelse, at disse markører afspejler stabile, egenskabslignende neurale processer. Indflydelsen af ​​statsafhængige omstændigheder på disse foranstaltninger er dog stadig ikke fuldt ud forstået. I denne undersøgelse vil baseline TBR og EBR blive målt på hver testdag, men kun en af ​​disse TBR og en af ​​disse EBR baseline mål vil blive brugt som egenskabslignende neural markør i moderationsanalyserne. Udvælgelsen af, hvilke af disse basismål, der vil blive brugt i moderationsanalyserne, er baseret på følgende regler:

1. Hvis efterforskerne finder, at TBR- eller EBR-baseline-mål på dag 1 er meget ens (gennemsnitlig sammenligning og/eller korrelation) med deres tilsvarende baseline-mål på dag 2 og dag 3, vil dag 1-baseline-målene blive brugt i moderationsanalyserne.
2. Hvis efterforskerne finder, at TBR- eller EBR-baseline-mål på dag 1 afviger meget fra deres tilsvarende baseline-mål på dag 2 ELLER dag 3, vil dag 1-baseline-målene blive brugt i moderationsanalyserne.
3. Hvis efterforskerne finder, at TBR- eller EBR-baseline-målinger på dag 1, dag 2 og dag 3 alle adskiller sig meget fra hinanden, vil dag 1-baseline-målene blive brugt i moderationsanalyserne.
4. Hvis efterforskerne finder, at TBR- eller EBR-baseline-målinger på dag 2 og dag 3 er meget ens, men adskiller sig meget fra deres tilsvarende baseline-målinger på dag 1, vil de gennemsnitlige baseline-mål på dag 2 og dag 3 blive brugt i moderationsanalyserne.