El ADN proviral como diana para el análisis de resistencia al VIH-1 (HIV)

Estudio observacional longitudinal prospectivo, el objetivo es observar y describir la prevalencia de mutaciones INRT, INNRT, Proteasa e INIS detectadas por ADN proviral en pacientes con falla virológica y bajo nivel de viremia.

Inclusión/Exclusión: Nuestro Estudio incluirá únicamente pacientes con VIH que hayan sido confirmados por el "Instituto de Salud Pública de Chile" (ISP-Chile). Los niños menores de 18 años están excluidos.

Número de Pacientes: Se incluirán un total de 1.200 pacientes en un periodo de tres años (Incluyendo justificación estadística, si procede).

1. - Solo los pacientes que hayan firmado el consentimiento informado serán admitidos en nuestro estudio.
2. - A los pacientes ingresados ​​se les tomará una muestra de sangre para una prueba de resistencia genotípica del VIH.
3. - de la historia clínica de cada paciente ingresado se tomarán algunos datos clínicos relevantes para interpretar los resultados tales como conteo de linfocitos T CD4, Carga Viral, fecha de diagnóstico de VIH, fecha de inicio de terapia además de número y tipo de tratamientos antirretrovirales
4. - A modo de control de genotipo, se tomará una segunda muestra de sangre cada año.

Descripción detallada

Detección de mutaciones de resistencia en el ADN proviral en la infección por VIH-1

Antecedentes La prueba genética del ADN proviral del VIH (HPD) para la resistencia a los medicamentos antirretrovirales es de gran utilidad para detectar mutaciones en pacientes en tratamiento antirretroviral que no han logrado niveles de carga viral indetectables o con bajo nivel de viremia (LLV).

HPD permite la detección de variantes resistentes circulantes y archivadas que no pudieron ser detectadas en el plasma.

HPD es independiente de la carga viral de los pacientes. Esto lo hace muy útil para estudios de resistencia primaria, ya que puede detectar mutaciones de resistencia en pacientes recién diagnosticados con cargas virales basales bajas (<1000 copias/mL).

HPD es recomendado por la European AIDS Clinical Society EACS para los casos en los que no hay ARN de VIH para el análisis (Barcelona, ​​octubre de 2015).

HPD puede analizar la resistencia a todos los medicamentos antirretrovirales actualmente disponibles en el mercado. Por tanto, con la innovación HPD podemos realizar las siguientes pruebas de resistencia genética: Tropismo VIH (Maraviroc), resistencia a Inhibidores de la Integrasa (Dolutegravir) y resistencia a Transcriptasa reversa/Proteasa (Abacavir).

Tamaño Muestra y Metodología

Durante un periodo de dos años estudiaremos una población de 1.200 pacientes. Estos incluyen todos los pacientes que hemos analizado en nuestro centro de VIH hasta diciembre de 2012. La metodología incluye la extracción de ácidos nucleicos, la amplificación de genes del VIH-1 que son dianas de interés terapéutico y la secuenciación por métodos de secuenciación tradicionales y de nueva generación.

Captación de Pacientes: un Total de 1.200 (400 por año)

Obtención de muestras de sangre: dos muestras: muestra al inicio y una muestra al final después de un año

Extracción de ADN y ARN viral:

Amplificación por RT-PCR:

Visualización de electroforesis en geles de agarosa

Envío de muestras a Macrogen para servicios de secuenciación

Secuenciación automática por método Sanger en Macrogen USA

Secuenciación por secuenciación profunda (NGS) en Chile o Macrogen USA

Análisis de secuencia

Análisis de calidad y montaje de secuencias en bruto en el software ReCall

Registro de mutaciones de interés clínico

Informe sobre la resistencia a los medicamentos antirretrovirales

Análisis bioestadístico

Informe de Resultados y Publicaciones

Resultados preliminares El análisis preliminar de 100 pacientes con carga viral <1.000 copias/mL, detectó un 10% de pacientes con mutaciones de resistencia a fármacos que inhiben la transcriptasa inversa y la proteasa viral. Esta valiosa información permitió una intervención terapéutica más temprana al cambiar el esquema de medicamentos antes de que alcancen niveles más altos de carga viral con la consecuente mejora en el manejo clínico.

Proyecto de Proyecciones Debido al éxito y aplicación inmediata de este estudio preliminar, creemos que es muy importante validar esta técnica como prueba genética de rutina diaria para pacientes de clínicas de VIH en el sistema de salud pública. El financiamiento permanente para esta prueba genética del VIH para el ADN proviral del VIH debe ser otorgado por el Ministerio de Salud del Gobierno de Chile.

En conclusión, en la actualidad HPD es una herramienta muy útil para estudiar el fracaso virológico y LLV para un cambio temprano de la terapia antirretroviral.