HIV-1 내성 분석을 위한 표적으로서의 프로바이러스 DNA (HIV)

전향적 종단 관찰 연구의 목적은 바이러스학적 실패 및 낮은 수준의 바이러스혈증이 있는 환자에서 프로바이러스 DNA에 의해 검출된 INRT, INNRT, 프로테아제 및 INIS 돌연변이의 유병률을 관찰하고 설명하는 것입니다.

포함/제외: 본 연구는 "Instituto de Salud Pública de Chile"(ISP-Chile)에서 확인된 HIV 환자만 포함합니다. 18세 미만의 어린이는 제외됩니다.

환자 수: 3년 동안 총 1,200명의 환자가 포함됩니다(적절한 경우 통계적 타당성 포함).

1. - 고지에 입각한 동의서에 서명한 환자만 본 연구에 참여할 수 있습니다.
2. - 입원 환자는 HIV 유전자형 저항성 검사를 위해 혈액 샘플을 채취합니다.
3. - 입원한 각 환자의 임상 기록에서 CD4 T 림프구 수, 바이러스 부하, HIV 진단 날짜, 치료 시작 날짜 및 항레트로바이러스 치료의 수와 유형과 같은 결과를 해석하기 위해 일부 관련 임상 데이터가 취해집니다.
4. - 유전자형 제어를 통해 매년 두 번째 혈액 샘플을 채취합니다.

상세 설명

HIV-1 감염에서 Proviral DNA의 저항 돌연변이 검출

배경 항레트로바이러스 약물에 대한 내성에 대한 유전자 검사 HIV 프로바이러스 DNA(HPD)는 검출할 수 없는 바이러스 부하 수준에 도달하지 못하거나 낮은 수준의 바이러스혈증(LLV)을 가진 항레트로바이러스 요법을 받는 환자의 돌연변이를 검출하는 데 매우 유용합니다.

HPD는 순환하는 내성 변이체를 검출할 수 있으며 혈장에서 검출할 수 없는 것을 보관합니다.

HPD는 환자의 바이러스 부하와 무관합니다. 이는 기준선 바이러스 부하가 낮은(<1,000 copies/mL) 최근에 진단받은 환자에서 내성 돌연변이를 감지할 수 있으므로 1차 내성 연구에 매우 유용합니다.

유럽 ​​AIDS 임상 학회(EACS)는 분석할 HIV RNA가 없는 경우에 HPD를 권장합니다(바르셀로나, 2015년 10월).

HPD는 현재 시장에서 구할 수 있는 모든 항레트로바이러스 약물에 대한 내성을 분석할 수 있습니다. 따라서 HPD 혁신을 통해 다음과 같은 유전적 저항성 테스트를 수행할 수 있습니다. HIV Tropism(Maraviroc), 인테그라제 억제제(Dolutegravir)에 대한 저항성 및 Transcriptase reversa/Proteasa(Abacavir)에 대한 저항성.

크기 샘플 및 방법론

2년의 기간 동안 우리는 1,200명의 환자 집단을 연구할 것입니다. 여기에는 2012년 12월까지 HIV 센터에서 분석한 모든 환자가 포함됩니다. 방법론에는 핵산 추출, 치료적 관심 대상인 HIV-1 유전자의 증폭 및 전통적 및 신세대 시퀀싱 방법에 의한 시퀀싱이 포함됩니다.

환자 모집: 총 1,200명(연간 400명)

혈액 샘플 채취: 2개 샘플: 처음에 샘플을 채취하고 1년 후 끝까지 샘플을 채취합니다.

DNA 및 바이러스 RNA 추출:

RT-PCR 증폭:

아가로스 겔에서 전기영동 시각화

시퀀싱 서비스를 위해 Macrogen에 샘플 보내기

Macrogen USA의 Sanger 방법에 의한 자동 시퀀싱

칠레 또는 Macrogen USA의 딥 시퀀싱(NGS)에 의한 시퀀싱

시퀀스 분석

소프트웨어 ReCall에서 원시 시퀀스의 품질 분석 및 어셈블

임상적 관심 돌연변이 등록

항레트로바이러스제 내성 보고

생물 통계학적 분석

결과 보고서 및 간행물

예비 결과 바이러스 부하가 1,000 copies/mL 미만인 100명의 환자에 대한 예비 분석에서 환자의 10%가 역전사 효소 및 바이러스 프로테아제를 억제하는 약물에 대한 저항성 돌연변이가 있음을 발견했습니다. 이 귀중한 정보는 결과적으로 임상 관리의 개선으로 더 높은 수준의 바이러스 부하에 도달하기 전에 약물 체계를 변경하여 초기 치료 개입을 가능하게 했습니다.

프로젝션 프로젝트 이 예비 연구의 성공과 즉각적인 적용으로 인해 공중 보건 시스템에서 HIV 클리닉 환자를 위한 일상적인 유전자 검사로서 이 기술을 검증하는 것이 매우 중요해졌습니다. HIV 프로바이러스 DNA에 대한 유전적 HIV 테스트를 위한 영구 자금은 칠레 정부의 보건부가 제공해야 합니다.

결론적으로 현재 HPD는 항레트로바이러스 요법의 조기 변화를 위해 바이러스학적 부전과 LLV를 연구하는 데 매우 유용한 도구이다.