Proviraal DNA als doelwit voor hiv-1-resistentieanalyse (HIV)

Een prospectieve longitudinale observationele studie, met als doel het observeren en beschrijven van de prevalentie van INRT-, INNRT-, protease- en INIS-mutaties gedetecteerd door proviraal DNA bij patiënten met virologisch falen en lage viremie.

Opname/uitsluiting: Onze studie omvat alleen patiënten met hiv die zijn bevestigd door "Instituto de Salud Pública de Chile" (ISP-Chili). Kinderen jonger dan 18 jaar zijn uitgesloten.

Aantal patiënten: In een periode van drie jaar zullen in totaal 1.200 patiënten worden opgenomen (inclusief statistische onderbouwing, indien van toepassing).

1. - Alleen patiënten die een geïnformeerde toestemming hebben ondertekend, worden toegelaten tot onze studie.
2. - Bij de opgenomen patiënten wordt bloed afgenomen voor een HIV genotypische resistentietest.
3. - uit het klinisch dossier van elke opgenomen patiënt zullen enkele relevante klinische gegevens worden gehaald om de resultaten te interpreteren, zoals het aantal CD4-T-lymfocyten, de virale belasting, de datum van de hiv-diagnose, de datum van aanvang van de therapie, naast het aantal en het type behandelingen met antiretrovirale middelen
4. - Bij wijze van genotypecontrole wordt jaarlijks een tweede bloedstaal afgenomen.

gedetailleerde beschrijving

Detectie van resistentiemutaties in proviraal DNA bij hiv-1-infectie

Achtergrond De genetische test HIV-proviraal DNA (HPD) voor resistentie tegen antiretrovirale geneesmiddelen is zeer nuttig om mutaties op te sporen bij patiënten die antiretrovirale therapie ondergaan en die geen ondetecteerbare virale ladingsniveaus hebben bereikt of met lage viremie (LLV).

HPD maakt de detectie van circulerende resistente varianten mogelijk en archiveert die niet in het plasma konden worden gedetecteerd.

HPD is onafhankelijk van de viral load van patiënten. Dit maakt het zeer nuttig voor onderzoeken naar primaire resistentie, aangezien het resistentiemutaties kan detecteren bij recent gediagnosticeerde patiënten met een lage virale belasting bij aanvang (<1.000 kopieën/ml).

HPD wordt aanbevolen door de European AIDS Clinical Society EACS voor gevallen waarin er geen HIV-RNA voor analyse is (Barcelona, ​​oktober 2015).

HPD is in staat om resistentie te analyseren tegen alle antiretrovirale geneesmiddelen die momenteel op de markt verkrijgbaar zijn. Daarom kunnen we met de HPD-innovatie de volgende genetische resistentietesten uitvoeren: HIV-tropisme (Maraviroc), resistentie tegen Integrase-remmers (Dolutegravir) en resistentie tegen Transcriptase reversa/Proteasa (Abacavir).

Maatsteekproef en methodologie

Gedurende twee jaar gaan we een populatie van 1.200 patiënten bestuderen. Dit zijn alle patiënten die we tot december 2012 in ons hiv-centrum hebben geanalyseerd. De methodologie omvat nucleïnezuurextractie, amplificatie van HIV-1-genen die doelwitten van therapeutisch belang zijn en sequentiebepaling door middel van traditionele en nieuwe generatie sequentiebepalingsmethoden.

Patiëntenwerving: in totaal 1.200 (400 per jaar)

Afnemen van bloedmonsters: twee monsters: monster tot het begin en één monster tot het einde na een jaar

DNA- en virale RNA-extractie:

RT-PCR-amplificatie:

Visualisatie van elektroforese in agarosegels

Monsters naar Macrogen sturen voor sequencing-services

Automatische sequencing volgens de Sanger-methode in Macrogen USA

Sequentiebepaling door diepe sequencing (NGS) in Chili of Macrogen USA

Sequentie analyse

Kwaliteitsanalyse en assemblage van ruwe sequenties in software ReCall

Register van mutaties van klinisch belang

Rapport over resistentie tegen antiretrovirale middelen

Biostatistische analyse

Resultatenrapport en publicaties

Voorlopige resultaten Voorlopige analyse van 100 patiënten met een virale belasting <1.000 kopieën/ml, detecteerde 10% van de patiënten met mutaties van resistentie tegen geneesmiddelen die reverse transcriptase en virale protease remmen. Deze waardevolle informatie maakte eerdere therapeutische interventie mogelijk door het medicatieschema te wijzigen voordat ze hogere niveaus van virale belasting bereiken, met als gevolg verbetering van de klinische behandeling.

Prognoses Project Vanwege het succes en de onmiddellijke toepassing van deze voorbereidende studie, geloven we dat het erg belangrijk is geworden om deze techniek te valideren als een dagelijkse routine genetische test voor HIV-kliniekpatiënten in het openbare gezondheidssysteem. Permanente financiering voor deze genetische hiv-test voor hiv-proviraal DNA moet worden verstrekt door het ministerie van Volksgezondheid, de regering van Chili.

Concluderend, op dit moment is HPD een zeer nuttig hulpmiddel om virologisch falen en LLV te bestuderen, met het oog op een vroege verandering van de antiretrovirale therapie.