Provirale DNA als Ziel für die HIV-1-Resistenzanalyse (HIV)

Ziel dieser prospektiven longitudinalen Beobachtungsstudie ist die Beobachtung und Beschreibung der Prävalenz von INRT-, INNRT-, Protease- und INIS-Mutationen, die durch provirale DNA bei Patienten mit virologischem Versagen und niedriger Virämie nachgewiesen werden.

Einschluss/Ausschluss: In unsere Studie werden nur Patienten mit HIV aufgenommen, die vom „Instituto de Salud Pública de Chile“ (ISP-Chile) bestätigt wurden. Kinder unter 18 Jahren sind ausgeschlossen.

Anzahl der Patienten: Insgesamt werden 1.200 Patienten in einem Zeitraum von drei Jahren eingeschlossen (ggf. mit statistischer Begründung).

1. - Nur Patienten, die eine Einverständniserklärung unterschrieben haben, werden zu unserer Studie zugelassen.
2. - Den aufgenommenen Patienten wird eine Blutprobe für einen genotypischen HIV-Resistenztest entnommen.
3. - Aus der Krankenakte jedes aufgenommenen Patienten werden einige relevante klinische Daten entnommen, um die Ergebnisse zu interpretieren, wie z. B. CD4-T-Lymphozytenzahl, Viruslast, Datum der HIV-Diagnose, Datum des Therapiebeginns sowie Anzahl und Art der antiretroviralen Behandlungen
4. - Zur Genotypkontrolle wird jährlich eine zweite Blutprobe entnommen.

detaillierte Beschreibung

Nachweis von Resistenzmutationen in proviraler DNA bei einer HIV-1-Infektion

Hintergrund Der genetische Test von HIV-proviraler DNA (HPD) auf Resistenz gegen antiretrovirale Medikamente ist sehr nützlich, um Mutationen bei Patienten unter antiretroviraler Therapie nachzuweisen, die keine nicht nachweisbaren Viruslastniveaus erreicht haben oder mit niedriger Virämie (LLV).

HPD erlaubt den Nachweis zirkulierender resistenter Varianten und archiviert, die im Plasma nicht nachgewiesen werden konnten.

HPD ist unabhängig von der Viruslast der Patienten. Dies macht es sehr nützlich für Studien zur Primärresistenz, da es Resistenzmutationen bei kürzlich diagnostizierten Patienten mit niedriger Ausgangsviruslast (<1.000 Kopien/ml) nachweisen kann.

HPD wird von der European AIDS Clinical Society EACS für Fälle empfohlen, in denen keine HIV-RNA zur Analyse vorhanden ist (Barcelona, ​​Oktober 2015).

HPD ist in der Lage, Resistenzen gegen alle derzeit auf dem Markt erhältlichen antiretroviralen Medikamente zu analysieren. Daher können wir mit der HPD-Innovation folgende genetische Resistenztests durchführen: HIV-Tropismus (Maraviroc), Resistenz gegen Integrase-Inhibitoren (Dolutegravir) und Resistenz gegen Transcriptase reverse/Proteasa (Abacavir).

Größenprobe und Methodik

Über einen Zeitraum von zwei Jahren werden wir eine Population von 1.200 Patienten untersuchen. Dazu gehören alle Patienten, die wir bis Dezember 2012 in unserem HIV-Zentrum analysiert haben. Die Methodik umfasst die Nukleinsäureextraktion, die Amplifikation von HIV-1-Genen, die Ziele von therapeutischem Interesse sind, und die Sequenzierung mit traditionellen und Sequenzierungsmethoden der neuen Generation.

Patientenrekrutierung: insgesamt 1.200 (400 pro Jahr)

Blutentnahme: zwei Proben: Probe zu Beginn und eine Probe zum Ende nach einem Jahr

Extraktion von DNA und viraler RNA:

RT-PCR-Amplifikation:

Elektrophorese-Visualisierung in Agarosegelen

Senden von Proben an Macrogen für Sequenzierungsdienste

Automatische Sequenzierung nach der Sanger-Methode in Macrogen USA

Sequenzierung durch Deep Sequencing (NGS) in Chile oder Macrogen USA

Sequenzanalyse

Qualitätsanalyse und Zusammenstellung von Rohsequenzen in der Software ReCall

Register der Mutationen von klinischem Interesse

Bericht über Resistenzen gegen antiretrovirale Medikamente

Biostatistische Analyse

Ergebnisbericht und Publikationen

Vorläufige Ergebnisse Bei einer vorläufigen Analyse von 100 Patienten mit einer Viruslast von < 1.000 Kopien/ml wurden 10 % der Patienten mit Mutationen oder Resistenzen gegen Arzneimittel nachgewiesen, die die reverse Transkriptase und die virale Protease hemmen. Diese wertvollen Informationen ermöglichten eine frühere therapeutische Intervention durch Änderung des Arzneimittelschemas, bevor sie eine höhere Viruslast erreichen, mit einer daraus resultierenden Verbesserung des klinischen Managements.

Projektionsprojekt Aufgrund des Erfolgs und der sofortigen Anwendung dieser Vorstudie glauben wir, dass es sehr wichtig wird, diese Technik als tägliche routinemäßige genetische Untersuchung für HIV-Klinikpatienten im öffentlichen Gesundheitssystem zu validieren. Die dauerhafte Finanzierung dieses genetischen HIV-Tests auf HIV-provirale DNA sollte vom Gesundheitsministerium der chilenischen Regierung gewährt werden.

Zusammenfassend lässt sich sagen, dass HPD derzeit ein sehr nützliches Instrument ist, um virologisches Versagen und LLV zu untersuchen, um eine frühzeitige Änderung der antiretroviralen Therapie zu ermöglichen.