DNA proviral como alvo para análise de resistência ao HIV-1 (HIV)

Estudo prospectivo observacional longitudinal, cujo objetivo é observar e descrever a prevalência das mutações INRT, INNRT, Protease e INIS detectadas pelo DNA proviral em pacientes com falência virológica e baixo nível de viremia.

Inclusão/Exclusão: Nosso estudo incluirá apenas pacientes com HIV confirmados pelo "Instituto de Salud Pública de Chile" (ISP-Chile). Crianças menores de 18 anos estão excluídas.

Número de Pacientes: Um total de 1.200 pacientes serão incluídos em um período de três anos (Incluindo justificativa estatística, se for o caso).

1. - Somente os pacientes que assinaram o consentimento informado serão admitidos em nosso estudo.
2. - Aos pacientes internados será coletada amostra de sangue para teste de resistência genotípica do HIV.
3. - da ficha clínica de cada paciente internado, serão retirados alguns dados clínicos relevantes para a interpretação dos resultados, como contagem de linfócitos T CD4, Carga Viral, data do diagnóstico de HIV, data de início da terapia, além do número e tipo de tratamentos antirretrovirais
4. - Para controle genotípico, uma segunda amostra de sangue será coletada a cada ano.

Descrição detalhada

Detecção de Mutações de Resistência no DNA Proviral na Infecção por HIV-1

Antecedentes O teste genético DNA proviral do HIV (HPD) para resistência aos antirretrovirais é muito útil para detectar mutações em pacientes sob terapia antirretroviral que falharam em atingir níveis de carga viral indetectáveis ​​ou com baixo nível de viremia (LLV).

HPD permite a detecção de variantes resistentes circulantes e arquivadas que não puderam ser detectadas no plasma.

HPD é independente da carga viral dos pacientes. Isso o torna muito útil para estudos de resistência primária, pois pode detectar mutações de resistência em pacientes recentemente diagnosticados com cargas virais basais baixas (<1.000 cópias/mL).

A HPD é recomendada pela European AIDS Clinical Society EACS para casos em que não há RNA do HIV para análise (Barcelona, ​​outubro de 2015).

O HPD é capaz de analisar a resistência a todos os medicamentos antirretrovirais atualmente disponíveis no mercado. Portanto, com a inovação HPD podemos realizar os seguintes testes de resistência genética: HIV Tropismo (Maraviroc), resistência aos Inibidores da Integrase (Dolutegravir) e resistência à Transcriptase reversa/Proteasa (Abacavir).

Tamanho Amostra e Metodologia

Durante um período de dois anos, estudaremos uma população de 1.200 pacientes. Isso inclui todos os pacientes que analisamos em nosso centro de HIV até dezembro de 2012. A metodologia inclui extração de ácidos nucléicos, amplificação de genes do HIV-1 que são alvos de interesse terapêutico e sequenciamento por métodos tradicionais e de nova geração.

Recrutamento de pacientes: um total de 1.200 (400 por ano)

Obtenção de amostras de sangue: duas amostras: amostra no início e uma amostra no final após um ano

Extração de DNA e RNA viral:

Amplificação RT-PCR:

Visualização por eletroforese em géis de agarose

Envio de amostras para a Macrogen para serviços de sequenciamento

Sequenciamento automático pelo método Sanger na Macrogen USA

Sequenciamento por sequenciamento profundo (NGS) no Chile ou Macrogen USA

Análise de Sequência

Análise de qualidade e montagem de sequências brutas no software ReCall

Registro de mutações de interesse clínico

Relatório sobre a resistência aos medicamentos anti-retrovirais

Análise bioestatística

Relatório de Resultados e Publicações

Resultados preliminares A análise preliminar de 100 pacientes com carga viral <1.000 cópias/mL detectou 10% de pacientes com mutações de resistência a drogas que inibem a transcriptase reversa e a protease viral. Esta informação valiosa permitiu uma intervenção terapêutica mais precoce, alterando o esquema medicamentoso antes de atingirem níveis mais elevados de carga viral com consequente melhoria da gestão clínica.

Projeto Projeções Devido ao sucesso e aplicação imediata deste estudo preliminar, acreditamos que se tornou muito importante validar esta técnica como teste genético de rotina diária para pacientes de HIV em clínicas do sistema público de saúde. O financiamento permanente para este teste genético de HIV para o DNA proviral do HIV deve ser dado pelo Ministério da Saúde, Governo do Chile.

Em conclusão, presentemente, o HPD é uma ferramenta muito útil para estudar a falência virológica e o LLV para uma mudança precoce da terapia anti-retroviral.