Shigella Sonnel O-SPC/rBRU konjugaattirokote

Tämän Shigella sonnei O-SP-ydinkonjugaattirokotteen aktiivinen ainesosa on sakkaridi-proteiinikonjugaatti, joka koostuu S. sonnei LPS:n fragmentista. Sakkaridikomponentti koostuu keskimäärin 3,5 toistoyksiköstä O-SP:tä plus LPS:n (O-SPC) ydinalueesta. O-SPC on sitoutunut kovalenttisesti Clostridium difficilen rekombinanttiseen ei-toksiseen eksoproteiiniin B.

Tämän tutkimuksen vaiheen tavoitteena on selvittää, onko tämä rokote turvallinen ja voiko se aiheuttaa IgG-vasta-ainetyyppispesifisen immuniteetin shigelloosia vastaan ​​aikuisilla. Yleisenä tavoitteena on määrittää, voiko tämä rokote saada aikaan korkeampia IgG-vasta-ainetasoja kuin aiemmat kokeelliset rokotteet, jotka on valmistettu täyspitkällä O-SP:llä ja joiden on osoitettu olevan >70 % tehokkaita vähintään 3-vuotiailla lapsilla, indusoimaan tyyppiä. -spesifinen immuniteetti shigelloosia vastaan ​​nuoremmilla lapsilla.

Israelissa rekrytoidaan kuusikymmentä 18–49-vuotiasta tervettä aikuista. Vapaaehtoiset rokotetaan satunnaisesti yhdellä i.m. 10 tai 25 mikrogrammaa tutkittavaa konjugaattirokotetta. Paikallisia ja systeemisiä reaktioita tarkkaillaan 30 minuutin kohdalla, ja vapaaehtoisia neuvotaan mittaamaan lämpötilansa ja tutkimaan pistoskohta punoituksen ja turvotuksen varalta ja täyttämään kyselylomake kello 6, tuntia ja päivittäin 7 päivän ajan rokotuksen jälkeen. Vapaaehtoiset vierailevat klinikalla 24 tai 48 tuntia injektion jälkeen ja aina kun he sitä pyytävät. Tutkimus aloitetaan 5 vapaaehtoisella, joille injektoidaan 10 ug:n annos. Jos vakavia haittavaikutuksia ei esiinny, 5 vapaaehtoista, joille on ruiskutettu 25 ug:n annos. Jos vakava haittavaikutus ilmenee yhdellä viidestä vapaaehtoisesta kummassakin ryhmässä, 5 muuta injektoidaan tällä annoksella. Jos vakavia haittavaikutuksia ei esiinny, tutkimus jatkuu. Jos ilmenee vielä yksi vakava reaktio, tutkimus keskeytetään ja IRB ja FDA arvioivat sen uudelleen.

Rokotteen aiheuttamat vasta-aineet mitataan 1 ja 6 kuukauden kuluttua immunisoinnista, ja niitä verrataan aiempien S. sonnei -konjugaattirokotteidemme aiheuttamiin vasta-aineisiin.

On olemassa joukko todisteita siitä, että kriittinen taso seerumin IgG-vasta-ainetta LPS:n O-spesifistä polysakkarididomeenia vastaan ​​antaa tyyppispesifisen immuniteetin S. sonneille sekä muille Shigella-taudeille:

1. Shigelloosia havaitaan harvoin 4–6 kuukauden ikäisillä pikkulapsilla. Ilmeisin selitys tälle on, että äidistä peräisin oleva seerumin IgG tarjoaa tämän immuniteetin;
2. On olemassa ikään liittyvä IgG-anti-LPS-vasta-aineiden kehittyminen, jota monissa tapauksissa eivät indusoi homologiset bakteerit, vaan ei-patogeeniset ristireagoivat enterobakteerit;
3. Korkein ilmaantuvuus, sairastuvuus ja kuolleisuus esiintyvät 6 kuukauden - 6 vuoden iässä, jolloin äidistä peräisin oleva seerumin anti-O-SP on vähentynyt ja luonnollisesti peräisin olevia vasta-aineita ei ole vielä ilmaantunut;
4. Yksi S. sonnei-rEPA-konjugaatin injektio osoitti merkittävän suojan shigelloosia vastaan ​​Israelin puolustusvoimien sotilaissa. Rokotetut, joille kehittyi shigelloosi, osoittivat merkittävästi alhaisempia seerumin IgG-vasteita homologiselle LPS:lle kuin niillä, joilla ei. Konjugaattirokotteen indusoima korkea vasta-ainetaso osoittaa positiivisen korrelaation seerumin IgG-anti-LPS-tasojen ja immuniteetin välillä S. sonnei -infektiota vastaan;
5. Vaiheen 1 ja vaiheen 2 tutkimusten jälkeen, jotka osoittivat turvallisuutta ja ikään liittyvää immunogeenisuutta, tehtiin kaksoissokkoutettu satunnaistettu ja rokotekontrolloitu vaiheen 3 S. sonnei- ja S. flexneri tyypin 2a O-spesifisten polysakkaridi (O-SP) -proteiinikonjugaattien arviointi. suoritettiin 1-4-vuotiaiden keskuudessa Israelissa.

S. sonnei -konjugaatin saajilla osoitettiin 71,1 %:n tehokkuus 3-4-vuotiailla, mutta tehoa ei osoitettu S. flexneri 2a:n saajilla. Kummallakaan rokotteella ei ollut tilastollisesti merkitsevää tehoa 1-3-vuotiailla. Seerumin IgG anti-O-SP:n tasot olivat kohonneet lasten saaman rokotteen mukaan, mutta G.M. tasot laskivat nopeasti useita kuukausia viimeisen injektion jälkeen. Tulkintamme on, että Shigella-konjugaattien ikään liittyvä tehokkuus johtui konjugaatin aiheuttamista O-SP-vasta-ainetasoista. Sen mukaisesti olemme kehittäneet menetelmän lisätä konjugaattien immunogeenisyyttä lähestyäkseen Israelin sotilaiden vasta-ainetasoja, joiden on osoitettu olevan S. sonnei O-SP:n suojaamia.

Pienimolekyyliset O-SP-ydinfragmentit (O-SPC) eristettiin S. sonnei LPS:stä ja sidottiin pelkistävissä päistään kantajaproteiiniin. O-SPC-konjugaatit käyttivät oksiimisidoksia S. sonnei -sakkaridien pelkistävissä päissä olevien terminaalisten Kdo-tähteiden ja kantajaan sitoutuneiden aminooksilinkkereiden välillä. Kytkentäreaktio suoritettiin neutraalissa pH:ssa ja huoneenlämpötilassa. Kantajaproteiini oli mutantti, myrkytön Clostridium difficile -eksotoksiini B. IgG-vasta-ainetasot, jotka tämä uusi S. sonnei O-SPC-konjugaatti indusoi nuorissa ulkosiitoshiirissä, olivat merkittävästi korkeammat kuin O-SP-konjugaattien aiheuttamat.