Vérvizsgálat petefészekrákhoz kapcsolódó autoantitestek kimutatására

Mivel a normál sejt mutációi, amelyek rosszindulatú daganathoz vezetnek, a sejtek szerkezetének és működésének megváltozásával járnak, feltételezhető, hogy az immunrendszer e változások egy részét antigéndeterminánsként ismerte fel, amelyre reagálni kell. A kutatók hosszú éveken keresztül próbáltak különbséget tenni a rákos betegek és az egészséges populáció között a specifikus autoantitestek szintjének különbsége alapján. Az egészséges populációban az autoantitestek mennyiségének alapértékét határoztuk meg, és a betegpopulációban statisztikailag szignifikánsan magasabb autoantitestszinttel kellett rendelkezni. Az autoantitestek különböző szintű jelenléte minden populációban nagyon megnehezítette ezeknek a specifikusan megkülönböztető antitesteknek a megtalálását. A mai napig egyetlen specifikus autoantitest sem tesz különbséget az egészséges és a rákos betegek között (ellentétben az autoimmun betegségekkel, ahol a specifikus autoantitestek csak a betegekben találhatók nagyon magas szinten).

Munkánk feltételezi, hogy a specifikus Autoantitestek expressziós szintjét meg kell változtatni rák esetén, így ezek a változások jelezhetik a rák jelenlétét/hiányát.

Ebben a kísérleti protokollban a petefészek-patológiában szenvedő nők specifikus autoantitesteinek expressziós szintjében bekövetkező változásokat ellenőrizzük, összehasonlítva a rákos megbetegedésekkel nem rendelkező nőkkel.

A CAAA-teszt egy vérvételi és feldolgozási lépésből áll, amelyet specifikus autoantitestek kimutatása követ ELISA-alapú vizsgálattal és matematikai feldolgozással, majd az eredményeket "pozitív" vagy "negatív" kategóriába sorolják a petefészekrák szempontjából.

A vizsgálati populációba azok a nők tartoznak, akiknél kóros vagy citológiai igazolást végeznek akár sebészeti eljárással (laparoszkópia/laparotómia), akár bármilyen biopsziával vagy citológiával, mielőtt bármilyen rákellenes kezelést végeznének, és a megfelelő korú kontrollokat. A klinikai gyanú a következők egyikét foglalja magában: Kismedencei tömeg/ciszta (medencei vizsgálat és/vagy képalkotó technikákkal), és/vagy magas CA-125 szint, és/vagy ascites, és/vagy távoli metasztázis véletlenszerű megtalálása miatt. A végső ellenőrzést ("igazi pozitív" vagy "igazi negatív") csak a patológiai/citológiai eredményekre vonatkozóan, vagy egészséges nők esetében a klinikai anamnézis alapján kell elvégezni.

Alany kiválasztása Feltételezett petefészekrákos nők (betegek és nem rákos nők) – Bevételi kritériumok – az alábbiak mindegyike

• 18 éves vagy idősebb.
• A petefészek-patológiára gyanús betegek. A klinikai gyanú a következők egyikét foglalja magában: Kismedencei tömeg/ciszta (medencei vizsgálat és/vagy más képalkotó technikák alapján) és/vagy magas CA-125 szint és/vagy hasvízkór és/vagy távoli metasztázis véletlenszerű megtalálása. . A végső elemzést csak a patológiai/citológiai eredményekre vonatkozóan kell elvégezni.
• A betegek laparotomiát/laparoszkópiát/műtétet terveztek, ideális esetben a fentiek bármelyike ​​előtt.

Gyanús petefészekrákos nők (betegek és nem daganatos nők) – Kizárási kritériumok: az alábbiak bármelyike

• 18 évesnél fiatalabb
• Hematológiai rosszindulatú daganatok
• Autoimmun betegségekben diagnosztizált betegek.
• Korábbi vagy jelenlegi daganatok
• Aktív kemoterápiás kezelés alatt álló betegek

Gyanús petefészekrákos betegek – végső osztályozás

• Az „igazán pozitív” csoport minden olyan szekvenciális betegből áll, akik megfelelnek a beválasztási kritériumoknak, és a patológiai eredmények alapján petefészekrákra pozitívak. Az „igazi negatív” csoport olyan szekvenciális betegekből áll, akik megfelelnek a befogadási kritériumoknak, és a patológiai eredmények szerint negatívak a petefészekrákra.

Ez a tanulmány több központ részvételén fog alapulni. A vizsgálathoz szükséges helyszínek minimális száma 2.

A jelenlegi vizsgálat egyetlen vak prospektív validációs vizsgálat, amelyben minden olyan, egymást követő petefészekpatológiás gyanús nő részt vesz, akiket a vizsgálat időtartama alatt biopsziára/műtétre terveztek, patológiás/citológiai petefészekrákban (igazi pozitív), és XXX számú nőt, akiknek petefészekpatológiája/citológiája negatív. eredmények (igazi negatív) és egészséges nők. A vizsgálat célja a CAAA teszt hatékonyságának értékelése.

A vizsgálat hatékonyságát a CAAA-teszt specificitásaként határozzák meg egy előre meghatározott 95%-os érzékenység mellett.

A tanulmány értékeli a CAAA-teszt érzékenységét annak bizonyítására, hogy az nem éri el a deklarált 95%-os szintet.

A jelenlegi orvosi publikációk szerint feltételezzük, hogy a vizsgált populáció a valóban pozitív rákos esetek 10-20%-át fogja tartalmazni.

A mai napig a gyanús betegek nagy részét csak a laparoszkópia/műtét végleges patológiája diagnosztizálta. Ebben a vizsgálatban a valódi pozitív és a valódi negatív eseteket (a patológia által igazolt) összehasonlítjuk a CAAA-teszt eredményeivel.

A vizsgálati eljárás Az alanyok klinikai adatait, amelyeket a páciens orvosi aktájából szereztek, beleértve az életkort, a kórtörténetet és a petefészekrák diagnosztikai értékeléséhez vezető vizsgálatok eredményeit, rögzítik a megfelelő, vonalkódos, vizsgálat előtti esetjelentési űrlapokon. A jelentések elektronikus lesz egy erre a célra kialakított és biztonságos internetes oldalon, az adatbázisban bekövetkezett bármilyen változás rögzítésre kerül, és nyomon követhető lesz. A vizsgálat névtelen, és az osztály megőrzi a beteg nevét anélkül, hogy felfedné a vizsgálók és a vizsgálat szponzora számára.

Az orvos/ápolónő/phlebotomist összegyűjt egy heparin vákuumot/szerológiai csövet (kb. 8 ml), és felcímkézi (vonalkóddal). A vérkezelõ laboratórium összegyűjti a szérumot/plazmát, és a szérumot -80 C-on fagyasztva tárolják.

Az autoantitestek relatív expressziós arányának kimutatására ELISA alapú teszteket végeznek minden egyes mintán a laboratóriumi protokollnak megfelelően. A mintákat megvizsgálják azokra az antigénekre adott válaszra, amelyeket egy korábbi betanítási sorozat során azonosítottak. Az összes adatot véglegesen közvetlenül egy erre a célra szolgáló számítógépre rögzítjük. Minden egyes mintánál az összes antitest-eredmény a kódolt betegfájlba kerül. Egy matematikai algoritmus határozza meg, hogy a minta pozitív vagy negatív.

A végső patológiát összehasonlítják a CAAA teszt eredményeivel. Az eredményeket a rákos populáció vizsgálatában jártas statisztikus elemzi.

A jelenlegi vizsgálat egy vak prospektív validációs vizsgálat, amelyben minden egymást követő petefészekpatológiás gyanús alany részt vesz, akiket biopsziára/műtétre/citológiára terveznek a vizsgálat időtartama alatt. A vizsgálat célja a CAAA-teszt érzékenységének és specificitásának felmérése a petefészekrák kimutatására biopsziára/műtétre/citológiára tervezett nőknél.

A vizsgálati alanyokat a felvételi és kizárási kritériumoknak megfelelően szűrik a vizsgálatban való potenciális részvételre.

Az adatok tartalmazzák az alanyok klinikai és patológiás/citológiai állapotának paramétereit, valamint a CAAA ELISA eredményeit.

A tanulmánynak két célja van. Annak ellenőrzésére, hogy a CAAA érzékenysége nem haladja meg az előre meghatározott szintet. A CAAA teszt specificitásának értékelése. Statisztikai hipotézis A mintanagyság meghatározásának fő feltétele annak érvényesítése, hogy a teszt érzékenysége ne legyen alacsonyabb az előre meghatározott szintnél. Az osztályozási szabályt úgy határozták meg, hogy a tanítási mintában az érzékenység 100% legyen. Feltételezzük, hogy a valós érzékenység nem alacsonyabb, mint 99%.

Null hipotézis: A teszt érzékenysége nem haladja meg a 95%-ot. Adatbázis-kezelő rendszert kell megtervezni és karbantartani, beleértve a képernyő-előkészítést és a szerkesztés-ellenőrzési programozást. Minden adatbeviteli központban el kell végezni a klinikai adatok bevitel előtti és utáni minőségellenőrzését. Az összes ELISA teszt eredményét egy internetes felületen keresztül feltöltjük az adatbázisba, és a további változtatások ellen zároljuk. Az ELISA teszt eredményeinek megváltoztatásához az adatbázis feloldásához a helyi CRO, a szponzor és a helyszíni orvos beleegyezése szükséges. A zárolás feloldását csak a webmester végezheti el, és rögzítő lesz a nyomkövetési rendszer komponensében, valamint a szponzor és a CRO által a helyszínen tárolt nyomtatott példányban.