Eccesso di androgeni come causa di disfunzione adipogenica nelle donne con PCOS

Obiettivo 1. Esaminare i meccanismi di sviluppo dell'adiposo addominale sottocutaneo (grasso) nelle donne con PCOS di peso normale rispetto alle donne normali (di controllo) con BMI e pari età.

Soggetti e valutazione clinica: Recluteremo 16 soggetti con PCOS magri (18,5-25 kg/m2) e 16 controlli corrispondenti per età e BMI. I soggetti completeranno un questionario standardizzato che enfatizzi la datazione mestruale, la crescita anormale dei capelli e l'acne. Il questionario annoterà anche l'età, l'abitudine al fumo, i farmaci, la storia chirurgica e le storie familiari di crescita eccessiva dei capelli nelle parenti di sesso femminile e di diabete nei genitori o fratelli per i criteri di esclusione e per l'inclusione di alcuni tratti di base come covariate. I soggetti saranno inoltre sottoposti a un esame fisico; l'irsutismo sarà valutato con il metodo modificato Ferriman-Gallwey (mFG). L'ecografia transvaginale (TVUS) verrà eseguita per determinare la presenza o l'assenza di ovaie policistiche. Verrà ottenuto un campione di sangue di screening per le determinazioni di ormoni steroidei, SHBG, TSH e prolattina.

Saranno reclutate donne di qualsiasi etnia di età compresa tra i 18 ei 35 anni. I pazienti con PCOS saranno diagnosticati secondo i criteri NIH del 1990. I controlli avranno cicli mestruali regolari a intervalli di 21-35 giorni, un livello di progesterone nella fase luteale (P4) > 3 ng/mL e nessuna evidenza di irsutismo, acne, alopecia, ovaie policistiche o disfunzione endocrina. I criteri di esclusione sono: storia presente/passata (

Gli studi saranno condotti nella fase follicolare nei controlli e durante l'amenorrea nelle donne con PCOS. Tutti i soggetti saranno sottoposti a un test di tolleranza al glucosio endovenoso a campionamento frequente modificato (FSIGTT). Glucosio in forma di soluzione al 50% (0.3 g/kg) e insulina umana regolare (0.03 unità/kg) saranno iniettati attraverso una linea endovenosa rispettivamente a 0 e 20 minuti. Il sangue sarà raccolto a -20, -15, -5, 0, 2, 4, 8, 19, 22, 30, 40, 50, 70, 90 e 180 min per la determinazione del glucosio e dell'insulina. La modellazione matematica delle determinazioni seriali del glucosio e dell'insulina calcolerà: indice di sensibilità all'insulina (SI, ovvero l'azione dell'insulina per accelerare l'assorbimento del glucosio e sopprimere la produzione di glucosio), indice di efficacia del glucosio (SG, ovvero l'effetto combinato del glucosio per aumentare l'assorbimento del glucosio e sopprimere produzione endogena di glucosio a livelli basali di insulina) e la risposta acuta al glucosio (AIRG).

Isolamento e coltura degli adipociti: Saranno prelevati circa 1-2 g di grasso dall'addome inferiore sottocutaneo utilizzando procedure standard in anestesia locale. Gli adipociti (cellule adipose) e il tessuto adiposo circostante saranno isolati per misurare il numero e il diametro delle cellule degli adipociti, l'accumulo e la funzione dei lipidi, l'adiponectina e lo sviluppo delle cellule staminali.

Procedure: tutte le procedure saranno eseguite in donne normali e con PCOS all'inizio dello studio.

io). Venipuntura: il sangue a digiuno verrà raccolto per emocromo, pannello chimico, LH, FSH, T totale/libero, DHT, A4, DHEAS, E1, E2, ormone antimulleriano (AMH), SHBG, adiponectina, leptina, IL-6 , profilo lipidico e acidi grassi liberi (FFA).

ii). Composizione corporea: la composizione corporea sarà valutata mediante BMI, circonferenza vita-fianchi e scansione DEXA. La circonferenza sarà misurata in vita (sezione più stretta del busto tra le costole e l'ombelico) e fianchi (la più grande sporgenza della regione dell'anca, sopra la piega glutea). Per la distribuzione del grasso corporeo totale e del grasso regionale, verranno eseguite scansioni di tutto il corpo, utilizzando l'imaging DEXA.

iii). Distribuzione del grasso corporeo: la DEXA totale del corpo misurerà il grasso addominale (cioè l'area tra la cupola del diaframma e la parte superiore dell'anca. Le immagini DEXA del corpo totale determineranno anche la percentuale di grasso corporeo; massa corporea magra; grasso corporeo totale, addominale e delle gambe; e rapporto massa grassa addome/gambe. La regione della gamba è quella zona sotto la parte superiore dell'osso iliaco (grande trocantere).

iv). Test ovarico: l'ecografia transvaginale verrà eseguita nella fase follicolare nei controlli e durante l'amenorrea nelle donne con PCOS. Verrà calcolato il volume ovarico. Il numero di follicoli antrali, definito come il numero totale di follicoli (2-9 mm di diametro) di entrambe le ovaie, sarà determinato da 1 ricercatore (D.A.D.). Verranno identificate le ovaie policistiche, con una di queste ovaie sufficiente per definire la PCO

Obiettivo 2. Determinare il ruolo degli androgeni nella disfunzione delle ASC addominali SC e la sua relazione con il metabolismo nelle donne con PCOS di peso normale attraverso gli androgeni. antagonismo per uso clinico di flutamide rispetto al placebo.

Studi FSIGTT modificati e studi adipogenici: gli studi FSIGTT modificati e tutti gli studi adipogenici eseguiti all'inizio dello studio saranno ripetuti alla fine dell'intervento di 6 mesi con flutamide rispetto al placebo nelle donne con PCOS.

Procedure: tutte le procedure eseguite all'inizio dello studio saranno ripetute anche alla fine dei sei cicli di 28 giorni di intervento con flutamide rispetto al placebo nelle donne con PCOS. Inoltre, verranno eseguiti studi mensili sulla funzionalità epatica per rilevare possibili aumenti dei livelli di transaminasi sieriche al di sopra dell'intervallo normale durante la terapia con flutamide rispetto al placebo.

Registrazioni mestruali: La frequenza ovulatoria sarà determinata chiedendo ai soggetti di tenere un registro mestruale giornaliero e raccogliere settimanalmente campioni di urina del primo mattino per possibili determinazioni di progesterone e creatinina. I campioni di urina verranno congelati per analisi successive per determinare la prova dell'ovulazione, se necessario.

Obiettivo 3. Identificare i cambiamenti epigenetici che sono alla base della disfunzione dell'ASC addominale SC nelle donne con PCOS di peso normale rispetto ai controlli di pari età e BMI.

Cellule staminali adipose addominali sottocutanee da PCOS e donne di controllo saranno coltivate in cellule adipose di nuova formazione (adipociti) in laboratorio. Le cellule saranno studiate prima e dopo il trattamento di 6 mesi con placebo vs flutamide per i cambiamenti nell'epigenoma cellulare (metilazione, sequenze di RNA e modificazione dell'istone).