Nadmiar androgenów jako przyczyna dysfunkcji adipogennej u kobiet z PCOS

Cel 1. Zbadanie mechanizmów rozwoju podskórnej tkanki tłuszczowej w jamie brzusznej u kobiet z PCOS o prawidłowej masie ciała w porównaniu z kobietami o prawidłowej masie ciała i wieku (grupa kontrolna).

Pacjenci i ocena kliniczna: Zrekrutujemy 16 szczupłych (18,5-25 kg/m2) pacjentek z PCOS i 16 osób z grupy kontrolnej dobranej pod względem wieku i BMI. Badane wypełniają standardowy kwestionariusz, w którym zwraca się uwagę na datowanie menstruacyjne, nieprawidłowy wzrost włosów i trądzik. Kwestionariusz będzie również zawierał adnotacje dotyczące wieku, palenia tytoniu, leków, wywiadu chirurgicznego i historii rodzinnej nadmiernego wzrostu włosów u krewnych płci żeńskiej oraz cukrzycy u rodziców lub rodzeństwa w celu wykluczenia kryteriów wykluczenia i włączenia niektórych podstawowych cech jako zmiennych towarzyszących. Badani zostaną również poddani badaniu fizykalnemu; hirsutyzm zostanie oceniony zmodyfikowaną metodą Ferrimana-Gallweya (mFG). Przeprowadzona zostanie ultrasonografia przezpochwowa (TVUS) w celu określenia obecności lub braku policystycznych jajników. Zostanie pobrana przesiewowa próbka krwi w celu oznaczenia hormonów steroidowych, SHBG, TSH i prolaktyny.

Rekrutowane będą kobiety dowolnego pochodzenia etnicznego w wieku od 18 do 35 lat. Pacjenci z PCOS zostaną zdiagnozowani według kryteriów NIH z 1990 roku. Kontrole będą miały regularne cykle miesiączkowe w odstępach od 21 do 35 dni, poziom progesteronu w fazie lutealnej (P4) > 3 ng/ml i nie będą wykazywać oznak nadmiernego owłosienia, trądziku, łysienia, policystycznych jajników ani zaburzeń endokrynologicznych. Kryteria wykluczenia to: obecna/przeszła historia (

Badania będą prowadzone w fazie folikularnej w grupie kontrolnej oraz w okresie braku miesiączki u kobiet z PCOS. Wszyscy pacjenci zostaną poddani zmodyfikowanemu dożylnemu testowi tolerancji glukozy z częstymi próbkami (FSIGTT). Glukoza w postaci 50% roztworu (0,3 g/kg) i zwykła insulina ludzka (0,03 jednostek/kg) zostaną wstrzyknięte przez linię dożylną odpowiednio w 0 i 20 minucie. Krew zostanie pobrana w -20, -15, -5, 0, 2, 4, 8, 19, 22, 30, 40, 50, 70, 90 i 180 minutach w celu oznaczenia glukozy i insuliny. Matematyczne modelowanie seryjnych oznaczeń glukozy i insuliny pozwoli obliczyć: wskaźnik wrażliwości na insulinę (SI, tj. działanie insuliny na przyspieszenie wychwytu glukozy i zahamowanie produkcji glukozy), wskaźnik efektywności glukozy (SG, tj. połączone działanie glukozy na zwiększenie wychwytu glukozy i zahamowanie jej wytwarzania) endogenna produkcja glukozy przy poziomach insuliny bazowej) i ostra odpowiedź na glukozę (AIRG).

Izolacja i hodowla adipocytów: Około 1-2 g tłuszczu zostanie pobrane z dolnej części brzucha SC przy użyciu standardowych procedur w znieczuleniu miejscowym. Adipocyty (komórki tłuszczowe) i otaczająca je tkanka tłuszczowa zostaną wyizolowane w celu zmierzenia liczby i średnicy komórek adipocytów, akumulacji i funkcji lipidów, adiponektyny i rozwoju komórek macierzystych.

Procedury: Wszystkie procedury będą wykonywane u kobiet zdrowych iz PCOS na początku badania.

ja). Nakłucie żyły: Krew na czczo zostanie pobrana do morfologii krwi, panelu biochemicznego, LH, FSH, całkowitego/wolnego T, DHT, A4, DHEAS, E1, E2, hormonu antymullerowskiego (AMH), SHBG, adiponektyny, leptyny, IL-6 , profil lipidowy i wolne kwasy tłuszczowe (FFA).

ii). Skład ciała: Skład ciała zostanie oceniony na podstawie BMI, obwodu talii do bioder i skanowania DEXA. Obwody będą mierzone w pasie (najwęższa część tułowia między żebrami a pępkiem) i biodrach (największe wysunięcie okolicy bioder, powyżej fałdu pośladkowego). W przypadku całkowitej tkanki tłuszczowej i regionalnej dystrybucji tkanki tłuszczowej zostaną wykonane skany całego ciała z wykorzystaniem obrazowania DEXA.

iii). Dystrybucja tkanki tłuszczowej: DEXA całego ciała zmierzy tkankę tłuszczową w jamie brzusznej (tj. obszar między kopułą przepony a górną częścią biodra. Obrazy DEXA całego ciała określą również % tkanki tłuszczowej; beztłuszczowa masa ciała; całkowity tłuszcz ciała, brzucha i nóg; oraz stosunek masy tkanki tłuszczowej brzucha do nóg. Obszar nogi to obszar poniżej górnej części kości biodrowej (krętarz większy).

iv). Badanie jajników: USG przezpochwowe będzie wykonywane w fazie folikularnej u kobiet z grupy kontrolnej oraz podczas braku miesiączki u kobiet z PCOS. Zostanie obliczona objętość jajników. Liczba pęcherzyków antralnych, zdefiniowana jako całkowita liczba pęcherzyków (o średnicy 2-9 mm) obu jajników, zostanie określona przez 1 badacza (D.A.D.). Zidentyfikowane zostaną jajniki policystyczne, z których jeden wystarczy do określenia PCO

Cel 2. Określenie roli androgenów w dysfunkcji SC brzucha ASC i ich związku z metabolizmem androgenów u kobiet z PCOS o prawidłowej masie ciała. antagonizm przy zastosowaniu klinicznym flutamidu w porównaniu z placebo.

Zmodyfikowane badania FSIGTT i adipogenne: Zmodyfikowane FSIGTT i wszystkie badania adipogenne przeprowadzone na początku badania zostaną powtórzone pod koniec 6-miesięcznej interwencji flutamidu w porównaniu z placebo u kobiet z PCOS.

Procedury: Wszystkie procedury przeprowadzone na początku badania zostaną również powtórzone pod koniec sześciu 28-dniowych cykli flutamidu w porównaniu z placebo u kobiet z PCOS. Ponadto będą przeprowadzane comiesięczne badania czynności wątroby w celu wykrycia możliwego zwiększenia poziomu transaminaz w surowicy powyżej normalnego zakresu podczas leczenia flutamidem w porównaniu z placebo.

Rejestry menstruacyjne: Częstotliwość owulacji zostanie określona poprzez prowadzenie przez pacjentki codziennego rejestru menstruacyjnego i zbieranie cotygodniowych próbek moczu z pierwszego poranka w celu ewentualnych oznaczeń progesteronu i kreatyniny. W razie potrzeby próbki moczu zostaną zamrożone do późniejszej analizy w celu ustalenia dowodów na owulację.

Cel 3. Zidentyfikować zmiany epigenetyczne leżące u podstaw dysfunkcji SC brzucha ASC u kobiet z PCOS o normalnej masie ciała w porównaniu z grupą kontrolną dobraną pod względem BMI i wieku.

Podskórne komórki macierzyste tkanki tłuszczowej brzucha pochodzące od kobiet z PCOS i kobiet z grupy kontrolnej zostaną wyhodowane w laboratorium w nowo utworzone komórki tłuszczowe (adipocyty). Komórki będą badane przed i po 6-miesięcznym leczeniu placebo w porównaniu z flutamidem pod kątem zmian w epigenomie komórkowym (metylacja, sekwencje RNA i modyfikacja histonów).