Excesso de andrógenos como causa de disfunção adipogênica em mulheres com SOP

Objetivo 1. Examinar os mecanismos do desenvolvimento de tecido adiposo abdominal subcutâneo (gordura) em mulheres com SOP de peso normal versus mulheres normais (controle) de mesma idade e IMC.

Indivíduos e avaliação clínica: Recrutaremos 16 indivíduos SOP magros (18,5-25 kg/M2) e 16 controles pareados por idade e IMC. As participantes preencherão um questionário padronizado enfatizando datação menstrual, crescimento anormal de pelos e acne. O questionário também anotará idade, tabagismo, medicamentos, histórico cirúrgico e histórico familiar de crescimento excessivo de pelos em parentes do sexo feminino e de diabetes em pais ou irmãos para critérios de exclusão e inclusão de algumas características básicas como covariáveis. Os indivíduos também passarão por um exame físico; o hirsutismo será pontuado pelo método modificado de Ferriman-Gallwey (mFG). A ultrassonografia transvaginal (TVUS) será realizada para determinar a presença ou ausência de ovários policísticos. Uma amostra de sangue de triagem será obtida para determinações de hormônios esteróides, SHBG, TSH e prolactina.

Serão recrutadas mulheres de qualquer etnia com idade entre 18 e 35 anos. Os pacientes com SOP serão diagnosticados pelos critérios do NIH de 1990. Os controles terão ciclos menstruais regulares em intervalos de 21 a 35 dias, um nível de progesterona (P4) na fase lútea > 3 ng/mL e nenhuma evidência de hirsutismo, acne, alopecia, ovários policísticos ou disfunção endócrina. Os critérios de exclusão são: história presente/passada (

Os estudos serão conduzidos na fase folicular em controles e durante a amenorréia em mulheres com SOP. Todos os indivíduos serão submetidos a um teste modificado de tolerância à glicose intravenosa com amostragem frequente (FSIGTT). Glicose na forma de solução a 50% (0,3 g/kg) e insulina humana regular (0,03 unidades/kg) serão injetadas por via intravenosa em 0 e 20 min, respectivamente. O sangue será coletado em -20, -15, -5, 0, 2, 4, 8, 19, 22, 30, 40, 50, 70, 90 e 180 min para determinações de glicose e insulina. A modelagem matemática de determinações seriadas de glicose e insulina calculará: índice de sensibilidade à insulina (SI, ou seja, a ação da insulina para acelerar a captação de glicose e suprimir a produção de glicose), índice de eficácia da glicose (SG, ou seja, o efeito combinado da glicose para aumentar a captação de glicose e suprimir produção endógena de glicose nos níveis basais de insulina) e a resposta aguda à glicose (AIRG).

Isolamento e cultura de adipócitos: Aproximadamente 1-2 gramas de gordura serão obtidos do abdome SC inferior usando procedimentos padrão sob anestesia local. Os adipócitos (células de gordura) e o tecido adiposo circundante serão isolados para medir o número e diâmetro das células adipócitos, acúmulo e função lipídica, adiponectina e desenvolvimento de células-tronco.

Procedimentos: Todos os procedimentos serão realizados em mulheres normais e com SOP no início do estudo.

eu). Punção venosa: sangue em jejum será coletado para hemograma, painel químico, LH, FSH, T total/livre, DHT, A4, DHEAS, E1, E2, hormônio antimulleriano (AMH), SHBG, adiponectina, leptina, IL-6 , perfil lipídico e ácidos graxos livres (FFAs).

ii). Composição corporal: A composição corporal será avaliada por IMC, circunferência cintura-quadril e varredura DEXA. As circunferências serão medidas na cintura (seção mais estreita do tronco entre as costelas e o umbigo) e quadris (maior saliência da região do quadril, acima da prega glútea). Para gordura corporal total e distribuição de gordura regional, serão realizadas varreduras de corpo inteiro, utilizando imagens DEXA.

iii). Distribuição de gordura corporal: o DEXA corporal total medirá a gordura abdominal (ou seja, a área entre a cúpula do diafragma e a parte superior do quadril. As imagens DEXA do corpo total também determinarão a porcentagem de gordura corporal; massa corporal livre de gordura; gordura corporal total, abdominal e nas pernas; e proporção de gordura abdominal/pernas. A região da perna é aquela área abaixo do topo do osso do quadril (trocânter maior).

4). Teste ovariano: A ultrassonografia transvaginal será realizada na fase folicular nos controles e durante a amenorreia nas mulheres com SOP. O volume ovariano será calculado. O número de folículos antrais, definido como o número total de folículos (2-9 mm de diâmetro) de ambos os ovários, será determinado por 1 investigador (D.A.D.). Os ovários policísticos serão identificados, sendo um desses ovários suficiente para definir a PCO

Objetivo 2. Determinar o papel do andrógeno na disfunção do ASC abdominal SC e sua relação com o metabolismo em mulheres com SOP de peso normal por meio do andrógeno. antagonismo pelo uso clínico de flutamida vs. placebo.

FSIGTT modificado e estudos adipogênicos: O FSIGTT modificado e todos os estudos adipogênicos realizados no início do estudo serão repetidos no final da intervenção de 6 meses com flutamida versus placebo em mulheres com SOP.

Procedimentos: Todos os procedimentos realizados no início do estudo também serão repetidos no final dos seis ciclos de 28 dias de intervenção com flutamida versus placebo em mulheres com SOP. Além disso, estudos mensais da função hepática serão realizados para detectar possíveis elevações dos níveis de transaminase sérica acima da faixa normal durante a terapia com flutamida versus placebo.

Registros menstruais: A frequência ovulatória será determinada fazendo com que os indivíduos mantenham um registro menstrual diário e coletem amostras semanais da primeira urina da manhã para possíveis determinações de progesterona e creatinina. Amostras de urina serão congeladas para análise posterior para determinar evidências de ovulação, conforme necessário.

Objetivo 3. Identificar alterações epigenéticas subjacentes à disfunção ASC abdominal SC em mulheres com SOP de peso normal versus controles pareados por IMC e idade.

Células-tronco adiposas abdominais subcutâneas de mulheres com SOP e controle serão cultivadas em células de gordura recém-formadas (adipócitos) em laboratório. As células serão estudadas antes e após o tratamento de 6 meses com placebo vs flutamida para alterações no epigenoma celular (metilação, sequências de RNA e modificação de histonas).