Danno citogenetico nelle cellule buccali causato dal dentifricio

Lo studio ha incluso 40 partecipanti, studenti di Odontoiatria presso la Facoltà di Medicina dell'Università di Spalato. Erano presenti in totale 12 maschi e 28 femmine, di età compresa tra i 20 ei 26 anni (età media 23,18 ± 1,48). I soggetti sono stati divisi in due gruppi uguali, a seconda della combinazione del dentifricio utilizzato.

Nel primo gruppo, Sensodyne Classic (GlaxoSmithKline, UK) e Sensodyne Fluor (GlaxoSmithKline, UK) sono stati i marchi di dentifrici utilizzati, mentre nel secondo Plidenta 15 Seconds (Neva Ltd., Croazia) e Plidenta Sensitive (Neva Ltd., Croazia ) (Tabella 1). I partecipanti hanno usato il dentifricio per quattro mesi. I primi due mesi hanno utilizzato un dentifricio senza fluoro, dopodiché, per i due mesi successivi, hanno utilizzato un dentifricio contenente fluoro dello stesso produttore e di composizione simile. I dentifrici testati sono stati applicati due volte al giorno, mattina e sera, per tre minuti nella quantità di 1 g (≈2 cm). Contemporaneamente, i partecipanti non hanno utilizzato altri agenti per l'igiene orale come il collutorio o la fluorizzazione topica. A ciascun partecipante è stata prelevata un'anamnesi medica e dentistica dettagliata. In un questionario strutturato, adattato a questo studio, tutti i partecipanti hanno fornito risposte a domande relative a fattori demografici (età, sesso), fattori personali (salute generale, farmaci usati, esposizione alle radiazioni), stile di vita (fumo, consumo di alcol), abitudini alimentari e abitudini igieniche. Gli individui che fumavano tre o più sigarette al giorno per almeno un anno erano considerati fumatori. Quelle persone che hanno consumato due o più unità alcoliche per tre o più volte alla settimana non sono state incluse nello studio così come i pazienti con lesioni orali, storia di malignità e quelli con protesi rimovibili e fisse, apparecchi ortodontici. Il criterio per la selezione dei partecipanti era quello di essere completamente sani senza disturbi e malattie sistemiche.

Raccolta dei campioni Campioni di cellule epiteliali buccali sono stati prelevati da ciascun partecipante utilizzando la tecnica del tampone immediatamente prima dell'uso del dentifricio testato e 30, 60, 90 e 120 giorni dopo l'inizio della ricerca (T0 - controllo prima dell'uso del dentifricio testato , T1- 30 giorni dopo l'inizio dell'uso del dentifricio senza fluoro, T2 - 60 giorni dopo l'inizio dell'uso del dentifricio senza fluoro, T3 - 90 giorni dopo l'inizio dello studio, usando dentifricio al fluoro per 30 giorni , T4 - 120 giorni dopo l'inizio dello studio, utilizzando un dentifricio al fluoro per 60 giorni).

Un'ora prima del campionamento, ai partecipanti è stato chiesto di astenersi dal fumare e consumare cibi e bevande. Dopo aver sciacquato la cavità orale per tre volte con acqua tiepida per rimuovere le cellule esfoliate, è stato prelevato un tampone spazzolando delicatamente la mucosa buccale bilateralmente con un cytobrush (Cytobrush Plus, GmbH, Dietramszell-Linden, Germania) e poi i campioni sono stati applicato a vetrini da laboratorio codificati preriscaldati a 37 °C.

Saggio del micronucleo in cellule epiteliali buccali Le cellule applicate su vetrini microscopici sono state lasciate asciugare all'aria e poi sono state fissate in metanolo (80% v/v) a 4°C per 20 minuti. La colorazione è stata eseguita con soluzione di Giemsa al 5% per 10 minuti. Successivamente, i vetrini sono stati risciacquati con acqua distillata e asciugati all'aria.

L'analisi è stata eseguita con un microscopio ottico Olympus CX40 (Olympus, Tokyo, Giappone) con un ingrandimento di 400×, e ogni micronucleo e altre anomalie nucleari sono state ulteriormente verificate con un ingrandimento di 1000×. Sono stati preparati due vetrini replicati per ciascun soggetto e sono state valutate 1000 cellule epiteliali per preparazione per ciascun tempo di campionamento.

Analisi statistica L'analisi statistica è stata eseguita utilizzando il pacchetto software SPSS (IBM Corp., Armonk, NY, USA). Mediante l'analisi statistica descrittiva, sono stati determinati i parametri statistici di base (media, errore standard e deviazione standard e deviazione standard relativa, mediana e valori minimo e massimo). Le differenze nel numero di micronuclei e altre anomalie nucleari tra i diversi tempi di campionamento per ciascun gruppo e tra i gruppi di esaminati sono state testate mediante ANOVA e il test post hoc HSD di Tukey utilizzando una procedura di modello lineare generale. Il modello di regressione generale (GRM) dal metodo di modellazione lineare/non lineare è stato utilizzato per la valutazione dell'influenza delle variabili predittive (età, sesso e professione, uso di farmaci, esposizione ai raggi X, abitudini alimentari e stile di vita) sulle variabili dipendenti (micronucleo, cellule binucleate, uova rotte, gemme nucleari, picnosi, cromatina condensata, cariolisi e carioressi). I risultati del GRM sono espressi sotto forma di diagrammi di Pareto dei valori t. Un livello di significatività è stato fissato a 0,05.