Follow-up di un anno dei pazienti ricoverati nelle unità di terapia intensiva spagnole a causa di COVID-19

Obiettivo e scopo dello studio

1. L'obiettivo principale è determinare i fattori di rischio e la prognosi dei pazienti con infezione da COVID-19 che sono stati ricoverati nelle unità di terapia intensiva spagnole tra l'inizio e la fine della pandemia in Spagna. Particolare attenzione sarà posta sull'identificazione dell'espressione differenziale dei fattori prognostici in base al sesso.
2. Il secondo obiettivo è eseguire un follow-up dei pazienti entro 6 mesi dalla dimissione dalla terapia intensiva e dall'ospedale al fine di determinare la mortalità (anche a 1 anno), le conseguenze funzionali respiratorie e cardiovascolari e la qualità della vita.
3. Il terzo obiettivo è eseguire uno studio epigenetico nei casi in cui è possibile prelevare un campione di sangue. Lo scopo di tale impresa è definire le firme molecolari nelle biopsie liquide che possono fornire informazioni sulla prognosi, sul monitoraggio del trattamento e sulla risposta alla terapia.
4. Infine, la capacità predittiva di risposta alla terapia e alla mortalità sarà valutata da un pannello di biomarcatori proteici che partecipano a percorsi fisiologici chiave della patogenesi della malattia. Ciò potrebbe, a sua volta, aiutare a selezionare trattamenti futuri con un maggiore potenziale di successo in ciascun paziente.

Variabili principali e secondarie

1. Precedenti dati epidemiologici del paziente
2. Dati biologici e clinici, compreso il trattamento somministrato al momento del ricovero ospedaliero
3. Dati biologici e clinici, compresi i trattamenti somministrati al momento e durante il ricovero in terapia intensiva fino alla dimissione dalla terapia intensiva o dall'ospedale o al decesso
4. Dati specifici riguardanti la ventilazione artificiale e l'ECMO dall'inizio, nonché in sequenza, dall'intubazione all'estubazione o alla morte
5. Dati biologici e clinici alla dimissione ospedaliera
6. Follow-up clinico dei pazienti che sopravvivono entro 6 mesi, tra cui: test respiratori funzionali, ecocardiogrammi e sondaggi sulla qualità della vita
7. La mortalità intraospedaliera e intra-ICU sarà registrata a 28 e 90 giorni, nonché entro 6 mesi e 1 anno
8. Verranno prelevati 1000 campioni di sangue per lo studio epigenetico Verrà analizzato il profilo molecolare di un RNA non codificante (ncRNA), in particolare il pattern del microRNA (miRNA) nella biopsia liquida. Una firma di miRNA circolante è più vicina al fenotipo rispetto ai marcatori genomici e può fornire informazioni sulla regolazione epigenetica, l'attivazione cellulare, la riparazione dei tessuti e i processi metabolici oltre a quelle offerte dai predittori clinici e dai classici fattori di rischio. i miRNA offrono proprietà biochimiche appropriate che sono altamente stabili; avere una lunga emivita nei campioni biologici utilizzati nei laboratori clinici (siero/plasma); può essere quantificato in modo efficiente e relativamente rapido con elevata sensibilità e specificità mediante RT-qPCR; e può servire come strumento proficuo per la valutazione dei rischi e il controllo delle malattie.

Tutte queste caratteristiche hanno portato autori distinti a proporre l'applicazione clinica del miRNA a breve o medio termine.

Il disegno sperimentale comprende due fasi. In prima approssimazione, verrà eseguito uno screening dell'RNA non codificante (ncRNA) in una sottopopolazione di pazienti (n=200). Il numero di campioni supera la quantità raccomandata per questo tipo di studi. (Schurch e cols., RNA, 2016). Verrà richiesto un preventivo per lo screening di ncRNA mediante HTG EdgeSeq miRNA Whole Transcriptome Assay system (HTG). Utilizzando il sequenziamento di nuova generazione (NGS), questo metodo consente la quantificazione di 2083 candidati umani. Tutte le fasi della procedura saranno completate in luoghi fisici idonei in conformità con il codice OP n. 0028. Tutti i campioni saranno preparati secondo il codice n. 0036.

I risultati dello screening saranno validati nella coorte di validazione (n=800) con RT-qPCR, una tecnica gold standard. Il budget include il materiale necessario per l'estrazione dell'RNA (kit di isolamento siero/plasma miRNeasy, Qiagen; spike-in; carrier RNA; materiali di consumo) e la quantificazione dell'espressione di ncRNA nei biofluidi (kit RT-qPCR miRCURY LNA Universal RT microRNA PCR System, Qiagen; kit endogeno controlli, materiali di consumo. Gli studi saranno condotti presso le strutture del Gruppo TRRM nell'IRBLleida. Il laboratorio dispone del team e del materiale necessari per isolare e quantificare l'RNA e conservare reagenti e campioni (magazzini frigoriferi, congelatori a 20ºC e -80ºC).

9.- Per lo studio dei biomarcatori prognostici, sarà valutata la concentrazione di biomarcatori nel plasma che sono fondamentali per il meccanismo d'azione di farmaci potenzialmente utili in questa malattia. Questa quantificazione potrebbe fornire indicazioni sull'uso di droghe (il conteggio dei linfociti sarà ottenuto da un esame emocromocitometrico):