グルココルチコイドに対するヒト免疫細胞および非免疫細胞のゲノム応答

グルココルチコイドは、世界中で最も頻繁に処方される免疫抑制剤および抗炎症剤の 1 つです。 しかし、長期使用は、重篤な非免疫学的副作用によって複雑になります。 私たちの研究室で進行中のヒト初代細胞を用いた in vitro 実験は、グルココルチコイドに対する免疫細胞と非免疫細胞のゲノム応答に実際に根本的な違いがあることを示唆しています。 ゲノムレベルでの薬物作用のこれらおよびその他の側面は、完全に特徴付けられていません。 この研究では、免疫細胞と非免疫細胞の間でグルココルチコイドに応答して異なって発現および調節されるヒト遺伝子および非コード RNA のリストを作成することを試みます。 これらのデータは、転写物、それに対応するタンパク質、および標的を絞った介入の最良の候補である分子経路を特定するために使用されます。 潜在的なターゲットは、低分子干渉 RNA (siRNA) ライブラリーで検証できます。長期的な目標は、低分子またはナノ粒子によって促進される RNA 干渉 (RNAi) 介入を開発することです。他の組織。

健康なボランティアは、250ミリグラムのコハク酸メチルプレドニゾロンナトリウムの単回静脈内投与を受ける前に、ベースライン採血を受けます。 血液は、注入開始後 1 および 2 時間または 2 および 4 時間の 2 つのレジメンのいずれかで収集されます。 健康な志願者が IV メチルプレドニゾロンを受ける前に、皮膚穿孔生検が得られる場合があります。 その場合、局所メチルプレドニゾロンは、ベースラインの皮膚生検部位の反対側の皮膚の限られた領域に適用され、局所メチルプレドニゾロンが適用された領域から、薬物投与の4時間後にアフィショナル皮膚生検が得られます。 退院後 1 日および 1 週間のフォローアップの電話で、薬物または皮膚生検に関連する悪影響が記録されます。 個々の研究参加の合計期間は 1 ～ 5 週間です。

血液サンプルは、造血細胞亜集団（好中球、B細胞、CD4 + T細胞、CD8 + T細胞、単球、およびナチュラルキラー[NK]細胞）の分離のために処理されます。 RNA（例：RNAシーケンシング、small-RNA-sequencing、リアルタイムPCR）、DNA（例：ChIP -seq、メチル化解析、DNA シーケンシング、ジェノタイピング、およびタンパク質 (フローサイトメトリー、質量分析など)。 各時点で、血清メチルプレドニゾロンレベルが測定され、標準系統マーカーのフローサイトメトリーが実行されます。 皮膚生検は、RNA シーケンスおよび small-RNA シーケンスのための RNA 分離に供されます。 各皮膚生検の断片は、グルココルチコイドへの in vitro 暴露および人工多能性幹 (iPS) 細胞の生成のために、線維芽細胞の分離と培養を受けます。