Respostas genômicas de células imunes e não imunes humanas a glicocorticóides

Os glicocorticóides estão entre os medicamentos imunossupressores e anti-inflamatórios mais frequentemente prescritos em todo o mundo. O uso a longo prazo, no entanto, é complicado por efeitos colaterais não imunológicos graves. Experimentos in vitro em andamento com células primárias humanas em nosso laboratório sugerem que existem diferenças fundamentais na resposta genômica de células imunes e não imunes aos glicocorticóides. Esses e outros aspectos da ação da droga no nível genômico não foram completamente caracterizados. Este estudo tentará gerar uma lista de genes humanos e RNAs não codificantes que são diferencialmente expressos e regulados em resposta a glicocorticóides entre células imunes e não imunes. Esses dados serão usados ​​para identificar os transcritos, suas proteínas correspondentes e as vias moleculares que são os melhores candidatos para intervenção direcionada. Potenciais alvos podem ser validados com pequenas bibliotecas de RNA interferente (siRNA), com o objetivo de longo prazo de desenvolver pequenas moléculas ou intervenções de RNA facilitado por nanopartículas (RNAi) que reproduzam a ação terapêutica dos glicocorticoides nas células imunes, evitando seus efeitos colaterais nocivos sobre outros tecidos.

Voluntários saudáveis ​​serão submetidos a coleta de sangue basal antes de receber uma dose intravenosa única de 250 miligramas de succinato sódico de metilprednisolona. O sangue será coletado em um dos dois regimes: 1 e 2 horas ou 2 e 4 horas após o início da infusão. Uma biópsia de pele pode ser obtida antes que voluntários saudáveis ​​recebam metilprednisolona IV. Nesse caso, a metilprednisolona tópica será aplicada em uma área limitada da pele, contralateral ao local da biópsia de pele basal, e uma biópsia de pele afetiva será obtida 4 horas após a administração da droga, na área onde a metilprednisolona tópica foi aplicada. Telefonemas de acompanhamento 1 dia e 1 semana após a alta documentarão quaisquer efeitos adversos relacionados ao medicamento ou à biópsia de pele. A duração total da participação individual no estudo é de 1 a 5 semanas.

Amostras de sangue serão processadas para isolamento da subpopulação de células hematopoiéticas (neutrófilos, células B, células T CD4+, células T CD8+, monócitos e células natural killer [NK]). Estudos laboratoriais serão realizados nas células purificadas, com o objetivo de entender a resposta humana aos glicocorticóides in vivo no nível de RNA (por exemplo, sequenciamento de RNA, sequenciamento de -RNA pequeno, PCR em tempo real), DNA (por exemplo, ChIP -seq, análise de metilação, sequenciamento de DNA, genotipagem e proteína (por exemplo, citometria de fluxo, espectrometria de massa). A cada momento, os níveis séricos de metilprednisolona serão medidos e a citometria de fluxo para marcadores de linhagem padrão será realizada. As biópsias de pele serão submetidas ao isolamento de RNA para sequenciamento de RNA e sequenciamento de pequenos RNAs. Um fragmento de cada biópsia de pele será submetido ao isolamento e cultivo de fibroblastos para exposição in vitro a glicocorticoides e geração de células-tronco pluripotentes induzidas (iPS).