Genomische reacties van menselijke immuuncellen en niet-immuuncellen op glucocorticoïden

Glucocorticoïden behoren wereldwijd tot de meest voorgeschreven immunosuppressieve en ontstekingsremmende medicijnen. Langdurig gebruik wordt echter bemoeilijkt door ernstige niet-immunologische bijwerkingen. Lopende in vitro experimenten met menselijke primaire cellen in ons laboratorium suggereren dat er inderdaad fundamentele verschillen zijn in de genomische respons van immuun- en niet-immuuncellen op glucocorticoïden. Deze en andere aspecten van de werking van geneesmiddelen op genomisch niveau zijn niet volledig gekarakteriseerd. Deze studie zal proberen een lijst te genereren van menselijke genen en niet-coderende RNA's die differentieel tot expressie worden gebracht en gereguleerd als reactie op glucocorticoïden tussen immuun- en niet-immuuncellen. Deze gegevens zullen worden gebruikt om transcripten, hun overeenkomstige eiwitten en de moleculaire routes te identificeren die de beste kandidaten zijn voor gerichte interventie. Potentiële doelwitten kunnen worden gevalideerd met kleine interfererende RNA-bibliotheken (siRNA), met als langetermijndoel de ontwikkeling van door kleine moleculen of nanodeeltjes gefaciliteerde RNA-interferentie (RNAi)-interventies die de therapeutische werking van glucocorticoïden in immuuncellen reproduceren en tegelijkertijd hun schadelijke bijwerkingen op immuuncellen vermijden. andere weefsels.

Gezonde vrijwilligers zullen bij aanvang een bloedafname ondergaan voordat ze een enkelvoudige intraveneuze dosis van 250 milligram methylprednisolon-natriumsuccinaat krijgen. Bloed zal worden verzameld in een van twee schema's: 1 en 2 uur of 2 en 4 uur na de start van de infusie. Een huidpunchbiopsie kan worden verkregen voordat gezonde vrijwilligers intraveneus methylprednisolon krijgen. Als dat het geval is, zal topisch methylprednisolon worden aangebracht op een beperkt deel van de huid, contralateraal ten opzichte van de plaats van de baseline huidbiopsie, en zal 4 uur na de toediening van het geneesmiddel een huidbiopt worden verkregen uit het gebied waar topisch methylprednisolon is aangebracht. Vervolgtelefoontjes 1 dag en 1 week na ontslag zullen eventuele nadelige effecten gerelateerd aan het medicijn of huidbiopsie documenteren. De totale duur van individuele studiedeelname is 1-5 weken.

Bloedmonsters zullen worden verwerkt voor isolatie van subpopulatie van hematopoëtische cellen (neutrofielen, B-cellen, CD4+ T-cellen, CD8+ T-cellen, monocyten en natural killer [NK]-cellen). Er zullen laboratoriumstudies worden uitgevoerd in de gezuiverde cellen, met als doel de menselijke respons op glucocorticoïden in vivo te begrijpen op het niveau van RNA (bijv. RNA-sequencing, small-RNA-sequencing, real-time PCR), DNA (bijv. ChIP -seq, methylatieanalyse, DNA-sequencing, genotypering en eiwit (bijv. flowcytometrie, massaspectrometrie). Op elk tijdspunt worden serummethylprednisolonspiegels gemeten en flowcytometrie voor standaard afstammingsmarkers uitgevoerd. Huidbiopten zullen worden onderworpen aan RNA-isolatie voor RNA-sequencing en small-RNA-sequencing. Een fragment van elke huidbiopsie ondergaat fibroblastisolatie en kweek voor in vitro blootstelling aan glucocorticoïden en voor het genereren van geïnduceerde pluripotente stamcellen (iPS).