Ihmisen immuuni- ja ei-immuunisolujen genomiset vasteet glukokortikoideille

Glukokortikoidit ovat maailmanlaajuisesti yleisimmin määrättyjä immunosuppressiivisia ja anti-inflammatorisia lääkkeitä. Pitkäaikaista käyttöä vaikeuttavat kuitenkin vakavat ei-immunologiset sivuvaikutukset. Meneillään olevat in vitro -kokeet ihmisen primäärisoluilla laboratoriossamme viittaavat siihen, että immuuni- ja ei-immuunisolujen genomisessa vasteessa glukokortikoideille on todellakin perustavanlaatuisia eroja. Näitä ja muita lääkkeiden toiminnan näkökohtia genomisella tasolla ei ole täysin karakterisoitu. Tämä tutkimus yrittää luoda luettelon ihmisen geeneistä ja ei-koodaavista RNA:ista, jotka ekspressoituvat ja säätelevät eri tavalla vasteena glukokortikoideille immuuni- ja ei-immuunisolujen välillä. Näitä tietoja käytetään tunnistamaan transkriptit, niitä vastaavat proteiinit ja molekyylireitit, jotka ovat parhaita ehdokkaita kohdennettuun interventioon. Mahdolliset kohteet voitaisiin validoida pienillä häiritsevällä RNA- (siRNA) kirjastolla, jolloin pitkän aikavälin tavoitteena on kehittää pienimolekyylisiä tai nanopartikkeleita edistäviä RNA-interferenssi (RNAi) -interventioita, jotka toistavat glukokortikoidien terapeuttisen vaikutuksen immuunisoluissa välttäen samalla niiden haitalliset sivuvaikutukset muita kudoksia.

Terveille vapaaehtoisille suoritetaan lähtötilanteen verinäytteenotto ennen kuin he saavat kerta-annoksen 250 milligrammaa metyyliprednisoloninatriumsukkinaattia suonensisäisesti. Veri otetaan jommallakummalla kahdesta ohjelmasta: 1 ja 2 tuntia tai 2 ja 4 tuntia infuusion aloittamisen jälkeen. Ihonlevistysbiopsia voidaan ottaa ennen kuin terveet vapaaehtoiset saavat IV metyyliprednisolonia. Jos näin on, paikallista metyyliprednisolonia levitetään rajoitetulle ihoalueelle, vastakkaiseen ihon lähtökohtaan nähden, ja affitional ihobiopsia otetaan 4 tuntia lääkkeen annon jälkeen alueelta, jolle paikallista metyyliprednisolonia levitettiin. Seurantapuhelut 1 päivä ja 1 viikko kotiutuksen jälkeen dokumentoivat kaikki lääkkeeseen tai ihobiopsiaan liittyvät haittavaikutukset. Yksittäisen opiskelun kokonaiskesto on 1-5 viikkoa.

Verinäytteet käsitellään hematopoieettisten solujen alapopulaation (neutrofiilit, B-solut, CD4+ T-solut, CD8+ T-solut, monosyytit ja luonnolliset tappaja [NK]-solut) eristämiseksi. Laboratoriotutkimukset suoritetaan puhdistetuissa soluissa tavoitteena ymmärtää ihmisen vaste glukokortikoideille in vivo RNA:n (esim. RNA-sekvensointi, pieni-RNA-sekvensointi, reaaliaikainen PCR), DNA:n (esim. ChIP) tasolla. -seq, metylaatioanalyysi, DNA-sekvensointi, genotyypitys ja proteiini (esim. virtaussytometria, massaspektrometria). Joka ajankohtana seerumin metyyliprednisolonitasot mitataan ja virtaussytometria standardeille linjamarkkereille suoritetaan. Ihobiopsiat altistetaan RNA-eristykseen RNA-sekvensointia ja pien-RNA-sekvensointia varten. Jokaisen ihobiopsian fragmentille tehdään fibroblastieristys ja -viljelmä glukokortikoideille altistumista varten in vitro ja indusoitujen pluripotenttien kantasolujen (iPS) muodostamiseksi.