Réponses génomiques des cellules humaines immunitaires et non immunitaires aux glucocorticoïdes

Les glucocorticoïdes font partie des médicaments immunosuppresseurs et anti-inflammatoires les plus fréquemment prescrits dans le monde. L'utilisation à long terme, cependant, est compliquée par de graves effets secondaires non immunologiques. Des expériences in vitro en cours avec des cellules primaires humaines dans notre laboratoire suggèrent qu'il existe en effet des différences fondamentales dans la réponse génomique des cellules immunitaires et non immunitaires aux glucocorticoïdes. Ces aspects et d'autres de l'action des médicaments au niveau génomique n'ont pas été complètement caractérisés. Cette étude tentera de générer une liste de gènes humains et d'ARN non codants qui sont exprimés et régulés de manière différentielle en réponse aux glucocorticoïdes entre les cellules immunitaires et non immunitaires. Ces données seront utilisées pour identifier les transcrits, leurs protéines correspondantes et les voies moléculaires qui sont les meilleurs candidats pour une intervention ciblée. Des cibles potentielles pourraient être validées avec des bibliothèques de petits ARN interférents (siARN), dans le but à long terme de développer des interventions d'interférence d'ARN (ARNi) facilitées par des petites molécules ou des nanoparticules qui reproduisent l'action thérapeutique des glucocorticoïdes dans les cellules immunitaires tout en évitant leurs effets secondaires nocifs sur autres tissus.

Les volontaires en bonne santé subiront une collecte de sang de base avant de recevoir une dose intraveineuse unique de 250 milligrammes de succinate sodique de méthylprednisolone. Le sang sera prélevé selon l'un des deux schémas suivants : 1 et 2 heures ou 2 et 4 heures après le début de la perfusion. Une biopsie cutanée à l'emporte-pièce peut être obtenue avant que des volontaires sains ne reçoivent de la méthylprednisolone IV. Si tel est le cas, la méthylprednisolone topique sera appliquée sur une zone limitée de la peau, controlatérale au site de la biopsie cutanée de base, et une biopsie cutanée affitionnelle sera obtenue 4 heures après l'administration du médicament, à partir de la zone où la méthylprednisolone topique a été appliquée. Des appels téléphoniques de suivi 1 jour et 1 semaine après la sortie documenteront tout effet indésirable lié au médicament ou à la biopsie cutanée. La durée totale de la participation individuelle à l'étude est de 1 à 5 semaines.

Des échantillons de sang seront traités pour l'isolement de la sous-population de cellules hématopoïétiques (neutrophiles, lymphocytes B, lymphocytes T CD4+, lymphocytes T CD8+, monocytes et cellules tueuses naturelles [NK]). Des études en laboratoire seront réalisées dans les cellules purifiées, dans le but de comprendre la réponse humaine aux glucocorticoïdes in vivo au niveau de l'ARN (par exemple, séquençage d'ARN, séquençage de petits ARN, PCR en temps réel), de l'ADN (par exemple, puce -seq, analyse de méthylation, séquençage de l'ADN, génotypage et protéines (par exemple, cytométrie en flux, spectrométrie de masse). À chaque instant, les taux sériques de méthylprednisolone seront mesurés et une cytométrie en flux pour les marqueurs de lignée standard sera effectuée. Les biopsies cutanées seront soumises à l'isolement de l'ARN pour le séquençage de l'ARN et le séquençage des petits ARN. Un fragment de chaque biopsie cutanée subira l'isolement et la culture des fibroblastes pour une exposition in vitro aux glucocorticoïdes et pour la génération de cellules souches pluripotentes induites (iPS).