Genomiske reaktioner af humane immune og ikke-immune celler på glukokortikoider

Glukokortikoider er blandt de hyppigst ordinerede immunsuppressive og antiinflammatoriske lægemidler på verdensplan. Langtidsbrug kompliceres dog af alvorlige ikke-immunologiske bivirkninger. Igangværende in vitro-eksperimenter med humane primære celler i vores laboratorium tyder på, at der faktisk er fundamentale forskelle i immun- og ikke-immune cellers genomiske respons på glukokortikoider. Disse og andre aspekter af lægemiddelvirkning på genomisk niveau er ikke blevet fuldstændig karakteriseret. Denne undersøgelse vil forsøge at generere en liste over humane gener og ikke-kodende RNA'er, der er differentielt udtrykt og reguleret som reaktion på glukokortikoider mellem immunceller og ikke-immune celler. Disse data vil blive brugt til at identificere transkripter, deres tilsvarende proteiner og de molekylære veje, der er de bedste kandidater til målrettet intervention. Potentielle mål kunne valideres med små interfererende RNA (siRNA) biblioteker med det langsigtede mål at udvikle små-molekyle- eller nanopartikelfaciliteret RNA-interferens (RNAi)-interventioner, der reproducerer den terapeutiske virkning af glukokortikoider i immunceller og samtidig undgår deres skadelige bivirkninger på andet væv.

Raske frivillige vil gennemgå baseline blodprøvetagning, før de får en enkelt intravenøs dosis på 250 milligram methylprednisolonnatriumsuccinat. Blod vil blive opsamlet i en af ​​to regimer: 1 og 2 timer eller 2 og 4 timer efter starten af ​​infusionen. En hudpunch-biopsi kan opnås, før raske frivillige får IV methylprednisolon. Hvis det er tilfældet, vil topisk methylprednisolon blive påført på et begrænset hudområde, kontralateralt til stedet for baseline-hudbiopsien, og en affitional hudbiopsi vil blive opnået 4 timer efter lægemiddeladministration fra det område, hvor topisk methylprednisolon blev påført. Opfølgende telefonopkald 1 dag og 1 uge efter udskrivelsen vil dokumentere eventuelle bivirkninger relateret til lægemidlet eller hudbiopsi. Den samlede længde af individuel studiedeltagelse er 1-5 uger.

Blodprøver vil blive behandlet til isolering af underpopulation af hæmatopoietiske celler (neutrofiler, B-celler, CD4+ T-celler, CD8+ T-celler, monocytter og naturlige dræberceller [NK]). Laboratorieundersøgelser vil blive udført i de oprensede celler med det formål at forstå den menneskelige reaktion på glukokortikoider in vivo på niveauet af RNA (f.eks. RNA-sekventering, lille -RNA-sekventering, real-time PCR), DNA (f.eks. ChIP) -seq, methyleringsanalyse, DNA-sekventering, genotypebestemmelse og protein (f.eks. flowcytometri, massespektrometri). På hvert tidspunkt vil serum-methylprednisolon-niveauer blive målt, og flowcytometri for standardlinjemarkører vil blive udført. Hudbiopsier vil blive udsat for RNA-isolering til RNA-sekventering og small-RNA-sekventering. Et fragment af hver hudbiopsi vil gennemgå fibroblastisolering og -dyrkning til in vitro eksponering for glukokortikoider og til dannelse af inducerede pluripotente stamceller (iPS).