체강 질병 환자에게 인간 십이지장충 Necator Americanus 접종: 면역 및 글루텐 감수성 평가

배경 및 목적: 여러 가지 증거에 따르면 선진국의 인간 개체군에서 연충류가 사라진 것이 소위 위생 가설이라고 하는 자가 면역 질환의 급증에 원인이 될 수 있습니다. 정지기 체강 질병이 있는 건강한 피험자의 작은 코호트를 사용하여 우리의 목표는 인간의 유비쿼터스 구충(HW)인 Necator americanus가 글루텐 도전(GC)에 대한 면역 반응을 억제하는지 테스트하는 것입니다. 이 연구는 글루텐 불내증이 있는 사람들에게 잠재적인 이점이 있을 뿐만 아니라 숙주-기생충 상호작용의 점막 수준과 근본적인 면역 반응, 그리고 확장하여 IBD에서 염증 반응을 조절합니다. 유전적으로 대장염에 걸리기 쉬운 동물이나 임상 IBD(복잡한 보조 인자가 존재하는 경우)에서 실험적인 연충 감염과 달리, 이 연구는 연충에 노출된 배경이 없고 ​​현재 손상되지 않은 건강한 인간에서 일어나는 일을 다룹니다. 염증이나 면역억제제에 의해

방법: 6개월 이상(이력 및 정상 조직 트랜스글루타미나제[tTG] 기준) 무글루텐(GF) 식단을 준수하는 잘 문서화된 체강 질병(DQ2 표현형)이 있는 20명의 건강한 성인을 모집하고 무작위로 2명에게 할당합니다. 10개의 그룹. 10마리는 십이지장충(HW) 애벌레로 접종되고 10마리는 감염되지 않은 대조군으로 사용됩니다. 연구 대상과 조사자는 질병 활동과 면역 프로필을 비교할 수 있도록 눈이 멀게 됩니다. HW 유충은 이전에 이러한 목적으로 감염된 자원 기증자가 제공한 대변에서 배양됩니다. 기존의 내시경 검사 및 생검은 구강 및 직장 GC 전후에 대상자당 2회 수행됩니다(각각 내시경당 직장에 40ml 슬러리에 주입된 40ml 슬러리에 6g의 글루텐 3-5일 동안 하루에 두 번 밀빵 2x50g 조각). 직장 생검은 GC 후 4시간에 수행되고 십이지장 생검은 6일 후에 수집됩니다. 십이지장충 감염 전후 및 GC 후 6일째에 혈액을 채취할 것입니다. 따라서, 4개의 데이터 세트가 비교를 위해 축적될 것이다: HW 감염 전 10명의 GF 체강-피험자; HW 감염 후 10 GF 셀리악-s; HW 감염 전 10 GC 셀리악-s; HW 감염 후 10 GC celiac-s.

안전성: 실험적인 십이지장충 감염의 안전성을 문서화한 많은 관찰 데이터가 우리 자신과 다른 사람의 연구 모두에서 이용 가능합니다. 우리 연구원 중 2명은 부작용 없이 3년 동안 간헐적인 "추가" 접종을 포함하여 감염을 유지했습니다.

결과 측정: 대상 증상 일지, 전체 혈액 분석, C-반응성 단백질, 전체 및 특정 IgE 및 혈청 트립타제 활동이 포함됩니다. 십이지장(습지 분류) 및 직장 조직학은 단일 병리학자에 의해 등급이 매겨집니다. 술잔 세포와 점막 T 세포는 반응의 정량화를 돕기 위해 염색됩니다. 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 및 장 생검으로부터의 점막 림프구는 체외에서 성장되고 글루텐 항원 면역우세 펩티드(알파-글리아딘 57-73 Q65E, QLQPFPQPELPYPQPQS)로 도전됩니다. HW 및 글루텐 항원에 반응하는 세포 증식 및 사이토카인 프로필은 PBMC 및 장 생검에서 측정됩니다. 접종 시기를 변경하면 새로 확립된(Th2-우성) 대 성숙한(Th-중성) 기생충 감염 사이에 심오한 차이가 있는 경우에만 Th2 반응의 중요성에 대한 가치 있는 방향을 제공할 수 있습니다. 인간 감염. 관심 유전자의 전사 수준은 정량적 실시간 PCR 및 마이크로어레이를 사용하여 평가됩니다.

결과: 귀무 가설은 Necator americanus가 셀리악병 환자의 글루텐 감수성을 억제할 만큼 충분히 면역 과정을 변화시키지 않는다는 것입니다. 측정된 결과는 점막 염증의 중증도, 면역 과정의 특성 및 강도를 포함한 체강 질병의 활동을 반영합니다. 그러나 이 연구는 IBD에 관한 것입니다. 셀리악병은 IBD가 아니지만 이 IBD 모델은 필요에 따라 도입하거나 배제할 수 있는 특정 항원에 대한 십이지장과 직장의 유사 자가면역 반응을 테스트할 수 있는 이전에 탐색되지 않은 기회를 제공합니다. 면역 프로파일링은 크론병 및 궤양성 대장염에서 기생충의 가능성에 대한 명확한 통찰력을 제공하는 IBD에서 염증을 유발하는 특성에 초점을 맞출 것입니다.

연장 연구; 연구 연장에 등록하도록 초청된 대조군 환자; 각각은 원래 십이지장충 코호트(위와 같이)에 따라 접종, 도전 ​​및 조사됩니다.

저용량 글루텐 챌린지 연구: 이 시험 연장은 십이지장충 감염이 셀리악병 환자의 소량의 글루텐에 대한 내성을 개선할 수 있는지 확인하기 위한 것입니다. 연구가 열려 있습니다. 이미 십이지장충에 감염되었고 혈액 및 점막 기준선 특성이 주의 깊게 문서화된 체강 환자를 활용합니다. 글루텐 노출은 시험 환경에서 다른 사람들이 안전하고 잘 견디는 것으로 입증된 용량을 적용합니다. 글루텐 불내증을 완화하기 위한 십이지장충 감염의 효과는 챌린지 후 수집된 조직과 비교하여 이전에 취한(챌린지 전) 생검에서 발생하는 정량화 가능한 변화에 의해 측정될 것입니다. 조직학은 이전에 설명한 대로 수행됩니다. 생검은 중성 완충 포르말린에 고정되고 처리되고 조심스럽게 방향이 지정되며 파라핀 왁스에 내장됩니다. 섹션(3 μm)은 헤마톡실린 및 에오신(H&E)으로 염색되고 항-CD8(또는 가용성에 따라 항-CD3) 항체(Novocastra Laboratories Ltd)로 면역염색됩니다. 100개의 유핵 장세포(100NE)당 상피내 림프구(IEL)는 각 생검에서 융모 끝과 선와의 기저부(Vh/Cd) 사이에서 무작위로 선택된 24개 부위에서 계산됩니다. 십이지장충 감염 후 수집된 조직에 대한 개별적 및 집단적 결과는 글루텐이 없는 식단을 유지하는 동안 파스타 챌린지 후 수집된 조직의 결과와 비교됩니다.