Cöliákiás betegek beoltása humán kampósféreg Necator Americanus-szal: Az immunitás és a gluténérzékenység értékelése

Háttér és célok: Számos bizonyíték utal arra, hogy a fejlett országokban a helminták emberi populációiból való eltűnése lehet a felelős az autoimmun betegségek felszaporodásáért, ez az úgynevezett higiéniai hipotézis. Célunk egy nyugalmi állapotú cöliákiában szenvedő egészséges alanyok egy kis csoportjának felhasználásával annak tesztelése, hogy az emberek mindenütt jelenlévő horogféregje (HW), a Necator americanus gátolja-e az immunválaszt a glutén kihívásra (GC). Amellett, hogy a glutén intoleranciában szenvedők számára hasznos lehet, ez a tanulmány lehetőséget ad a gazda-parazita kölcsönhatás nyálkahártya szintjén történő részletes vizsgálatára, valamint az alapjául szolgáló immunválaszra, és kiterjesztve a fonálféreg fertőzés lehetőségére is. modulálja a gyulladásos választ IBD-ben. Ellentétben a vastagbélgyulladásra genetikailag hajlamos állatokban vagy klinikai IBD-ben (ahol komplikációt okozó kofaktorok széles skálája) előforduló kísérleti bélféreg fertőzésekkel, ez a tanulmány azzal foglalkozik, hogy mi történik egészséges emberekben, akiknek hátterében nem áll fenn féregfertőzés, és akik jelenleg nincsenek veszélyeztetve. gyulladásos vagy immunszuppresszív gyógyszerekkel.

Módszerek: Húsz, jól dokumentált cöliákiában (DQ2 fenotípus) szenvedő egészséges felnőttet vesznek fel, akik 6 hónapig gluténmentes (GF) diétát követnek (a kórelőzmény és a normál szöveti transzglutamináz [tTG] alapján), és véletlenszerűen két csoportba osztják be őket. tízfős csoportok. Tízet horgosféreg (HW) lárvával oltanak be, 10 pedig nem fertőzött kontrollként fog szolgálni. A vizsgálati alanyok és a vizsgálók vakok lesznek, hogy lehetővé tegyék a betegségaktivitás és az immunprofilok összehasonlítását. A HW lárvákat önkéntes donor által szállított, korábban erre a célra fertőzött ürülékből tenyésztik ki. A hagyományos endoszkópiát és biopsziát alanyonként kétszer kell elvégezni, orális és rektális GC előtt és után (2x50 g szelet búzakenyér naponta kétszer 3-5 napon keresztül és 6 g glutén 40 ml-es zagyban, endoszkóponként a végbélbe csepegtetve). A rektális biopsziát 4 órával, a nyombélbiopsziát pedig hat nappal a GC után veszik; vért vesznek a horogféregfertőzés elsajátítása előtt és után, valamint a GC-t követő hatodik napon. Így összehasonlítás céljából négy adatsort gyűjtünk össze: tíz GF cöliákiás alany a HW fertőzés előtt; 10 GF cöliákia HW fertőzés után; tíz GC cöliákia a HW fertőzés előtt; és 10 GC cöliákia HW fertőzés után.

Biztonság: A kísérleti kampósféreg-fertőzés biztonságát dokumentáló megfigyelési adatok nagy tömege áll rendelkezésre, mind saját, mind mások tanulmányaiból. Két kutatónk három évig tartotta fenn a fertőzéseket, beleértve az alkalmankénti "feltöltéses" oltásokat is, káros hatások nélkül.

Eredményintézkedések: Ezek a következők: alany tüneti naplója, teljes vérvizsgálat, C-reaktív fehérje, teljes és specifikus IgE és szérum triptáz aktivitás. A duodenális (Marsh-osztályozás) és a végbél szövettanát egyetlen patológus osztályozza. A serlegsejteket és a nyálkahártya T-sejteket megfestik a válaszok mennyiségi meghatározásának elősegítése érdekében. A perifériás vér mononukleáris sejtjeit (PBMC) és a bélbiopsziákból származó nyálkahártya limfocitákat ex vivo növesztjük, és gluténantigén immundomináns peptiddel (alfa-gliadin 57-73 Q65E, QLQPFPQPELPYPQPQS) fertőzzük meg. A sejtproliferációt és a citokinprofilokat a HW-re és a gluténantigénekre adott válaszként PBMC-kből és bélbiopsziákból mérik. Az oltások időzítésének változtatása csak akkor adhat érdemi iránymutatást a Th2 válasz fontosságában, ha mélyreható különbség van az újonnan kialakult (Th2-domináns) és az érett (Th-semleges) parazitafertőzések között, amint azt korábbi kísérleti munkánk is sugallja. emberi fertőzések. Az érdeklődésre számot tartó gének transzkripciójának szintjét kvantitatív valós idejű PCR és microarray segítségével értékeljük.

Eredmények: A nullhipotézis az, hogy a Necator americanus nem változtatja meg kellőképpen az immunfolyamatot ahhoz, hogy elnyomja a lisztérzékenységet a cöliákiában szenvedő betegeknél. A mért eredmények tükrözik a cöliákia aktivitását, beleértve a nyálkahártya-gyulladás súlyosságát, valamint az immunfolyamatok jellegét és intenzitását. Ez a tanulmány ugyanannyira az IBD-ről szól. A cöliákia nem IBD, de az IBD ezen modellje korábban feltáratlan lehetőséget kínál a duodenumban és a végbélben a kvázi autoimmun válaszok tesztelésére egy specifikus antigénre, amely igény szerint bevezethető vagy kizárható. Az immunprofil azokra a jellemzőkre összpontosít, amelyek az IBD-ben a gyulladást előidézik, világos betekintést nyújtva a férgek potenciáljára Crohn-betegségben és fekélyes vastagbélgyulladásban.

Kiterjesztési tanulmány; Kontroll betegek, akiket meghívtak a vizsgálat kiterjesztésére; mindegyiket be kell oltani, meg kell támadni és ki kell vizsgálni az eredeti horogféreg kohorsz szerint (a fentiek szerint).

Alacsony dózisú glutén kihívás Tanulmány: Ez a vizsgálati kiterjesztés azt próbálja megállapítani, hogy a horogféreg-fertőzés javíthatja-e a kis mennyiségű glutén toleranciáját a cöliákiában szenvedő betegeknél. A dolgozószoba nyitva van. Olyan cöliákiás betegeket használ, akik már fertőzöttek horogféreggel, és akiknél a vér és a nyálkahártya kiindulási jellemzőit gondosan dokumentálták. A gluténexpozíció olyan dózisokat alkalmaz, amelyekről a kísérleti körülmények között mások biztonságosnak és jól tolerálhatónak bizonyultak. A kampósféreg-fertőzés hatékonyságát a gluténintolerancia mérséklésében a korábban vett biopsziákban (kihívás előtt) bekövetkező számszerűsíthető változásokkal mérjük, összehasonlítva a fertőzés után gyűjtött szövetekkel. A szövettani vizsgálatot a korábban leírtak szerint végezzük. A biopsziákat semleges pufferolt formalinban kell rögzíteni, feldolgozni, gondosan orientálni és paraffinviaszba kell ágyazni. A metszeteket (3 μm) hematoxilinnel és eozinnal (H&E) festjük, és anti-CD8 (vagy a rendelkezésre állástól függően anti-CD3) antitestekkel (Novocastra Laboratories Ltd.) immunfestjük. Az intraepiteliális limfocitákat (IEL) 100 maggal rendelkező enterocitra (100NE) számítjuk 24 véletlenszerűen kiválasztott helyen a boholyvég és a kripta alapja között (Vh/Cd) minden biopsziában. A kampósféreg-fertőzés után, de gluténmentes diéta alatt gyűjtött szövetek egyéni és kollektív eredményeit összehasonlítják a tésztafertőzés után gyűjtött szövetekből származó eredményekkel.