Wpływ SB CD na chylomikrony

Tło:

B1 Wcześniejsze piśmiennictwo i badania Choroba Leśniowskiego-Crohna (ChLC) charakteryzuje się spontanicznym, przewlekłym, nawracającym i ustępującym zapaleniem przewodu pokarmowego. Etiologia leżąca u podstaw choroby jest nieznana, ale prawdopodobnie rozwija się ona wtórnie do bodźca środowiskowego u osoby predysponowanej genetycznie, co skutkuje rozregulowaną odpowiedzią immunologiczną na mikrobiom jelitowy. Wiele wysiłku poświęcono zrozumieniu roli mikrobiomu jelitowego, podatności genetycznej oraz immunologii warunkującej stan, aby dostosować leczenie mające na celu zmniejszenie stanu zapalnego.

Przed pojawieniem się obecnych terapii medycznych charakterystyczną cechą charakterystyczną CD odnotowaną przez wczesnych patologów oceniających próbki tkanek była znacząca zmiana układu limfatycznego przewodu pokarmowego z zakrzepami limfocytarnymi, agregatami limfocytów i układem limfatycznym zablokowanym przez ziarniniaki, co odpowiada przewlekłemu zapaleniu naczyń chłonnych (2). Co więcej, pierwsi badacze wykazali, że blokowanie odcinków regionalnych naczyń limfatycznych jelita cienkiego skutkowało segmentalną chorobą jelit podobną do CD (3). Barwienie immunohistochemiczne potwierdziło obecność limfangiektazji, limfocytarnego zapalenia naczyń okołochłonnych, niedrożności limfocytów lub ziarniniaków oraz zapalnych grudek chłonnych u pacjentów z CD (4). Powyżej tych zablokowanych naczyń limfatycznych naczynia pozostają rozdęte przez limfocyty (5). Nowsze badania wykazały, że gęstość limfatyczna jest również znacznie zwiększona w tkance jelita krętego i okrężnicy u pacjentów z CD (6). Co więcej, związek między zdrowiem jelit a układem limfatycznym został podkreślony w badaniach, które wykazały, że niektóre rodzaje bakterii i wirusów spowodowały głęboką przebudowę krezkowego układu limfatycznego. Wyniki obejmowały rozwój przewlekłej limfadenopatii i zwiększoną przepuszczalność, podobną do obserwowanej w CD (7). Biorąc pod uwagę wyraźne zmiany strukturalne, które występują w krezkowym układzie limfatycznym w CD (1), potrzebne są badania w celu oceny, czy funkcja limfatyczna również jest zmieniona.

Chylomikrony to lipoproteiny bogate w cholesterol i triacyloglicerol, syntetyzowane w jelicie cienkim i transportowane przez układ limfatyczny. Zatem doustne pobieranie trioleinianu i cholesterolu doprowadzi do włączenia znaczników do chylomikronów.

Za pomocą testu ELISA i analizy spektrometrii mas te znakowane chylomikrony można oznaczać ilościowo w surowicy, służąc w ten sposób jako marker wchłaniania i przechodzenia przez układ limfatyczny. W badaniach na zdrowych osobach wykorzystano ten zatwierdzony sposób oceny wychwytu i transportu limfy. Po spożyciu występuje opóźnienie <60 minut w pojawieniu się chylomikronów znakowanych 13C w surowicy, z maksymalnym okresem między 180 a 240 minutami. Nasz protokół ma na celu wykorzystanie wiedzy zdobytej podczas innych badań doustnych znaczników na Uniwersytecie Waszyngtońskim w optymalizacji takich badań, w tym trwających badań dr Todda Cade'a, które koncentrują się na wydzielaniu chylomikronów u pacjentów ze stanem przedcukrzycowym. W naszym badaniu ocenimy pacjentów ze znaczną CD w jelicie cienkim i porównamy ich ze zdrowymi kontrolami przy użyciu podobnej metody.

To badanie pilotażowe byłoby pierwszym, które oceniałoby ilościową funkcję układu limfatycznego w CD. Dałoby to podstawę do dalszych badań oceniających układ limfatyczny krezki i jego rolę w patogenezie CD oraz jako cel leczenia.

C Cele nauki

C1 Główny cel Śledzenie ładunku transportowanego naczyniami limfatycznymi u pacjentów z chorobą Leśniowskiego-Crohna z zajęciem jelita cienkiego w celu oceny możliwych wad układu limfatycznego u pacjentów w porównaniu ze zdrowymi osobami z grupy kontrolnej.

C2 Cel drugorzędny Scharakteryzować zmiany w przedposiłkowym i poposiłkowym metabolizmie lipidów wynikające z choroby Leśniowskiego-Crohna atakującej jelito cienkie.

C3 Cel trzeciorzędny Przeprowadzić analizy lipidomiczne w celu określenia, czy chylomikrony wchłonięte z jelita cienkiego niosą odmienne sygnatury lipidów drobnoustrojów w porównaniu ze zdrowymi osobnikami kontrolnymi (np. LPS, comendamid (8)).

C4 Czwartorzędowy Cel Zmierz wchłanianie lipidów z jelita za pomocą analizy oddechu 13CO2.

Projekt badania D

D1 Przegląd lub podsumowanie projektu To badanie będzie wykorzystywać 2-grupowy projekt próbny, w którym 40 uczestników (20 pacjentów z CD i 20 z grupy kontrolnej) odwiedzi raz w tym badaniu karmienia (wskaźnik doustny) i infuzji, po całonocnym poście.

Uczestnicy będą rekrutowani z Washington University School of Medicine IBD Center, Washington University's Volunteers for Health, Centre for Community Based Research i klinik IBD powiązanych z Washington University w otaczającej społeczności St. Louis.

Główny badacz, współpracujący lekarze i koordynatorzy badania będą odpowiedzialni za identyfikację uczestników za pomocą plakatów, wiadomości e-mail i istniejących baz danych uczestników.

E Procedury Studiów

E1 Badanie przesiewowe pod kątem kwalifikowalności Personel Centrum IBD zidentyfikuje kwalifikujących się pacjentów z grupy pacjentów. Przez telefon każdy uczestnik zostanie poproszony o serię wstępnych pytań przesiewowych w celu ustalenia natychmiastowego wykluczenia z badania na podstawie kryteriów wykluczenia i włączenia. Cel badania i krótki przegląd procedur, zaangażowania czasowego i wynagrodzenia zostaną omówione telefonicznie przed wyrażeniem zgody na udział.

Wizyta studyjna E2

1. 7:00: Badany zgłasza się do Jednostki Badań Klinicznych w Szkole Medycznej Uniwersytetu Waszyngtońskiego.

   1. Pacjent zostanie poproszony o pominięcie śniadania i zgłoszenie się do Jednostki Badań Klinicznych po całonocnym poście (> 8 godzin) bez niczego przyjmowanego doustnie poza wodą. Badani zostaną poproszeni o unikanie kofeiny i alkoholu przez co najmniej 24 godziny przed przyjęciem na wizytę studyjną. W przeddzień wizyty badani otrzymają instrukcje dotyczące wystandaryzowanego posiłku na śniadanie, obiad i kolację zawierającego łącznie 2165 kalorii (46% całkowitej energii z węglowodanów, 40% z tłuszczu i 14% z białka) . Płynna formuła (Ensure; Ross Laboratories, Columbus, OH) zawierająca 250 kcal (40 g węglowodanów, 6,1 g tłuszczu i 8,8 g białka) zapewnia całkowite wypełnienie zapasów glikogenu w wątrobie jako przekąska przed snem. Ta przekąska jest wliczona w całkowitą liczbę kalorii podaną powyżej.
   2. Uczestnik zostanie poddany pomiarowi wzrostu i masy ciała za pomocą wagi elektronicznej i stadiometru w Jednostce Badań Klinicznych. BMI zostanie obliczone na podstawie wzrostu i wagi według wzoru: [masa(kg)/[wzrost(metry)2]. Ciśnienie krwi będzie mierzone i rejestrowane.
   3. Uczestnik wypełni ankietę dotyczącą historii choroby, która obejmuje uzyskanie listy aktualnie przyjmowanych leków. Wypełnienie kwestionariusza może nastąpić po wyjściowym pobraniu krwi i podaniu posiłku
2. Cewnik zostanie wprowadzony do drugiej żyły łokciowej w celu pobrania próbek krwi.
3. 8 rano: Badanie metabolizmu: Okres bazowy: Wyjściowe próbki krwi i oddechu w celu określenia wzbogacenia tła w izotopy. Następnie badany spożyje płynny posiłek testowy przygotowany przez personel żywienia CRU, składający się z 27 g Sol Carb, 1032 g Boost Plus, 3,2 g oleju rzepakowego, 0,2 g lecytyny, 5 mg/kg [1,2, 3, 7, 8-13C8]trioleinian glicerolu i 40 g wody. Uczestnicy zostaną poproszeni o spożycie płynnego posiłku w ciągu 20 minut w celu uzyskania konsystencji, zeskrobując boki pojemnika, aby zapewnić maksymalne spożycie. Dodatkowo, 30 minut po spożyciu posiłku zostanie zainicjowany wlew 75 mikromoli/kg bolusa (1,1,2,3,3-2H5)glicerolu w celu śledzenia katabolizmu VLDL. Próbki krwi i oddechu będą pobierane 0, 15, 30, 45, 60, 90, 120, 150, 180, 240, 300 i 360 minut po spożyciu posiłku. Kalorymetria pośrednia zostanie również zastosowana przy użyciu techniki wentylowanego kaptura przez 10 minut przed każdym pobraniem próbki oddechu w celu określenia tempa metabolizmu spoczynkowego do obliczeń znaczników i pomiaru całkowitego utlenienia kwasów tłuszczowych. Próbki krwi zostaną przeanalizowane pod kątem wzbogacenia znacznikiem i całkowitego stężenia wolnych kwasów tłuszczowych, trójglicerydów i cholesterolu.
4. 14:00: Lunch będzie serwowany przez CRU, przygotowany przez kuchnię CRU. Koniec wizyty studyjnej.