Efeito do SB CD no Quilomícron

Fundo:

B1 Literatura e Estudos Anteriores A doença de Crohn (DC) é caracterizada por inflamação espontânea, crônica recidivante e remitente do trato gastrointestinal. A etiologia subjacente da doença é desconhecida, mas provavelmente se desenvolve secundária a um estímulo ambiental em uma pessoa geneticamente predisposta que resulta em uma resposta imune desregulada ao microbioma intestinal. Um esforço considerável foi feito para entender o papel do microbioma intestinal, as suscetibilidades genéticas em jogo e a imunologia por trás da condição para adaptar tratamentos destinados a reduzir a inflamação.

Antes do advento das terapias médicas atuais, uma característica definidora da DC observada pelos primeiros patologistas que avaliavam amostras de tecido era uma alteração significativa do sistema linfático gastrointestinal com trombos linfocíticos, agregados de linfócitos e vasos linfáticos obstruídos por granulomas consistentes com linfangite crônica (2). Além disso, os primeiros pesquisadores mostraram que a obstrução de segmentos dos linfáticos regionais do intestino delgado resultou em uma doença intestinal segmentar semelhante à DC (3). A coloração imuno-histoquímica confirmou a presença de linfangiectasias, perilinfangite linfocítica, linfócitos ou linfáticos obstruídos por granulomas e folículos linfóides inflamatórios em pacientes com DC (4). A montante desses linfáticos obstruídos, os vasos permanecem distendidos com linfócitos (5). Estudos mais recentes mostraram que a densidade linfática também é significativamente aumentada no tecido ileal e colônico de pacientes com DC (6). Além disso, a relação entre a saúde intestinal e linfática foi destacada em estudos que descobriram que certos tipos de bactérias e vírus resultaram em um sistema linfático mesentérico profundamente remodelado. Os achados incluíram o desenvolvimento de linfadenopatia crônica e aumento da permeabilidade, semelhante ao observado na DC (7). Dadas as alterações estruturais proeminentes que ocorrem no sistema linfático mesentérico na DC (1), estudos são necessários para avaliar se a função linfática também está alterada.

Os quilomícrons são lipoproteínas ricas em colesterol e triacilglicerol sintetizadas pelo intestino delgado e transportadas através dos vasos linfáticos. Assim, a absorção oral de trioleato e colesterol levará à incorporação dos traçadores nos quilomícrons.

Usando ELISA e análise de espectrometria de massa, esses quilomícrons marcados podem ser quantificados no soro, servindo assim como um marcador de absorção e trânsito através dos vasos linfáticos. Estudos de indivíduos saudáveis ​​utilizaram este meio validado para avaliar a absorção e o transporte linfático. Após a ingestão, há um atraso <60 minutos no aparecimento de quilomícrons marcados com 13C no soro, com pico ocorrendo entre 180 e 240 minutos. Nosso protocolo é projetado para aproveitar o conhecimento que outros estudos de marcadores orais na Universidade de Washington aprenderam na otimização de tais estudos, incluindo estudos em andamento do Dr. Todd Cade que se concentra na secreção de quilomícrons em pacientes pré-diabéticos. Nosso estudo avaliará pacientes com DC significativa do intestino delgado e os comparará com controles saudáveis ​​usando um método semelhante.

Este estudo piloto seria o primeiro a avaliar a função quantitativa dos vasos linfáticos na DC. Isso forneceria a base para estudos adicionais avaliando os linfáticos mesentéricos e seu papel na patogênese da DC e como alvo de tratamento.

C Objetivos do estudo

Objetivo principal C1 Acompanhar a carga transportada por vasos linfáticos em pacientes com doença de Crohn com envolvimento do intestino delgado como forma de avaliar possíveis defeitos no sistema linfático em pacientes em comparação com controles saudáveis.

C2 Objetivo Secundário Caracterizar alterações no metabolismo lipídico pré e pós-prandial decorrentes da doença de Crohn afetando o intestino delgado.

C3 Objetivo terciário Realizar análises lipidômicas para determinar se os quilomícrons absorvidos do intestino delgado carregam assinaturas lipídicas microbianas distintas em comparação com indivíduos de controle saudáveis ​​(por exemplo, LPS, commendamida (8)).

C4 Quaternário Objetivo Medir a absorção de lipídios do intestino usando a análise da respiração de 13CO2.

D Desenho do Estudo

D1 Visão geral ou resumo do projeto Este estudo utilizará um projeto de estudo de 2 grupos em que 40 participantes (20 pacientes com DC e 20 controles) visitarão uma vez para este estudo de alimentação (rastreador oral) e infusão, após um jejum noturno.

Os participantes serão recrutados no Centro de IBD da Escola de Medicina da Universidade de Washington, nos Voluntários para a Saúde da Universidade de Washington, no Centro de Pesquisa Comunitária e nas clínicas de IBD afiliadas à Universidade de Washington na comunidade vizinha de St. Louis.

O investigador principal, os médicos colaboradores e o(s) coordenador(es) do estudo serão responsáveis ​​por identificar os participantes por meio do uso de pôsteres, e-mail e bancos de dados de participantes existentes.

Procedimentos de estudo E

Triagem E1 para Elegibilidade A equipe do IBD Center identificará os indivíduos elegíveis do braço do paciente. Por telefone, cada participante responderá a uma série de perguntas de triagem preliminares para determinar a expulsão imediata do estudo com base nos critérios de exclusão e inclusão. O objetivo do estudo e uma breve visão geral dos procedimentos, compromisso de tempo e remuneração serão discutidos por telefone antes que o indivíduo concorde em participar.

Visita de Estudo E2

1. 7:00: O paciente se apresenta à Unidade de Pesquisa Clínica da Escola de Medicina da Universidade de Washington.

   1. O sujeito será solicitado a pular o café da manhã e se apresentar na Unidade de Pesquisa Clínica após um jejum noturno (> 8 horas) sem tomar nada por via oral, exceto água. Os indivíduos serão solicitados a evitar cafeína e álcool por pelo menos 24 horas antes da admissão para a visita do estudo. No dia anterior à visita do estudo, os participantes receberão instruções para uma refeição padronizada para café da manhã, almoço e jantar contendo um total de 2.165 calorias (46% da energia total de carboidratos, 40% de gordura e 14% de proteína) . Uma fórmula líquida (Ensure; Ross Laboratories, Columbus, OH) contendo 250 kcal (40 g de carboidratos, 6,1 g de gordura e 8,8 g de proteína) para garantir o preenchimento completo dos estoques de glicogênio hepático como um lanche antes de dormir. Este lanche está incluído no total de calorias indicado acima.
   2. O participante terá sua altura e peso medidos por meio de balança eletrônica e estadiômetro dentro da Unidade de Pesquisa Clínica. O IMC será calculado a partir da altura e peso usando a fórmula: [massa(kg)/[altura(metros)2]. A pressão arterial será medida e registrada.
   3. O participante preencherá um questionário de histórico médico, que inclui a obtenção de uma lista de medicamentos atuais. A conclusão do questionário pode ocorrer após a coleta de sangue inicial e a administração da refeição
2. Um cateter será inserido na outra veia antecubital para obter amostras de sangue.
3. 8:00: Estudo de Metabolismo: Período de Linha de Base: Amostras de sangue e respiração de linha de base para determinar o enriquecimento de fundo de isótopos. Em seguida, o indivíduo consumirá uma refeição de teste líquida preparada pela equipe de nutrição da CRU, composta por 27 g de Sol Carb, 1.032 g de Boost Plus, 3,2 g de óleo de canola, 0,2 g de lecitina, 5 mg/kg de [1,2, 3, 7, 8-13C8] trioleato de glicerilo e 40 g de água. Os participantes serão solicitados a consumir a refeição líquida em 20 minutos para consistência, com as laterais do recipiente raspadas para garantir a ingestão máxima. Além disso, 30 minutos após o consumo da refeição, uma infusão em bolus de 75 micromoles/kg de (1,1,2,3,3-2H5)glicerol será iniciada para rastrear o catabolismo de VLDL. Amostras de sangue e respiração serão coletadas em 0, 15, 30, 45, 60, 90, 120, 150, 180, 240, 300 e 360 ​​minutos após a ingestão da refeição. A calorimetria indireta também será administrada usando a técnica de capuz ventilado por 10 minutos antes de cada coleta de amostra de respiração para determinar a taxa metabólica de repouso para cálculos de traçadores e medição da oxidação total de ácidos graxos. Amostras de sangue serão analisadas quanto ao enriquecimento de traçadores e concentração total de ácidos graxos livres, triglicerídeos e colesterol.
4. 14h: O almoço será servido pela CRU, preparado pela cozinha da CRU. Visita de fim de estudo.