Przeciwciała SARS-CoV-2 i neutralizacja wirusa w kohorcie zaszczepionej przeciwko COVID-19 (DER-CoV2-001)

To badanie jest badaniem obserwacyjnym z późniejszym wykorzystaniem zakodowanego materiału biologicznego. Surowice personelu Szpitala Uniwersyteckiego w Zurychu (USZ) zaszczepionego BNT162b2 (BioNTech/Pfizer) analizowano pod kątem przeciwciał specyficznych dla SARS-CoV-2 i neutralizacji wirusa.

Surowicę analizowano pod kątem swoistych dla wirusa IgG i IgA przy użyciu zestawów ELISA firmy Euroimmun (Kriens, Szwajcaria) zgodnie z instrukcją producenta. IgG oznaczano zestawem ilościowym Anti-SARS-CoV-2 Quantivac, a IgA półilościowym zestawem Anti-SARS-CoV-2. Zestawy oznaczają przeciwciała przeciwko białku spike-1. Surowice nie były rozcieńczane ani inaktywowane termicznie przed badaniem. Rozwinięte 96-studzienkowe płytki analizowano przez odczyt absorbancji przy 450 nm przy użyciu czytnika ELISA ELx808 firmy BioTek Instr. Inc.

Ponadto na oddziale opracowano test neutralizacji SARS-CoV-2. W tym teście dawki infekcyjnej hodowli tkankowej (TCID), komórki Vero zakażono żywym SARS-CoV-2 i dodano surowice w różnych rozcieńczeniach, aby przetestować potencjał neutralizacji infekcji wirusowej. Test przeprowadzono w laboratorium o poziomie bezpieczeństwa biologicznego 3. Pokrótce, komórki VERO-E6 hodowano przez noc do ok. 80-90% przylegania w płaskodennych 96-dołkowych płytkach do hodowli komórkowych. Następnie SARS-CoV-2 zmieszano w okrągłodennych 96-dołkowych płytkach do miareczkowania z 2-krotnymi seryjnymi rozcieńczeniami surowicy i inkubowano. Mieszaninę wirus-surowica dodano następnie do komórki VERO-E6 i hodowle ponownie inkubowano. Po trzech dniach hodowle utrwalono przez dodanie paraformaldehydu i wybarwiono fioletem krystalicznym w celu uwidocznienia cytotoksyczności. Najwyższe rozcieńczenie surowicy zapobiegające zakażeniu komórek określono jako miano neutralizacji.