Оценка резервуара ВИЧ в ЦНС, неврологических и нейрокогнитивных эффектов и источника рецидива ВИЧ в ЦНС

1. Клиническое 1.1 Неврологическое обследование: SEARCH использует макроневрологическое обследование на ВИЧ, основанное на Группе клинических исследований СПИДа (ACTG), оценку врачом симптомов когнитивных функций, типичных для ВИЧ-ассоциированного нейрокогнитивного расстройства (HAND) и периферической невропатии.

   1.2 Нейропсихологические оценки: SEARCH использует нейрокогнитивную батарею ВИЧ, первоначально разработанную Maj et al. разработан для минимизации культурных предубеждений и протестирован в Бангкоке. Все субъекты будут иметь полную батарею ПОИСКА, как было опубликовано ранее, избегая оценок после инвазивных процедур. Все тестирование проводится сертифицированными медсестрами-психометристами. Данные сравниваются с нормативным набором из 500 ВИЧ-отрицательных, здоровых, проживающих в общине тайцев и стратифицируются по возрасту и уровню образования для определения стандартизированных z-показателей. Психиатрическая инвентаризация отражает ту, что использовалась для RV254, и имеет широкие данные тайской валидности, а медсестры-исследователи проводят функциональную оценку на основе шкалы клинической деменции.

   1.3 Люмбальная пункция. Люмбальные пункции выполняются в соответствии со стандартными клиническими процедурами с использованием иглы Sprotte® (с заостренным кончиком), чтобы свести к минимуму осложнения. Выполнены стандартные оценки спинномозговой жидкости и сыворотки, количества белков и клеток, собрано и подвергнуто ультрацентрифугированию примерно 20 мл. Клеточные гранулы спинномозговой жидкости будут криоконсервированы для будущих потенциальных исследований с согласия субъекта. Супернатанты делят на аликвоты по 0,5 см3 и замораживают до -80°С в тот же день. CSF VDRL/RPR будет оцениваться на исходном уровне для лиц с положительной серологией в SEARCH 019 и при последующем наблюдении, если сообщается о новой положительной серологии в SEARCH 019 или если субъект был положительным на CSF на исходном уровне. При необходимости будет организована госпитализация участника в связи с любыми связанными с исследованием нежелательными явлениями, требующими госпитализации.

   1.4 Нейровизуализация: Визуализирующие исследования будут проводиться в университетской больнице Чулалонгкорн, которая находится в 100 метрах от TRCARC в Бангкоке. Эти исследования займут до одного часа МРТ-сканирования для каждого субъекта и могут включать МРТ головного мозга, МРС, ДТИ и функциональную МРТ в состоянии покоя (фМРТ). МРТ и МРС являются неинвазивными методами выявления патологии головного мозга (МРТ) и определения концентрации метаболитов головного мозга (MRS) in vivo. DTI является чувствительным неинвазивным магнитно-резонансным методом для анализа трехмерной диффузии воды в тканях головного мозга. Диффузия воды в головном мозге в значительной степени зависит от лежащей в основе микроархитектуры окружающей ткани, на которую влияют как нормальные физиологические процессы (такие как старение), так и локальные невропатологические процессы, такие как наблюдаемые при ВИЧ-инфекции. Функциональная МРТ в состоянии покоя (fMRI) выявляет закономерности активации мозговых сетей и является чувствительным показателем функции мозга до структурных и анатомических изменений, обнаруженных другими методами. Гадолиний не будет использоваться в исследовательских целях.

2. Лаборатория (все, что касается ЦСЖ)

2.1 Измерение растворимых маркеров. Коммерческие наборы ELISA (наборы ELISA для человека Quantikine; R&D Systems, Inc.) и анализы Millipore Luminex будут использоваться в соответствии с инструкциями производителя в Йельской основной лаборатории по мониторингу иммунного статуса. Будут измеряться растворимые биомаркеры, связанные с иммунной активацией и нейрокогнитивными нарушениями, включая неоптерин ЦСЖ, MCP-1, sCD14, IL-6, sCD163 и IP-10.

2.2 Вирусологические анализы спинномозговой жидкости. Стандартный количественный анализ РНК ВИЧ будет выполнен с использованием набора Roche COBAS/Amplicor HIV-1 Viral Load v2.0 с нижним пределом количественного анализа 20 имп/с/мл. Однокопийный анализ (SCA) Количественное определение РНК ВИЧ в условиях АРТ будет проводиться с использованием 5–10 мл спинномозговой жидкости. Кроме того, в CRC-CHUM будет оцениваться ассоциированная с клетками ДНК ВИЧ (общее количество, интегрированные круги и круги 2LTR в общем количестве CD4+ Т-клеток.

2.3 Репертуар TCR и авидность ВИЧ-специфических CD8+ T-клеток в спинномозговой жидкости: они могут быть измерены в подмножестве образцов в VGTI во Флориде. Для анализа репертуара осадки клеток CSF будут поликлонально размножаться, а репертуар TCR будет определяться с последующим секвенированием TCR, как описано ранее. Что касается авидности TCR, клоны Т-клеток, соответствующие доминирующим клонотипам, будут созданы in vitro для измерения их функциональной чувствительности. Клоны ВИЧ-специфических CD8+ Т-клеток, полученные путем размножения в присутствии PHA, IL-2 и облученных фидеров, будут секвенированы на их TCR и будут протестированы на их функциональную чувствительность к TCR.

2.4 Ведение субъектов, возобновляющих АРТ: Если будет принято решение о возобновлении АРТ в соответствии с критериями возобновления АРТ SEARCH 019, то исследовательский визит перед возобновлением АРТ будет считаться последним визитом в этом исследовании, и все процедуры, запланированные на конец исследования, будут проведены в это время. посещать.