Bewertung des HIV-ZNS-Reservoirs, der neurologischen und neurokognitiven Wirkungen und der Quelle des Rebound-HIV im ZNS

1. Klinische 1.1 Neurologische Untersuchung: SEARCH verwendet die von der AIDS Clinical Trials Group (ACTG) abgeleitete HIV-makroneurologische Untersuchung, eine ärztlich bewertete Symptombewertung kognitiver Merkmale, die typisch für HIV-assoziierte neurokognitive Störungen (HAND) und periphere Neuropathie sind.

   1.2 Neuropsychologische Untersuchungen: SEARCH verwendet die ursprünglich von Maj et al. Entwickelt, um kulturelle Vorurteile zu minimieren und in Bangkok getestet. Alle Probanden werden wie zuvor veröffentlicht über die volle SEARCH-Batterie verfügen, wodurch Bewertungen nach invasiven Verfahren vermieden werden. Alle Tests werden von zertifizierten Pflegepsychometristen durchgeführt. Die Daten werden mit einem normativen Satz von 500 HIV-negativen, gesunden, in Gemeinschaft lebenden Thailändern verglichen und nach Alter und Bildungsstand stratifiziert, um standardisierte Z-Scores zu definieren. Ein psychiatrisches Inventar spiegelt das für RV254 verwendete wider und verfügt über breite thailändische Validitätsdaten, und Forschungskrankenschwestern führen eine funktionelle Bewertung auf der Grundlage der Clinical Dementia Scale durch.

   1.3 Lumbalpunktion: Lumbalpunktionen werden nach klinischen Standardverfahren unter Verwendung einer Sprotte®-Nadel (Bleistiftspitze) durchgeführt, um Komplikationen zu minimieren. Standardbewertungen von CSF und Serum, Protein und Zellzahl werden abgeschlossen und etwa 20 cc werden gesammelt und ultrazentrifugiert. Zellpellets von CSF werden mit Zustimmung des Probanden für zukünftige potenzielle Studien kryokonserviert. Die Überstände werden in 0,5-ml-Aliquots aufgeteilt und am selben Tag auf -80 °C eingefroren. CSF VDRL/RPR wird zu Studienbeginn für diejenigen mit positiver Serologie in SEARCH 019 und im Follow-up bewertet, wenn eine neue positive Serologie in SEARCH 019 gemeldet wird oder wenn der Proband zu Studienbeginn CSF-positiv war. Bei Bedarf wird ein Krankenhausaufenthalt des Teilnehmers wegen forschungsbezogener unerwünschter Ereignisse, die eine Aufnahme erfordern, arrangiert.

   1.4 Neurobildgebung: Bildgebungsstudien werden am Chulalongkorn University Hospital durchgeführt, das 100 Meter vom TRCARC in Bangkok entfernt ist. Diese Studien dauern maximal eine Stunde MRT-Scan-Zeit für jeden Probanden und können Gehirn-MRT, MRS, DTI und funktionelle MRT im Ruhezustand (fMRI) umfassen. MRT und MRS sind nicht-invasive Methoden zur Erkennung von Hirnpathologien (MRT) und zur Bestimmung der In-vivo-Konzentration von Gehirnmetaboliten (MRS). DTI ist eine empfindliche nicht-invasive Magnetresonanztechnik zur Analyse der dreidimensionalen Diffusion von Wasser im Gehirngewebe. Die Diffusion von Wasser im Gehirn hängt stark von der zugrunde liegenden Mikroarchitektur des umgebenden Gewebes ab, das sowohl von normalen physiologischen Prozessen (z. B. Alterung) als auch von lokalen neuropathologischen Krankheitsprozessen, wie z. B. bei einer HIV-Infektion, beeinflusst wird. Die funktionelle MRT im Ruhezustand (fMRI) zeigt Muster der Aktivierung von Gehirnnetzwerken und ist ein empfindliches Maß für die Gehirnfunktion, bevor strukturelle und anatomische Veränderungen durch andere Methoden erkannt werden. Gadolinium wird nicht für Forschungszwecke verwendet.

2. Labor (alles in Bezug auf Liquor)

2.1 Messung löslicher Marker: Kommerzielle ELISA-Kits (Human Quantikine ELISA-Kits; R&D Systems, Inc.) und Millipore Luminex-Assays werden gemäß den Anweisungen des Herstellers im Yale Immune Monitoring Core Laboratory verwendet. Lösliche Biomarker, die mit Immunaktivierung und neurokognitiver Beeinträchtigung assoziiert sind, werden gemessen, einschließlich CSF-Neopterin, MCP-1, sCD14, IL-6, sCD163 und IP-10.

2.2 CSF-Virologie-Assays: Die HIV-RNA-Standardquantifizierung wird mit dem Roche COBAS/Amplicor HIV-1 Virus Load v2.0-Assay mit einer unteren Quantifizierungsgrenze von 20 cps/ml durchgeführt. Single Copy Assay (SCA) HIV-RNA-Quantifizierung im Rahmen von ART wird unter Verwendung von 5-10 ml CSF durchgeführt. Darüber hinaus wird am CRC-CHUM zellassoziierte HIV-DNA (Gesamt-, integrierte und 2LTR-Kreise in Gesamt-CD4+-T-Zellen) bewertet.

2.3 TCR-Repertoire und Avidität von HIV-spezifischen CD8+ T-Zellen im Liquor: Diese können in einer Untergruppe von Proben am VGTI Florida gemessen werden. Für den Repertoire-Assay werden CSF-Zellpellets polyklonal expandiert, und das TCR-Repertoire wird bestimmt, gefolgt von einer TCR-Sequenzierung, wie zuvor beschrieben. Für die TCR-Avidität werden T-Zellklone, die den dominanten Klonotypen entsprechen, in vitro erzeugt, um ihre funktionelle Empfindlichkeit zu messen. Die HIV-spezifischen CD8+ T-Zellklone, die durch Expansion in Gegenwart von PHA, IL-2 und bestrahlten Feedern erzeugt werden, werden auf ihren TCR sequenziert und auf ihre funktionelle TCR-Sensitivität getestet.

2.4 Management von Probanden, die die ART wieder aufnehmen: Wenn die Entscheidung getroffen wird, die ART gemäß SEARCH 019 ART-Wiederaufnahmekriterien wieder aufzunehmen, wird der Studienbesuch vor der Wiederaufnahme der ART als letzter Besuch dieser Studie betrachtet und alle für das Studienende geplanten Verfahren werden bei diesem durchgeführt besuchen.