Avaliação do reservatório do HIV no SNC, efeitos neurológicos e neurocognitivos e fonte de rebote do HIV no SNC

1. 1.1 Exame neurológico clínico: A SEARCH emprega o exame macroneurológico do HIV derivado do Grupo de Ensaios Clínicos da AIDS (ACTG), uma avaliação de sintomas avaliados por médicos de características cognitivas típicas de transtorno neurocognitivo associado ao HIV (HAND) e neuropatia periférica.

   1.2 Avaliações neuropsicológicas: SEARCH emprega a bateria neurocognitiva do HIV originalmente desenvolvida por Maj et al. projetado para minimizar o viés cultural e testado em Bangkok. Todos os sujeitos terão a bateria SEARCH completa conforme publicado anteriormente, evitando avaliações após procedimentos invasivos. Todos os testes são realizados por enfermeiros psicometristas certificados. Os dados são comparados com um conjunto normativo de 500 tailandeses HIV-negativos, saudáveis, residentes na comunidade e estratificados por idade e escolaridade para definir escores-z padronizados. Um inventário psiquiátrico espelha o usado para RV254 e tem ampla validade tailandesa, e os enfermeiros da pesquisa realizam uma avaliação funcional com base na Escala Clínica de Demência.

   1.3 Punção lombar: As punções lombares são realizadas de acordo com os procedimentos clínicos padrão usando uma agulha Sprotte® (ponta de lápis) para minimizar as complicações. As avaliações padrão de CSF e soro, proteína e contagem de células são concluídas e aproximadamente 20 cc são coletados e ultracentrifugados. Pelotas celulares de CSF serão criopreservadas para futuros estudos potenciais, com o consentimento do sujeito. Os sobrenadantes são divididos em alíquotas de 0,5 cc e congelados a -80oC no mesmo dia. O CSF VDRL/RPR será avaliado no início do estudo para aqueles com sorologia positiva na SEARCH 019 e no acompanhamento se uma nova sorologia positiva for relatada na SEARCH 019 ou se o indivíduo for positivo no CSF ​​no início do estudo. A hospitalização do participante por quaisquer eventos adversos relacionados à pesquisa que requeiram admissão será providenciada, se necessário.

   1.4 Neuroimagem: Os estudos de imagem serão realizados no Chulalongkorn University Hospital, que fica a 100 metros do TRCARC em Bangkok. Esses estudos levarão até uma hora de tempo máximo do scanner de ressonância magnética para cada indivíduo e podem incluir ressonância magnética cerebral, ressonância magnética, DTI e ressonância magnética funcional em estado de repouso (fMRI). MRI e MRS são métodos não invasivos para detectar patologia cerebral (MRI) e para determinar a concentração in vivo de metabólitos cerebrais (MRS). DTI é uma técnica de ressonância magnética não invasiva sensível para analisar a difusão tridimensional de água no tecido cerebral. A difusão da água dentro do cérebro é altamente dependente da microarquitetura subjacente do tecido circundante, que é afetada tanto por processos fisiológicos normais (como o envelhecimento) quanto por processos de doenças neuropatológicas locais, como os observados na infecção pelo HIV. A ressonância magnética funcional em estado de repouso (fMRI) revela padrões de ativação de redes cerebrais e é uma medida sensível da função cerebral antes de alterações estruturais e anatômicas detectadas por outros métodos. O gadolínio não será usado para fins de pesquisa.

2. Laboratório (todos pertencentes ao LCR)

2.1 Medição de marcadores solúveis: Os kits ELISA comerciais (kits Human Quantikine ELISA; R&D Systems, Inc.) e ensaios Millipore Luminex serão usados ​​seguindo as instruções do fabricante no Yale Immune Monitoring Core Laboratory. Biomarcadores solúveis associados à ativação imune e comprometimento neurocognitivo serão medidos, incluindo neopterina no LCR, MCP-1, sCD14, IL-6, sCD163 e IP-10.

2.2 Ensaios de virologia do LCR: A quantificação padrão do RNA do HIV será concluída usando o ensaio Roche COBAS/Amplicor HIV-1 Viral Load v2.0, com um limite inferior de quantificação de 20 cps/mL. A quantificação do RNA do HIV por Ensaio de Cópia Única (SCA) no cenário de ART será realizada usando 5-10 ml de CSF. Além disso, o HIV-DNA associado à célula (círculos totais, integrados e 2LTR em células T CD4+ totais será avaliado no CRC-CHUM.

2.3 Repertório de TCR e avidez de células T CD8+ específicas para HIV no LCR: Estes podem ser medidos em um subconjunto de amostras no VGTI Florida. Para o ensaio de repertório, pellets de células de CSF serão expandidos policlonalmente, e o repertório de TCR será determinado seguido de sequenciamento de TCR conforme descrito anteriormente. Para a avidez de TCR, clones de células T correspondentes aos clonótipos dominantes serão gerados in vitro para medir sua sensibilidade funcional. Os clones de células T CD8+ específicas para HIV gerados por expansão na presença de PHA, IL-2 e alimentadores irradiados serão sequenciados quanto ao TCR e testados quanto à sensibilidade funcional do TCR.

2.4 Gerenciamento de participantes que retomam a ART: Se for tomada a decisão de reiniciar a ART de acordo com os critérios de retomada da ART da SEARCH 019, a visita do estudo antes da retomada da ART será considerada a visita final deste estudo e todos os procedimentos agendados para o final do estudo serão conduzidos nessa Visita.