Autologa alveolära benmärgsmesenkymala stamceller för rekonstruktion av infrabensperiodontala defekter (PerioRegen)

Syfte och mål Den föreliggande studien beskriver en ny metod för att regenerera parodontala vävnader i parodontala infrabensdefekter med hjälp av autologa BM-MSCs, fria från animaliska reagenser, producerade i renrumsanläggningar berikade med autologt fibrinlim och sådd i kommersiellt tillgängliga kollagenställningar (kollagenfleece) ).

Primärt mål Denna studie syftar till att bedöma effektiviteten av en ny regenerativ behandling av periodontala infrabensdefekter med hjälp av ett biokomplex av BM-MSCs/fibrinlim/kollagenfleece, jämfört med ett cellfritt ympersättningsmedel av fibrinlim/kollagenfleece och en kontrollbehandlingsmetod för debridering med öppen flik utan tilläggsanvändning av ympmaterial.

Sekundära mål

• För att dokumentera stabiliteten i det förbättrade behandlingsresultatet och att fortsätta att utvärdera säkerheten och effektiviteten av BM-MSCs transplantation jämfört med kontrollbehandlingen av debridement med öppen flik under studieperioden.
• Bestäm de immunologiska och mikrobiologiska profilerna för deltagarna under hela studieperioden i ett försök att förstå lokala och systemiska effekter av transplantation av BM-MSCs på kroniskt sjuka platser, såsom infrabony periodontal defekt. Dessutom kommer läkningssvaret på behandlingen att bestämmas under hela observationsperioden (baslinje till 12 månader).

Studera design

Undersökningsprodukter aBM-MSCs kulturer kommer att etableras från benbiopsier härledda från benmärg i alveolarbenet hos varje patient som tillhör grupp A. Kortfattat, efter en noggrann oral sköljning med klorhexidin 0,12 % under 1 min, kommer en osteotomi med en trefinborr att utföras utförs i alveolbenet och en 2x8 mm benkärna kommer att skördas. Området kommer att sköljas med koksaltlösning och sedan sys flikar för att uppnå primär stängning vid donatorstället. Benprovet kommer sedan omedelbart att placeras i sterila rör som innehåller HBSS och antibiotika/antimykotika och kommer att transporteras till en godkänd anläggning som uppfyller god laboratoriepraxis (GLP) som uppfyller kvalitetsriktlinjerna som fastställts av Europeiska unionen för beredning av stam av klinisk kvalitet. cellkulturer för leverans till patienten. aBM-MSC-isolering kommer att utföras med den enzymatiska dissociationsmetoden, som tidigare beskrivits (Bakopoulou 2013). För odlingsexpansion kommer autologt serum erhållet från 60 ml venöst blod som samlats in från varje individ att användas för att komplettera aMEM-cellodlingsmedium, för att undvika användningen av reagens från djur, såsom bovint serum. Den benbiopsi kommer att behandlas omedelbart för att säkerställa hög livsduglighet för de etablerade kulturerna. Efter expansion under två passager (ungefärlig tid som behövs 16-24 dagar beroende på celldonator) kommer celler att skördas för leverans till patienten. För celldissociation och -passage kommer högrenade, GMP-kompatibla rekombinanta enzymer (Tryple, Thermo Fisher Scientific) att användas för att undvika användning av svintrypsin. I detta skede kommer ett prov på 20 ml venöst blod att krävas för beredningen av det autologa fibrinlimmet i grupp B, eftersom i grupp A initial blodsläppning (60 ml) kommer att täcka behoven för cellkulturerna och fibrinlimberedning. Därefter kommer fibrinlim att laddas med (Grupp A) eller utan (Grupp B) stamceller i en kommersiellt tillgänglig kollagenfleeceställning direkt före klinisk applicering.

Kvalitetskontroll av de etablerade BM-MSC-kulturerna före klinisk applikation

Innan leverans till patienten kommer alla BM-MSCs kulturer att utvärderas för:

• Viabilitet med uteslutning av Trypan Blue
• Sterilitet: kulturer kommer att testas för potentiell kontaminering från bakterier, mykoplasma och endotoxiner (LAL-test)
• "Stemness"-egenskaper baserade på de minimala kriterier som fastställts av International Society for Cellular Therapy (ISCT) avseende MSC (Dominici et al 2006).

Obs: Metodik för stamcellskarakteriseringsmetoder beskrivs analytiskt i tidigare publikationer av vår forskargrupp (Bakopoulou et al. 2013).

Efter applicering av BM-MSCs/fibrinlim/CaCl2-blandningen i kollagenställningarna kommer ett litet prov av biokomplexet av slumpmässigt utvalda fall att separeras med kirurgiska saxar och överföras till labbet för vidare (parallellt med den kliniska applikationen) ) ex vivo karakterisering av stamcellsbeteende i en biomimetisk mikromiljö. Detta kommer att möjliggöra korrelation mellan stamcellsbeteende och det kliniska resultatet, eftersom hämtning och analys av de regenererade vävnaderna direkt från värden inte är genomförbart av etiska skäl.

Beredning av autologt fibrinlim Tjugo ml venöst blod kommer att samlas upp från ante-cubital fossa hos patienter i grupp A och B och blodprover kommer omedelbart att överföras till ett falkrör, som innehåller antikoagulant. Efter bestämning av trombocytantalet kommer blodprovet att centrifugeras (2000rpm, 10min) och plasma kommer att separeras och lagras i en annan falk. Antalet blodplättar kommer sedan att bestämmas och provet kommer att centrifugeras igen. PRP (trombocytrik plasma innehållande 1 000 000 plts/ul) kommer sedan att separeras från supernatanten PPP (trombocytfattig plasma) och båda preparaten kommer att bearbetas vidare enligt ett standardprotokoll för fibrinlimberedning (Biohellenika, Thessaloniki, Grekland).

Design av den kliniska delen av studien

Förval av ämnen Ämnen kommer att rekryteras från nya remisser vid institutionen för förebyggande tandvård, parodontologi och implantatbiologi; ingen extern annonsering eller rekrytering kommer att göras. Ämnen kommer att ha god allmän hälsa.

Antagning till studien Före antagning till studien kommer varje försöksperson att informeras av huvudutredaren om studiens art och risker både muntligt och skriftligt (Subject Information Form) och skriftligt informerat samtycke (Subject Informed Consent Signature Form) kommer att ges erhållits. Varje försöksperson kommer att få en kopia av sitt vederbörligen undertecknade samtyckesformulär att behålla för sina egna register. Försökspersonernas personliga demografi och sjukdomshistoria samt studielämplighet i enlighet med inklusions- och uteslutningskriterierna i protokollet kommer att registreras. Försökspersoner kan fortsätta med mediciner som inte ingår i uteslutningskriterierna; dessa mediciner bör dock dokumenteras tillsammans med eventuella samtidiga medicinska tillstånd som inte är uteslutna på förhand.

Rutiner för att avbryta eller avbryta studien Varje försöksperson som önskar dra sig ur studien av personlig eller annan anledning har rätt att göra det. Anledningen till att någon försöksperson dras ur studien, utöver om orsaken är relaterad till testprodukten, kommer dock att registreras av huvudutredaren. Varje deltagare som inte deltar mer än två gånger tas bort från studien. Försökspersoner som upplever en negativ händelse kommer att uteslutas från ytterligare deltagande i studien.

Om en försöksperson vill dra sig ur studien kommer alla ansträngningar att göras för att slutföra och rapportera observationerna så noggrant som möjligt fram till datumet för tillbakadragandet. Försökspersoner kommer att bli ombedda att överväga att ge ytterligare information om orsaken/orsakerna till tillbakadragandet. All information som rapporteras kommer att registreras.

Förväntad varaktighet för varje ämnesdeltagande Varje ämne förväntas delta i nio besök totalt under en period av 12 månader; ett screeningbesök, ett behandlingsbesök för att få kirurgisk behandling av det utpekade området, fyra uppföljningsgenomgångar och tre ytterligare besök för klinisk och radiografisk omvärdering och provtagning (hel saliv, tandköttskrevikelvätska (GCF), subgingival plack).

Utredarnas kalibrering och randomisering Patienter kommer att screenas för behörighet av en undersökare och kommer att registreras en i taget på kontinuerlig basis efter att ha erhållit ett kodnummer. En bidragsgivare som inte deltar i datainsamlingen kommer att utföra randomiseringen och meddela behandlingssättet för terapeuten med hjälp av telefonkommunikation. Kliniska bedömningar kommer att utföras av en enda granskare som inte kommer att ha tillgång till tidigare inspelningar och inte i övrigt är involverad i andra kliniska procedurer. En utredares kalibreringsövning kommer att utföras för att erhålla acceptabel reproducerbarhet inom examinator för PPD, CAL och utvärdering av defektanatomi. Intra-examinator reproducerbarhet kommer att utvärderas av Intraclass Correlation Coefficient (ICC) och Bland-Altman 95% gränser för överensstämmelse (Bland och Altman, 1999).

Statistisk analys av experimentella data Analysen kommer att utföras med programvaran IBM Statistics SPSS 20.0. Data kommer att uttryckas som medel +/- standardavvikelse (SD). Obalanser mellan test- och kontrollgrupperna som genereras av randomiseringsprocedurerna kommer att bedömas med hjälp av det oberoende urvalets t-test för kontinuerliga variabler och Fishers Exact-testet eller Chi-Square-testet för kategoriska variabler. Betydelsen av behandlingseffekterna på de beroende variablerna CAL-förändringar, PPD-förändringar och radiografiska förändringar kommer att uppskattas genom att konstruera linjära blandade modeller med SPSS MIXED-proceduren. För alla analyser kommer den statistiska signifikansen att sättas till p<0,05.

Etiska överväganden / auktorisationer för stamcellskulturer Biohellenika, Thessaloniki, Grekland tillhandahåller toppmoderna faciliteter och laboratorier som arbetar enligt de strängaste reglerna för behandling och lagring av stamceller. Labben är licensierade enligt regeringens order 2008-03-26 (reglering av grekisk lag enligt europeisk lag 2004/23/K av och rådet 31-3-2004 för upprättande av prototyper för kvalitet och säkerhet för donationen, köp, kvalitetskontrollerar kryokonservering, lagring och distribution av mänskliga vävnader och celler (EEL 102/7-4-2004) och de relaterade riktlinjerna 2006/17 EK (EEL 38/9/2006) och 2006/86EK (EEL 294) /2006-10-25). Licensen F 6172/17514/1269 publiceras i Gov. paper 2589 31/12/2009.

Sedan november 2014 verkar Biohellenika under den nya lagen 3984, publicerad i Gov paper nr 150, 2011 efter en positiv rekommendation från National Transplant Committee till Department of Health och just nu är den nya licensen på väg att publiceras i Gov paper.

Labben och procedurerna är ackrediterade av American Association of Blood Banks (AABB), senaste inspektionen 30 september 2014 och av National System of Accreditation enligt ISO 15189:2007. Labben är även certifierade enligt ISO 9001:2008, för bearbetning, kvalitetskontroll och kryokonservering av autologa cellinjer och ISO 13485:2003 för kryokonserveringssystemet som också är ett internationellt patent av Biohellenika.

Renrum fungerar enligt riktlinjerna från BSR Ingenieur-Buro med ISO 14644-5. Säkerhetsnivåerna uppfyller alla standarder ISO 27001 och företaget är licensierat och reglerat av Dataskyddsmyndigheten.

Labben undersöks 24 timmar om luftkvalitet och är utrustade med Cryo-View databassystem, ISBT 128 streckkodssystem, temperatur-vätskenivå N2, säkerhetslarm och två kraftgeneratorer.

Studieschema Klinisk design och interventioner för autolog transplantation av BM-MSC:er Försökspersoner med svår kronisk parodontit kommer att få icke-kirurgisk parodontitbehandling under lokalbedövning med hjälp av hand- och kraftdrivna instrument, förutom motivation i parodontalvård och noggranna munhygieninstruktioner . Försökspersoner kommer att bedömas kliniskt sex veckor efter avslutad icke-kirurgisk behandling och de patienter med kvarvarande parodontala fickor (PPD & CAL ≥ 6 mm; infrabenskomponent ≥ 3 mm) och inga tydliga tecken på gingival inflammation kommer att screenas för lämplighet att delta i aktuella studien. Screeningbesöket kommer att omfatta en första parodontalundersökning i munnen, intraoral röntgenundersökning och uppfyllande av inklusions-/exklusionskriterier. I fall av lämplighet kommer studiens karaktär att förklaras i detalj för alla ämnen och ett undertecknat samtyckesformulär som godkänts av Tandläkarskolans etiska kommitté, AUTh. kommer att erhållas från varje deltagare. Därefter kommer patienter att slumpmässigt fördelas i en av de tre behandlingsgrupperna (-A, -B och -C). En enda defekt kommer att behandlas hos varje patient.

Därefter kommer en benbiopsi och blodprov att samlas in från deltagarna i grupp A under strikt sterila förhållanden. Varje prov kommer sedan omedelbart att placeras i sterila rör och kommer att transporteras till Biohellenika, Thessaloniki, Grekland (http://www.biohellenika.gr) för stamcellsisolering och expansion enligt ett strikt protokoll (Bakopoulou et al. 2013, Bakopoulou et al. under förberedelse). Eftersom MSC:er kommer att isoleras och expanderas in vitro i GLP-klassade renrum som uppfyller kvalitetsriktlinjerna som fastställts av Europeiska Unionen och inga animaliska reagenser kommer att användas under experimenten för autolog transplantation, anses cellerna vara säkra för humana kliniska cellterapiapplikationer . I Biohellenika-anläggningar kommer 60 ml venöst blod att samlas in från varje individ i grupp A kort efter biopsiskörden, så att autologt serum används för isolering och odlingsexpansion av de autologa stamcellerna. Dessutom kommer autologt fibrinlim att användas för att ladda BM-MSCs på kollagenfleece. Dessutom kommer ett blodprov på 20 ml att tas från försökspersoner i grupp B, för att tillhandahålla fibrinlim som kommer att berika kollagenfleece innan kirurgisk placering i bendefekten. Slutligen kommer försökspersoner i grupp C inte att kallas för blodåtergivning eftersom infrabensdefekterna hos dessa individer kommer att hanteras kirurgiskt genom debridering med öppen flik utan tilläggsanvändning av ympmaterial.

Som en del av GLP-kvalitetskontrollen kommer MSC:erna att analyseras för sterilitet och endotoxiner och kommer även att testas för potentiell kontaminering från bakterier (BD BACTEC™), mykoplasma och endotoxiner (LAL-test).

Lokalbedövning (1,8 ml 2 % lidokain med 1:80 000 adrenalin; Lignospan special, Septodont) kommer att infiltreras i de buckala och linguala aspekterna av de inblandade tänderna för att undvika papillerna. Sedan kommer strikt intrasulkulära snitt att utföras för att bevara tandköttsvävnaderna och i synnerhet den interdentala papillen som är förknippad med ben-dentaldefekten (Cortellini, 2012; Cortellini och Tonetti 2007). Defekten kommer att debrideras och roten kommer att hyvlas noggrant med kombinerad användning av Gracey-kyretter och motordrivna instrument (EMS Piezon®, EMS, Nyon, Schweiz). Försiktighet kommer att vidtas för att behålla defekternas mjukdelsvägg och bendefekten kommer att spolas med koksaltlösning för att kontrollera blödningen.

I grupp A kommer ympmaterialet (BM-MSC berikade med fibrinlim) att levereras i två insulinsprutor som vardera innehåller 5x10E6-celler/100μl fibrin och kommer att laddas försiktigt på kollagenfleece och polymeriseras med tillsats av CaCl2. Därefter packas biokomplexet försiktigt in i defekten tills den är fullständig. Hantering av ställningen görs med försiktighet för att undvika förstörelse av livskraftiga celler.

I grupp B kommer kollagenfleece berikat med fibrinlim utan livskraftiga celler att fylla den vertikala bendefekten med försiktighet. I grupp -A och -B kommer tillförseln av fibrinlim med/utan livskraftiga celler att vara identisk, så att terapeuten blir blind för procedurerna.

Grupp C, patienter kommer att få debridering med öppen flik och rothyvling av rotytan på liknande sätt som försökspersoner i grupperna -A och -B, men det kommer inte att finnas någon tilläggsanvändning av ympmaterial.

Operatören kommer att bli blind för behandlingsmodaliteten (Grupp -A och -B), medan i Grupp C, eftersom inget transplantatmaterial kommer att användas, kommer behandlingsmodaliteten att bli uppenbar för operatören men detta kommer att ske mot slutet av operationen , efter insamling av kliniska data. Papillakonserveringstekniker och minimalt invasiva kirurgiska tekniker kommer att eftersträvas i alla grupper, för att undvika att bukhinnan poängsätts. Flikarna kommer att omplaceras och sys med en enda modifierad invändig madrasssutur (5-0 Monosyn, Braun) vid det defektassocierade interdentalområdet och liknande suturer kommer att användas för att stänga flikarna i alla andra interdentala områden. Två veckor efter operationen kommer klinisk observation för ohändig läkning eller förekomst av negativ vävnadsreaktion att utföras följt av suturborttagning.

Fallserier för vävnadsteknik I en serie av fall (fem) som har liknande inkludering/kriterier som ovan men utan att gå igenom randomisering tillämpas vävnadsteknik enligt samma metodik som i grupp A. I dessa fall är den vävnadsmanipulerade konstruktionen (biokomplex) tillämpas för att behandla isolerade interdentala parodontala defekter med hjälp av en nydesignad kirurgisk teknik, den så kallade "slutna kirurgiska tekniken". I korthet innebär denna teknik indragning av tandköttsflikar på ett stängt sätt utan att dissekera mjukvävnaderna eller interdentalpapillen. Denna teknik minimerar vävnadstrauma, postoperativa obehag och förbättrar mjukvävnadsestetik.

Postoperativ vård Postoperativ smärta kommer att kontrolleras med Ibuprofen (600 mg) i slutet av det kirurgiska ingreppet och 12 timmar senare vid smärta. Amoxicillin (500 mg / 8 timmar i fem dagar) kommer att ordineras till alla deltagare. Alla patienter kommer att instrueras att använda 0,12 % klorhexidin två gånger dagligen och undvika att borsta, använda tandtråd och tugga hårt i det behandlade området under fyra veckor. Under denna 4-veckorsperiod kommer strikt postoperativt stödprogram att inledas med varannan veckas intervall, och efter det kommer patienterna att sluta skölja med klorhexidinlösning och återuppta munhygienen. Interdental rengöring kommer att påbörjas sex veckor efter operationen för alla grupper. Därefter kommer försökspersoner att ses vid tre, sex och 12 månader för parodontal stödjande vård.

Kliniska inspelningar Full-mun och platsspecifika parodontala inspelningar inklusive BOP; Plackindex (närvaro/frånvaro av plack); PPD och CAL kommer att bestämmas med hjälp av en manuell periodontal sond (Hu-Friedy XP-23/QW) till närmaste millimeter vid sex ställen per tand och parallellt med den långa axeln vid fyra tidpunkter; baslinje, 6-, 9-, 12-månader. Kliniska mätningar på de angivna platserna (infrabensdefekter) kommer att bestämmas före operation och före anestesi (baslinje). Intrakirurgiska bedömningar kommer att utföras en gång under operationen.

Intrakirurgiska kliniska bedömningar Defektens morfologi (en-, två-, treväggar eller kombination) kommer att bestämmas intrakirurgiskt av antalet benväggar associerade med lesionen; Avståndet mellan cemento-emaljövergången och botten av defekten (CEJ-BD) kommer att bestämmas i mm; Avståndet från CEJ till den mest koronala interproximala nivån av benkammen (CEJ-BC) kommer att bestämmas i mm; Det totala defektdjupet: avståndet mellan benkammen och botten av defekten (BC-BD) kommer att bestämmas i mm; Bredden på defektens bredd (horisontellt avstånd mellan benkammen och rotytan) kommer att bestämmas i mm.

Om CEJ inte kan detekteras på grund av en cervikal restaurering kommer restaureringsmarginalen (RM) att fungera som referenspunkt för kliniska och radiografiska mätningar.

Radiografisk utvärdering Intraoral digital radiografi kommer att användas för att bestämma benregenereringen av infrabensdefekterna vid sex tidpunkter; baslinje, 6 veckor, 3-, 6-, 9-, 12-månader. Standardiserade periapikala digitala röntgenbilder (RadioVisioGraphy; Trophy Radiology S.A., Paris, Frankrike) kommer att erhållas med hjälp av den långa konens parallelliseringsteknik. För att standardisera exponeringsgeometrin kommer ett anpassat bitblock av ett elastiskt avtrycksmaterial att justeras på sensorhållaren, förvaras i förseglade plastbehållare vid rumstemperatur och kommer att återanvändas under varje återkallande röntgenbesök.

På ett liknande sätt som den intrakirurgiska bedömningen kommer följande anatomiska landmärken att definieras på röntgenstrålningen: cementoemaljövergången (CEJ), den mest koronala nivån av det alveolära benet (BC) och den apikala omfattningen av benförlust ( BD). Mer detaljerat kommer platsen för CEJ att identifieras; det mest koronala området där det parodontala ligamentet bibehåller en jämn bredd kommer att identifieras på röntgenbilden för att indikera den mest apikala förlängningen av benförlust. Infrabensdefekten kommer att beräknas genom att mäta defektens bredd vid den mest koronala aspekten och vid basen; avståndet mellan CEJ-BD och BC-BD; avståndet mellan CEJ-BC; vinkeln mellan rotens vertikala axel och den interdentala benväggen (Tonetti et al. 1993). Röntgenutvärdering av benregenerering kommer att definieras på en högupplöst monitor av samma kalibrerade granskare som är blind för behandlingsmodaliteten och inte har tillgång till tidigare inspelningar. Bedömningar kommer att utföras med hjälp av mätverktyget för numeriska mätningar (VixWin™ Platinum|Gendex programvara) med hänvisning till en metallstång av standardlängd (5 mm) som kommer att fästas på sensorn.

Samling av prover Prover kommer att samlas in i följande ordning vid sex tidpunkter; baslinje, 6 veckor, 3-, 6-, 9-, 12-månader.

(i) Saliv Saliv kommer att samlas in före kliniska parodontala mätningar eller någon periodontal intervention och vanligtvis på morgonen efter en nattfasta under vilken försökspersonerna uppmanas att inte dricka (förutom vatten) eller tugga tuggummi. Hela salivprover kommer att erhållas genom upphostning i 30 ml polypropenrör i 5 minuter.

(ii) GCF Gingivala crevikulära vätskeprov kommer att erhållas från de buckala interdentala aspekterna av defekterna. Innan GCF-insamling kommer ytorna att lufttorkas försiktigt och isoleras från saliv genom att placera bomullsrullar och använda en salivejektor. Sedan kommer supragingival plack att tas bort försiktigt med sterila kyretter och pappersremsor (Periopaper, OraFlow Inc., Smithtown, NY, USA) kommer att placeras i parodontalt ficka tills lätt motstånd känns i 30s. Försiktighet kommer att vidtas för att undvika mekaniskt trauma när du placerar remsorna och de remsor som är kontaminerade med blod kommer att kasseras. Varje remsa per patient kommer att förvaras i ett separat 1,5 ml mikrocentrifugrör och förvaras vid -70°C. Före användning kommer proteinerna på remsorna att elueras i 500 µl fosfatbuffrad saltlösning (PBS) kompletterad med BSA (1 % v/v).

(iii) Plack Efter GCF-insamling kommer subgingival plack att samlas in från den angivna platsen. Provtagningsområdet kommer att isoleras från saliv, torkas försiktigt med luft, och efter att ha säkerställt att inga supragingivala plackavlagringar finns kommer två papperspunkter att placeras i 30s i parodontalfickan och ett samlat prov kommer att samlas in. Alla prover kommer att lagras i Eppendorf-rör (Eppendorf, Hamburg, Tyskland) vid -80°C före bearbetning. Papperspunkter kommer att användas för insamling av mikrobiell plack för att undvika mekaniska störningar av parodontala vävnader.

Datahantering Utredarna ska se till att försökspersonens anonymitet upprätthålls. På all studierelaterad dokumentation bör försökspersoner endast kunna identifieras med sina initialer, kön och/eller ämnesnummer. Personlig information (dvs. medicinska kort) kommer att förvaras på en separat, säker plats, borta från andra studiespecifika data med begränsad tillgång till enbart huvudutredaren.

Processen för informerat samtycke Det är huvudutredarens ansvar att inhämta skriftligt samtycke från försökspersonen. Det informerade samtyckesformuläret kommer att bestå av två separata dokument; ett ämnesinformationsformulär och ett ämnesunderskriftsformulär för informerat samtycke; båda dokumenten kommer att godkännas av tandläkarskolans etiska kommitté, AUTh före studien. Ämnesinformationsformuläret kommer att ge en adekvat förklaring, på inhemskt icke-tekniskt språk som är förståeligt för ämnet, av studiens syften, mål, metoder, förväntade fördelar och potentiella faror. Huvudutredaren måste sedan ge försökspersonen gott om tid att läsa och förstå formuläret för informerat samtycke och att överväga att delta i den kliniska undersökningen. Utredaren och försökspersonen måste både underteckna och datera blanketten innan försökspersonen kan delta i den kliniska undersökningen. Varje ämne kommer sedan att få en kopia av sitt vederbörligen undertecknade och daterade formulär för informerat samtycke och all annan skriftlig information.