Autologiset alveolaariset luuytimen mesenkymaaliset kantasolut infrabonisten parodontaalivaurioiden rekonstruktioon (PerioRegen)

Tavoitteet ja tavoitteet Tässä tutkimuksessa kuvataan uusi menetelmä parodontaalikudosten regeneroimiseksi parodontaalisen infraluun vaurioissa käyttämällä autologisia BM-MSC:itä, jotka eivät sisällä eläinperäisiä reagensseja ja jotka on valmistettu puhdastiloissa, jotka on rikastettu autologisella fibriiniliimalla ja kylvetty kaupallisesti saatavilla oleviin kollageenirakenteisiin (kollageenifleesiin). ).

Ensisijainen tavoite Tämän tutkimuksen tavoitteena on arvioida parodontaalisen infraluun vaurioiden uuden regeneratiivisen hoidon tehokkuutta käyttämällä BM-MSC:n/fibriiniliiman/kollageenifleecen biokompleksia verrattuna soluttomaan fibriiniliiman/kollageenifleecen siirteenkorvikkeeseen ja kontrollihoitomenetelmä avoimen läppäpoiston yhteydessä ilman oksastusmateriaalien käyttöä.

Toissijaiset tavoitteet

• Dokumentoida tehostetun hoitotuloksen stabiilius ja jatkaa BM-MSC-siirron turvallisuuden ja tehokkuuden arviointia verrattuna avoimen läpän debridementin kontrollihoitoon tutkimusjakson aikana.
• Selvitä osallistujien immunologiset ja mikrobiologiset profiilit koko tutkimusjakson ajan yrittääksesi ymmärtää BM-MSC:iden siirron paikallisia ja systeemisiä vaikutuksia kroonisesti sairastuneisiin kohtiin, kuten infraboniseen parodontaalivaurioon. Lisäksi hoitovaste määritetään koko tarkkailujakson ajan (perustilanteesta 12 kuukauteen).

Opintojen suunnittelu

Tutkimustuotteet ABM-MSCs-viljelmät muodostetaan luubiopsioista, jotka on saatu alveolaarisen luun luuytimestä jokaiselle ryhmään A kuuluvalle potilaalle. Lyhyesti sanottuna, perusteellisen suun huuhtelun jälkeen 0,12 % klooriheksidiinillä 1 minuutin ajan, tehdään osteotomia trefiiniporalla. suoritetaan alveolaarisessa luussa ja 2x8 mm luusydän kerätään. Alue kastellaan suolaliuoksella ja sitten läpät ommellaan, jotta luovutuskohdassa saavutetaan ensisijainen sulkeutuminen. Luunäyte asetetaan välittömästi steriileihin putkiin, jotka sisältävät HBSS:ää ja antibiootteja/mykoottisia aineita, ja kuljetetaan hyvän laboratoriokäytännön (GLP) mukaiseen valtuutettuun laitokseen, joka täyttää Euroopan unionin asettamat laatuohjeet kliinisen varren valmistukseen. soluviljelmät potilaalle toimitettavaksi. aBM-MSC-eristys suoritetaan käyttämällä entsymaattista dissosiaatiomenetelmää, kuten aiemmin on kuvattu (Bakopoulou 2013). Viljelmän laajentamiseksi autologista seerumia, joka on saatu 60 ml:sta jokaiselta koehenkilöltä kerättyä laskimoverta, käytetään täydentämään aMEM-soluviljelyalustaa, jotta vältetään eläinperäisten reagenssien, kuten naudan seerumin, käyttö. Luubiopsia käsitellään välittömästi vakiintuneiden viljelmien korkean elinkelpoisuuden varmistamiseksi. Kahden siirrostuksen laajennuksen jälkeen (likimääräinen tarvittava aika 16-24 päivää soluluovuttajasta riippuen) solut kerätään potilaalle toimittamista varten. Solujen dissosiaatioon ja siirrostukseen käytetään erittäin puhdistettuja, GMP-yhteensopivia rekombinanttientsyymejä (Tryple, Thermo Fisher Scientific) sian trypsiinin käytön välttämiseksi. Tässä vaiheessa tarvitaan 20 ml:n laskimoverinäyte ryhmän B autologisen fibriiniliiman valmistukseen, sillä ryhmän A alkuverenotto (60 ml) kattaa soluviljelmien ja fibriiniliiman valmistuksen tarpeet. Myöhemmin fibriiniliima ladataan (ryhmä A) tai ilman (ryhmä B) kantasoluja kaupallisesti saatavilla olevaan kollageenifleece-telineeseen välittömästi ennen kliinistä käyttöä.

Vakiintuneiden BM-MSC-viljelmien laadunvalvonta ennen kliinistä käyttöä

Ennen potilaalle toimittamista kaikki BM-MSC-viljelmät arvioidaan:

• Elinkelpoisuus käyttämällä Trypan Blue -poissulkemista
• Steriiliys: viljelmät testataan mahdollisen bakteeri-, mykoplasma- ja endotoksiinien kontaminaatioiden varalta (LAL-testi)
• "Stemness"-ominaisuudet perustuvat International Society for Cellular Therapyn (ISCT) MSC:itä koskeviin vähimmäiskriteereihin (Dominici et al 2006).

Huomautus: Kantasolujen karakterisointimenetelmien metodologia on kuvattu analyyttisesti tutkimusryhmämme aikaisemmissa julkaisuissa (Bakopoulou et al. 2013).

Kun BM-MSC:t/fibriiniliima/CaCl2-seos on levitetty kollageenirakenteisiin, pieni näyte satunnaisesti valittujen tapausten biokompleksista erotetaan kirurgisilla saksilla ja siirretään laboratorioon jatkoa varten (rinnakkain kliinisen käytön kanssa). ) kantasolujen käyttäytymisen ex vivo karakterisointi biomimeettisessä mikroympäristössä. Tämä mahdollistaa korrelaation kantasolujen käyttäytymisen ja kliinisen tuloksen välillä, koska regeneroituneiden kudosten hakeminen ja analysointi suoraan isännästä ei ole mahdollista eettisistä syistä.

Autologisen fibriiniliiman valmistus Ryhmien A ja B potilaiden kyynärpääkuopasta otetaan 20 ml laskimoverta ja verinäytteet siirretään välittömästi haukkaputkeen, joka sisältää antikoagulanttia. Verihiutaleiden määrän määrittämisen jälkeen verinäyte sentrifugoidaan (2000 rpm, 10 min) ja plasma erotetaan ja varastoidaan toiseen haukkuun. Sitten verihiutalemäärät määritetään ja näyte sentrifugoidaan uudelleen. PRP (verihiutalerikas plasma, joka sisältää 1 000 000 plts/ul) erotetaan sitten supernatantista PPP (verihiutale huono plasma) ja molempia valmisteita käsitellään edelleen noudattaen standardiprotokollaa fibriiniliiman valmistukseen (Biohelenika, Thessaloniki, Kreikka).

Tutkimuksen kliinisen osan suunnittelu

Aiheiden esivalinta Koehenkilöt rekrytoidaan uusista lähetteistä ennaltaehkäisevän hammaslääketieteen, parodontologian ja implanttibiologian laitokselle; ulkopuolista mainontaa tai rekrytointia ei tehdä. Tutkittavien yleiskunto on hyvä.

Pääsy tutkimukseen Ennen tutkimukseen ottamista päätutkija tiedottaa jokaiselle koehenkilölle tutkimuksen luonteesta ja riskeistä sekä suullisesti että kirjallisesti (Subject Information Form) ja kirjallinen tietoinen suostumus (Subject Informed Consent Signature Form) saatu. Jokaiselle tutkittavalle annetaan kopio hänen asianmukaisesti allekirjoitetusta suostumuslomakkeestaan ​​säilytettäväksi omaa rekisteriään varten. Tutkittavien henkilökohtainen demografinen ja sairaushistoria sekä soveltuvuus opiskeluun pöytäkirjassa asetettujen mukaan- ja poissulkemiskriteerien mukaisesti kirjataan. Koehenkilöt voivat jatkaa lääkkeitä, jotka eivät sisälly poissulkemiskriteereihin; nämä lääkkeet on kuitenkin dokumentoitava yhdessä kaikkien samanaikaisten lääketieteellisten sairauksien kanssa, joita ei ole ennalta suljettu pois.

Koehenkilön vetäytymis- tai keskeyttämismenettelyt Jokaisella tutkittavalla, joka haluaa keskeyttää tutkimuksen henkilökohtaisesta tai muusta syystä, on oikeus tehdä niin. Päätutkija tallentaa kuitenkin syyn minkä tahansa koehenkilön tutkimuksesta vetäytymiseen sen lisäksi, liittyykö syy testituotteeseen. Jos osallistuja ei tule paikalle useammin kuin kahdesti, se poistetaan tutkimuksesta. Koehenkilöt, jotka kokevat haittatapahtuman, suljetaan pois tutkimukseen osallistumisesta.

Jos tutkittava haluaa vetäytyä tutkimuksesta, havainnot pyritään täydentämään ja raportoimaan mahdollisimman perusteellisesti vetäytymispäivään mennessä. Tutkittavia pyydetään harkitsemaan lisätietojen antamista peruutuksen syistä. Kaikki ilmoitetut tiedot tallennetaan.

Kunkin oppiaineen osallistumisen arvioitu kesto Kunkin aiheen odotetaan osallistuvan yhteensä yhdeksään käyntiin 12 kuukauden aikana; yksi seulontakäynti, yksi hoitokäynti osoitetun alueen kirurgista hoitoa varten, neljä seurantatarkastusta ja kolme lisäkäyntiä kliinistä ja radiografista uudelleenarviointia ja näytteenottoa varten (koko sylki, ikenen crevicular neste (GCF), iennalainen plakki).

Tutkijoiden kalibrointi ja satunnaistaminen Potilaiden kelpoisuuden seulontaa yksi tutkija, ja heidät rekisteröidään jatkuvasti yksitellen koodinumeron saatuaan. Tutkimuksen osallistuja, joka ei osallistu tiedonkeruuseen, suorittaa satunnaistamisen ja ilmoittaa hoitomuodon terapeutille puhelinyhteyden avulla. Kliiniset arvioinnit suorittaa yksi tutkija, jolla ei ole pääsyä aikaisempiin tallenteisiin ja joka ei muuten ole mukana muissa kliinisissä toimenpiteissä. Tutkijan kalibrointiharjoitus suoritetaan hyväksyttävän tutkijan sisäisen toistettavuuden saamiseksi PPD:lle, CAL:lle ja vian anatomian arvioinnille. Tutkijan sisäinen toistettavuus arvioidaan luokan sisäisellä korrelaatiokertoimella (ICC) ja Bland-Altmanin 95 %:n sopimusrajoilla (Bland ja Altman, 1999).

Kokeellisten tietojen tilastollinen analyysi Analyysi suoritetaan IBM Statistics SPSS 20.0 -ohjelmistolla. Tiedot ilmaistaan ​​keskiarvona +/- standardipoikkeama (SD). Epätasapainot testi- ja kontrolliryhmien välillä, jotka syntyvät satunnaistusmenetelmillä, arvioidaan käyttämällä riippumattomien näytteiden t-testiä jatkuville muuttujille ja Fisherin tarkkaa testiä tai Chi-Square-testiä kategorisille muuttujille. Hoidon vaikutusten merkitys riippuvaisille muuttujille CAL-muutoksille, PPD-muutoksille ja radiografisille muutoksille arvioidaan rakentamalla lineaarisia sekamalleja käyttäen SPSS MIXED -menettelyä. Kaikkien analyysien tilastollinen merkitsevyys asetetaan arvoon p < 0,05.

Eettiset näkökohdat / Kantasoluviljelmien luvat Biohellenika, Thessaloniki, Kreikka tarjoaa uusinta tekniikkaa ja laboratorioita, jotka toimivat tiukimpien kantasolujen käsittelyä ja varastointia koskevien määräysten mukaisesti. Laboratoriot on lisensoitu hallituksen määräyksen 26/24-3-2008 mukaisesti (Kreikan lain säädös eurooppalain 2004/23/K ja neuvoston 31-3-2004 mukaisesti luovutuksen laadun ja turvallisuuden prototyyppien perustamisesta, osto, laatu valvoo ihmiskudosten ja -solujen kylmäsäilytystä, varastointia ja jakelua (EEL 102/7-4-2004) ja siihen liittyvät ohjeet 2006/17 EK (EEL 38/9/2006) ja 2006/86EK (EEL 294) /25.10.2006). Lisenssi F 6172/17514/1269 on julkaistu Valtioneuvoston paperissa 2589 31/12/2009.

Marraskuusta 2014 lähtien Biohellenika on toiminut uuden lain 3984 alaisuudessa, joka julkaistiin hallituksen julkaisussa nro 150, 2011 kansallisen elinsiirtokomitean terveysministeriölle antaman myönteisen suosituksen jälkeen, ja tällä hetkellä uusi toimilupa julkaistaan ​​hallituksen lehdessä.

Laboratoriot ja menettelyt ovat American Association of Blood Banks (AABB) akkreditoimia, viimeisin tarkastus 30.9.2014 ja National System of Accreditation ISO 15189:2007 mukaisesti. Lisäksi laboratoriot on sertifioitu ISO 9001:2008 -standardin mukaisesti autologisten solulinjojen käsittelyyn, laadunvalvontaan ja kylmäsäilytykseen sekä ISO 13485:2003 -sertifikaatti kylmäsäilytysjärjestelmälle, joka on myös Biohellikan kansainvälinen patentti.

Puhdashuoneet toimivat BSR Ingenieur-Buro -standardin ISO 14644-5 ohjeiden mukaisesti. Turvatasot täyttävät kaikki ISO 27001 -standardit ja yritys on tietosuojaviranomaisen lisensoima ja sääntelemä.

Laboratoriot tutkitaan ilmanlaatua 24 tuntia vuorokaudessa ja ne on varustettu Cryo-View-tietokantajärjestelmällä, ISBT 128 -viivakoodijärjestelmällä, lämpötila-neste N2-tasolla, turvahälyttimillä ja kahdella sähkögeneraattorilla.

Tutkimusaikataulu BM-MSC:iden autologisen siirron kliininen suunnittelu ja interventiot Potilaille, joilla on vaikea krooninen parodontiitti, suunnitellaan ei-kirurgista parodontaalihoitoa paikallispuudutuksessa käsi- ja konekäyttöisillä instrumenteilla, parodontaalihoidon motivaation ja perusteellisten suuhygieniaohjeiden lisäksi. . Potilaat arvioidaan kliinisesti uudelleen kuuden viikon kuluttua ei-kirurgisen hoidon päättymisestä, ja niiltä koehenkilöiltä, ​​joilla on jäljellä parodontaalitaskuja (PPD & CAL ≥ 6 mm; infraluun komponentti ≥ 3 mm) ja joilla ei ole ilmeisiä ientulehduksen merkkejä, seulotaan soveltuvuus seulomiseen. nykyinen tutkimus. Seulontakäynti sisältää alustavan koko suun parodontaalitutkimuksen, intraoraalisen röntgentutkimuksen ja sisällyttäminen/poissulkemiskriteerien täyttymisen. Sopivuuden tapauksessa tutkimuksen luonne selitetään yksityiskohtaisesti kaikille koehenkilöille ja allekirjoitettu suostumuslomake, jonka on hyväksynyt Hammaslääkärikoulun eettinen toimikunta, AUTh. hankitaan jokaiselta osallistujalta. Sitten potilaat jaetaan satunnaisesti yhteen kolmesta hoitoryhmästä (-A, -B ja -C). Jokaisella potilaalla hoidetaan yksi vika.

Tämän jälkeen ryhmän A osallistujilta otetaan luubiopsia ja verinäytteitä tiukoissa steriileissä olosuhteissa. Jokainen näyte laitetaan sitten välittömästi steriileihin putkiin ja kuljetetaan Biohellenikaan, Thessalonikissa, Kreikassa (http://www.biohellenika.gr) kantasolujen eristämiseksi ja laajentamiseksi tiukan protokollan mukaisesti (Bakopoulou et al. 2013, Bakopoulou). et al. valmisteilla). Koska MSC:t eristetään ja laajennetaan in vitro GLP-luokan puhdastiloissa, jotka täyttävät Euroopan unionin asettamat laatuvaatimukset, eikä eläinperäisiä reagensseja käytetä autologiseen siirtoon liittyvien kokeiden aikana, soluja pidetään turvallisina ihmisen kliinisissä soluterapiassa. . Biohellenikan tiloissa kerätään jokaiselta A-ryhmän koehenkilöltä 60 ml laskimoverta pian koepalankeräyksen jälkeen, jotta autologista seerumia käytetään autologisten kantasolujen eristämiseen ja viljelyn laajentamiseen. Lisäksi autologista fibriiniliimaa käytetään lataamaan BM-MSC:t kollageenivillan päälle. Lisäksi ryhmän B koehenkilöiltä otetaan 20 ml:n verinäyte, jotta saadaan fibriiniliimaa, joka rikastaa kollageenivillaa ennen kirurgista sijoittamista luuvaurioon. Lopuksi, ryhmän C koehenkilöitä ei kutsuta verenvuotoon, koska näiden henkilöiden infraluun vaurioita hoidetaan kirurgisesti avoimella läppäpuhdistuksella ilman siirtomateriaaleja.

Osana GLP:n laadunvalvontaa MSC:t analysoidaan steriiliyden ja endotoksiinien varalta ja myös mahdollisen bakteerikontaminaation (BD BACTEC™), mykoplasman ja endotoksiinien (LAL-testi) varalta.

Paikallispuudutus (1,8 ml 2-prosenttista lidokaiinia 1:80 000 epinefriinin kanssa; Lignospan special, Septodont) infiltroidaan hampaiden bukkaali- ja kielialueisiin välttäen papilleja. Sitten tehdään tiukasti intrasulkulaariset viillot ienkudosten ja erityisesti luu-hammasvaurioon liittyvän hampaidenvälisen papillon säilyttämiseksi (Cortellini, 2012; Cortellini ja Tonetti 2007). Vika poistetaan ja juuri höylätään huolellisesti käyttämällä Gracey-kyrettiä ja sähkökäyttöisiä instrumentteja (EMS Piezon®, EMS, Nyon, Sveitsi). Vaurioiden pehmytkudosseinämän pysyvyydestä huolehditaan ja luuvauriota kastellaan suolaliuoksella verenvuodon hillitsemiseksi.

Ryhmässä A oksastusmateriaali (fibriiniliimalla rikastetut BM-MSC:t) toimitetaan kahdessa insuliiniruiskussa, joista kumpikin sisältää 5x10E6 solua/100 μl fibriiniä, ja ne ladataan varovasti kollageenivillan päälle ja polymeroidaan CaCl2:a lisäämällä. Myöhemmin biokompleksi pakataan varovasti defektin sisään, kunnes se on täydellinen. Telinettä käsitellään huolellisesti, jotta vältetään elävien solujen tuhoutuminen.

Ryhmässä B fibriiniliimalla rikastettu kollageenifleece, jossa ei ole eläviä soluja, täyttää pystysuuntaisen luuvaurion varoen. Ryhmissä -A ja -B fibriiniliiman toimitus elävien solujen kanssa tai ilman niitä on identtinen, joten terapeutti on sokea toimenpiteistä.

Ryhmä C, potilaat saavat avoimen läpän debridementin ja juuripinnan höyläyksen samalla tavalla kuin ryhmien -A ja -B koehenkilöt, mutta oksastusmateriaaleja ei käytetä lisänä.

Operaattori sokeutuu hoitomuodolle (ryhmät -A ja -B), kun taas ryhmässä C, koska siirtomateriaaleja ei käytetä, hoitomenetelmä tulee operaattorille ilmeiseksi, mutta tämä tapahtuu leikkauksen päättyessä. kliinisten tietojen keruun jälkeen. Kaikissa ryhmissä etsitään papillasäilytystekniikoita ja minimaalisesti invasiivisia kirurgisia tekniikoita välttäen periosteumin pisteytystä. Läpät asetetaan uudelleen ja ommellaan käyttämällä yhtä modifioitua sisäpatjan ommelta (5-0 Monosyn, Braun) vaurioon liittyvällä hammasvälialueella, ja samanlaisia ​​ompeleita käytetään läppien sulkemiseen kaikilla muilla hampaidenvälisillä alueilla. Kaksi viikkoa leikkauksen jälkeen suoritetaan kliininen havainnointi tapahtumattoman paranemisen tai haitallisen kudosreaktion varalta, minkä jälkeen ompeleet poistetaan.

Kudostekniikan tapaussarjat Sarjassa tapauksia (viisi), joilla on samanlaiset sisällyttäminen/kriteerit kuin edellä, mutta ilman satunnaistamista, kudostekniikkaa sovelletaan noudattaen samaa metodologiaa kuin ryhmässä A. Näissä tapauksissa kudosmuokkausrakenne (biokompleksi) on käytetään yksittäisten hampaidenvälisten periodontaalisten vaurioiden hoitoon käyttämällä äskettäin suunniteltua kirurgista tekniikkaa, niin kutsuttua "suljettua kirurgista tekniikkaa". Lyhyesti sanottuna tämä tekniikka sisältää ienläppien vetäytymisen suljetulla tavalla ilman pehmytkudosten tai hampaiden välisen papillan leikkaamista. Tämä tekniikka minimoi kudosvamman, leikkauksen jälkeisen epämukavuuden ja parantaa pehmytkudosten estetiikkaa.

Leikkauksen jälkeinen hoito Leikkauksen jälkeistä kipua hallitaan ibuprofeenilla (600 mg) kirurgisen toimenpiteen lopussa ja 12 tuntia myöhemmin, jos kipua ilmenee. Amoksisilliinia (500 mg / 8 tuntia viiden päivän ajan) määrätään kaikille osallistujille. Kaikkia potilaita neuvotaan käyttämään 0,12 % klooriheksidiiniä kahdesti päivässä ja välttämään harjaamista, hammaslangan käyttöä ja pureskelua hoidetulla alueella neljän viikon ajan. Tämän 4 viikon jakson aikana tiukka leikkauksen jälkeinen tukiohjelma aloitetaan kahden viikon välein, ja sen jälkeen potilaat lopettavat huuhtelun klooriheksidiiniliuoksella ja jatkavat suuhygieniaa. Hampaiden välisen puhdistus aloitetaan kaikissa ryhmissä kuusi viikkoa leikkauksen jälkeen. Sen jälkeen koehenkilöt nähdään kolmen, kuuden ja 12 kuukauden iässä parodontaalista tukihoitoa varten.

Kliiniset tallenteet Koko suun ja paikkakohtaiset periodontaaliset tallenteet, mukaan lukien BOP; Plakkiindeksi (plakin läsnäolo/puuttuminen); PPD ja CAL määritetään käyttämällä manuaalista parodontaalianturia (Hu-Friedy XP-23/QW) lähimpään millimetriin kuudessa kohdassa hammasta kohti ja yhdensuuntaisesti pitkän akselin kanssa neljässä aikapisteessä; lähtötaso, 6, 9, 12 kuukautta. Kliiniset mittaukset nimetyissä paikoissa (infraboniset viat) määritetään ennen leikkausta ja ennen anestesiaa (perustaso). Leikkauksen sisäiset arvioinnit tehdään kerran leikkauksen aikana.

Leikkauksen sisäiset kliiniset arvioinnit Defektin morfologia (yksi, kaksi, kolme seinää tai yhdistelmä) määritetään kirurgisesti vaurioon liittyvien luun seinämien lukumäärän perusteella; Semento-emaliliitoksen ja vian pohjan välinen etäisyys (CEJ-BD) määritetään millimetreinä; Etäisyys CEJ:stä luun harjan koronaaleimpaan interproksimaaliseen tasoon (CEJ-BC) määritetään millimetreinä; Vian kokonaissyvyys: luun harjan ja vaurion pohjan välinen etäisyys (BC-BD) määritetään millimetreinä; Vian leveyden leveys (luun harjan ja juuren pinnan välinen vaakasuora etäisyys) määritetään mm.

Jos CEJ ei ole havaittavissa kohdunkaulan palautuksen vuoksi, palautusmarginaali (RM) toimii vertailupisteenä kliinisissä ja radiografisissa mittauksissa.

Radiografinen arviointi Suonsisäistä digitaalista radiografiaa käytetään infraluun vaurioiden luun regeneraation määrittämiseen kuudessa ajankohdassa; lähtötaso, 6 viikkoa, 3, 6, 9, 12 kuukautta. Standardoidut periapikaaliset digitaaliset röntgenkuvat (RadioVisioGraphy; Trophy Radiology S.A., Pariisi, Ranska) saadaan käyttämällä pitkäkartion rinnakkaistekniikkaa. Valotusgeometrian standardisoimiseksi anturin pidikkeeseen säädetään joustavasta jäljennösmateriaalista valmistettu räätälöity puremiskappale, jota säilytetään suljetuissa muovisäiliöissä huoneenlämmössä ja käytetään uudelleen jokaisen palautusradiografisen vastaanoton yhteydessä.

Samalla tavalla kuin leikkauksen sisäisessä arvioinnissa, röntgenkuvissa määritetään seuraavat anatomiset maamerkit: sementoemeliliitos (CEJ), alveolaarisen luun koronaalisin taso (BC) ja luukadon apikaalinen laajuus ( BD). Yksityiskohtaisemmin CEJ:n sijainti tunnistetaan; Röntgenkuvassa tunnistetaan koronaalisin alue, jossa parodontaaliside säilyttää tasaisen leveyden, mikä osoittaa luukadon apikaalisimman laajennuksen. Infraboninen vika lasketaan mittaamalla vian leveys koronaalisimmasta kohdasta ja tyvestä; CEJ-BD:n ja BC-BD:n välinen etäisyys; CEJ-BC:n välinen etäisyys; juuren pystyakselin ja hampaiden välisen luun seinämän välinen kulma (Tonetti et al. 1993). Luun regeneraation radiografisen arvioinnin määrittää teräväpiirtomonitorilla sama kalibroitu tutkija, joka on sokeutunut hoitomuotoon ja jolla ei ole pääsyä aikaisempiin tallenteisiin. Arvioinnit suoritetaan numeeristen mittausten mittaustyökalulla (VixWin™ Platinum|Gendex -ohjelmisto) ja viitataan anturiin kiinnitettävään vakiopituiseen (5 mm) metallitankoon.

Näytteiden kerääminen Näytteet kerätään seuraavassa järjestyksessä kuudessa ajankohdassa; lähtötaso, 6 viikkoa, 3, 6, 9, 12 kuukautta.

(i) Sylki Sylki kerätään ennen kliinisiä periodontaalisia mittauksia tai muita parodontaalisia toimenpiteitä ja yleensä aamulla yön yli paaston jälkeen, jonka aikana koehenkilöitä pyydetään olemaan juomatta (paitsi vettä) tai pureskelematta purukumia. Kokonaiset sylkinäytteet otetaan yskäämällä 30 ml:n polypropeeniputkiin 5 minuutin ajan.

(ii) GCF Gingival crevicular -nestenäytteet otetaan vaurioiden poskihampaiden välisistä näkökohdista. Ennen GCF-keräystä pinnat ilmakuivataan varovasti ja eristetään syljestä asettamalla puuvillarullat ja käyttämällä syljenpoistolaitetta. Sitten supragingivaalinen plakki poistetaan varovasti steriileillä kyreteillä ja paperiliuskoja (Periopaper, OraFlow Inc., Smithtown, NY, USA) asetetaan parodontaalitaskuun, kunnes tuntuu lievää vastustusta 30 sekunnin ajan. Liuskoja asetettaessa on vältettävä mekaanisia vaurioita, ja veren saastuttamat liuskat hävitetään. Jokainen liuska potilasta kohti säilytetään erillisessä 1,5 ml:n mikrosentrifugiputkessa ja säilytetään -70 °C:ssa. Ennen käyttöä liuskojen proteiinit eluoidaan 500 ul:aan fosfaattipuskuroitua suolaliuosta (PBS), jota on täydennetty BSA:lla (1 % tilavuus/tilavuus).

(iii) Plakki GCF-keräyksen jälkeen subgingivaalinen plakki kerätään nimetyltä paikalta. Näytteenottoalue eristetään syljestä, kuivataan varovasti ilmalla ja sen jälkeen, kun on varmistettu, ettei supragingivaalisia plakkikertymiä ole, asetetaan kaksi paperipistettä 30 sekunniksi parodontaalitaskuun ja kerätään yhdistetty näyte. Kaikki näytteet säilytetään Eppendorf-putkissa (Eppendorf, Hampuri, Saksa) -80 °C:ssa ennen käsittelyä. Mikrobiplakin keräämiseen käytetään paperipisteitä, jotta vältetään parodontaalikudosten mekaaniset häiriöt.

Tietojen hallinta Tutkijoiden on varmistettava, että tutkittavan anonyymiys säilyy. Kaikissa tutkimukseen liittyvissä asiakirjoissa tutkittavien tulee olla tunnistettavissa vain niiden nimikirjaimien, sukupuolen ja/tai aihenumeron perusteella. Henkilötiedot (esim. lääketieteelliset kortit) säilytetään erillisessä, turvallisessa paikassa poissa muista tutkimuskohtaisista tiedoista, joihin on rajoitettu pääsy vain päätutkijalla.

Tietoon perustuva suostumusprosessi Päätutkijan vastuulla on saada kirjallinen suostumus tutkittavalta. Tietoon perustuva suostumuslomake koostuu kahdesta erillisestä asiakirjasta; Aiheen tietolomake ja Allekirjoituslomake; molemmat asiakirjat tulee hyväksyä hammaslääkärikoulun eettisessä komiteassa, AUTh ennen tutkimusta. Aihetietolomakkeessa on annettava riittävä selvitys tutkimuksen tavoitteista, tavoitteista, menetelmistä, odotetuista hyödyistä ja mahdollisista vaaroista äidinkielellä, jota tutkittava ymmärtää. Päätutkijan on tämän jälkeen annettava riittävästi aikaa, jotta koehenkilö voi lukea ja ymmärtää tietoisen suostumuslomakkeen ja harkita kliiniseen tutkimukseen osallistumista. Päätutkijan ja koehenkilön on sekä allekirjoitettava että päivättävä lomake ennen kuin tutkittava voi osallistua kliiniseen tutkimukseen. Jokaiselle tutkittavalle lähetetään sitten kopio hänen asianmukaisesti allekirjoitetusta ja päivätystä suostumuslomakkeesta ja kaikista muista kirjallisista tiedoista.