Autologe alveolære knoglemarv mesenkymale stamceller til rekonstruktion af infrabony periodontale defekter (PerioRegen)

Mål og formål Denne undersøgelse beskriver en ny metode til at regenerere parodontale væv i parodontale infrabony defekter ved hjælp af autologe BM-MSC'er, fri for animalske reagenser, produceret i renrumsfaciliteter beriget med autolog fibrinlim og podet i kommercielt tilgængelige kollagen stilladser (collagen fleece) ).

Primært formål Denne undersøgelse har til formål at vurdere effektiviteten af ​​en ny regenerativ behandling af periodontale infrabenedefekter ved hjælp af et biokompleks af BM-MSC'er/fibrinlim/kollagenfleece sammenlignet med en cellefri podningserstatning af fibrinlim/kollagenfleece og en kontrolbehandlingstilgang med åben klapdebridering uden supplerende brug af podematerialer.

Sekundære mål

• At dokumentere stabiliteten af ​​det forbedrede behandlingsresultat og fortsætte med at vurdere sikkerheden og effektiviteten af ​​BM-MSCs transplantation sammenlignet med kontrolbehandlingen af ​​åbne flap debridement i løbet af undersøgelsesperioden.
• Bestem de immunologiske og mikrobiologiske profiler for deltagerne gennem hele undersøgelsesperioden i et forsøg på at forstå lokale og systemiske virkninger af transplantation af BM-MSC'er på kronisk syge steder, såsom infrabony periodontal defekt. Derudover vil det helbredende respons på behandlingen blive bestemt i hele observationsperioden (baseline til 12 måneder).

Studere design

Undersøgelsesprodukter aBM-MSCs kulturer vil blive etableret fra osseøse biopsier afledt af knoglemarv af alveolær knogle i hver patient, der tilhører gruppe A. Kort fortalt, efter en grundig oral skylning med klorhexidin 0,12 % i 1 min, vil en osteotomi ved hjælp af en trephine boremaskine blive udført. udføres i alveolknoglen, og en 2x8 mm benkerne vil blive høstet. Området vil blive vandet med saltvandsopløsning, og derefter vil flapper blive syet for at opnå primær lukning på donorstedet. Knogleprøven vil derefter straks blive anbragt i sterile rør indeholdende HBSS og antibiotika/antimykotika og vil blive transporteret til en god laboratoriepraksis (GLP)-kompatibel autoriseret facilitet, der opfylder kvalitetsretningslinjerne fastsat af Den Europæiske Union for klargøring af stammer af klinisk kvalitet. cellekulturer til levering til patienten. aBM-MSC-isolering vil blive udført ved hjælp af den enzymatiske dissociationsmetode, som tidligere beskrevet (Bakopoulou 2013). Til dyrkningsudvidelse vil autologt serum opnået fra 60 ml venøst ​​blod indsamlet fra hvert individ blive brugt til at supplere aMEM-celledyrkningsmedium for at undgå brugen af ​​animalske reagenser, såsom bovint serum. Den ossøse biopsi vil straks blive behandlet for at sikre høj levedygtighed af de etablerede kulturer. Efter ekspansion i to passager (ca. krævet tid 16-24 dage afhængig af celledonor) vil cellerne blive høstet til levering til patienten. Til celledissociation og -passage vil højtoprensede, GMP-kompatible rekombinante enzymer (Tryple, Thermo Fisher Scientific) blive brugt for at undgå brug af svinetrypsin. På dette stadium vil en prøve på 20 ml venøst ​​blod være påkrævet til fremstilling af den autologe fibrinlim i gruppe B, da i gruppe A indledende blodudladning (60 ml) vil dække behovene for cellekulturerne og fibrinlimpræparation. Efterfølgende vil fibrinlim blive fyldt med (Gruppe A) eller uden (Gruppe B) stamceller i et kommercielt tilgængeligt kollagen fleece stillads direkte før klinisk påføring.

Kvalitetskontrol af de etablerede BM-MSC kulturer før klinisk anvendelse

Før levering til patienten vil alle BM-MSCs kulturer blive evalueret for:

• Levedygtighed ved brug af Trypan Blue-ekskludering
• Sterilitet: kulturer vil blive testet for potentiel kontaminering fra bakterier, mycoplasma og endotoksiner (LAL-test)
• "Stemness"-egenskaber baseret på de minimale kriterier fastsat af International Society for Cellular Therapy (ISCT) vedrørende MSC'er (Dominici et al 2006).

Bemærk: Metode til stamcellekarakteriseringsmetoder er analytisk beskrevet i tidligere publikationer af vores forskningsgruppe (Bakopoulou et al. 2013).

Efter påføring af BM-MSC'er/fibrinlim/CaCl2-blandingen i kollagen-stilladserne, vil en lille prøve af biokomplekset af tilfældigt udvalgte tilfælde blive adskilt ved hjælp af kirurgiske saks og vil blive overført til laboratoriet for yderligere (parallelt med den kliniske anvendelse) ) ex vivo karakterisering af stamcelleadfærd i et biomimetisk mikromiljø. Dette vil tillade korrelation mellem stamcelleadfærd og det kliniske resultat, da genfinding og analyse af det regenererede væv direkte fra værten ikke er mulig af etiske årsager.

Klargøring af autolog fibrinlim Tyve ml veneblod vil blive opsamlet fra ante-cubital fossa hos patienter i gruppe A og B, og blodprøver vil straks blive overført til et falkerør, som indeholder antikoagulant. Efter bestemmelse af blodpladetallet vil blodprøven blive centrifugeret (2000 rpm, 10 min), og plasma vil blive adskilt og opbevaret i en anden falk. Blodpladeantal vil derefter blive bestemt, og prøven vil blive centrifugeret igen. PRP (blodpladerigt plasma indeholdende 1.000.000 plts/ul) vil derefter blive adskilt fra supernatanten PPP (blodpladefattigt plasma), og begge præparater vil blive viderebearbejdet efter en standardprotokol for fibrinlimpræparation (Biohellenika, Thessaloniki, Grækenland).

Design af den kliniske del af undersøgelsen

Forudvalg af emner. Emner vil blive rekrutteret fra nye henvisninger på afdelingen for forebyggende tandpleje, parodontologi og implantatbiologi; der vil ikke blive foretaget ekstern annoncering eller rekruttering. Forsøgspersonerne vil have et godt generelt helbred.

Optagelse i undersøgelsen Inden optagelse i undersøgelsen vil hvert forsøgsperson blive informeret af hovedforskeren om arten og risiciene ved undersøgelsen både mundtligt og skriftligt (Subject Information Form), og skriftligt informeret samtykke (Subject Informed Consent Signature Form) vil blive givet. opnået. Hvert forsøgsperson vil få en kopi af deres behørigt underskrevne samtykkeerklæring til at opbevare for deres egne registre. Forsøgspersonernes personlige demografi og sygehistorie og studieegnethed i overensstemmelse med inklusions- og eksklusionskriterierne i protokollen vil blive registreret. Forsøgspersoner kan fortsætte med enhver medicin, der ikke er inkluderet i eksklusionskriterierne; disse medikamenter bør dog dokumenteres sammen med enhver samtidig medicinsk tilstand, som ikke på forhånd er udelukket.

Procedurer for forsøgspersonens tilbagetrækning eller afbrydelse Enhver forsøgsperson, der ønsker at trække sig fra undersøgelsen af ​​personlig eller anden grund, er berettiget til at gøre det. Årsagen til, at et hvilket som helst forsøgsperson trækker sig fra undersøgelsen, ud over om årsagen er relateret til testproduktet, vil dog blive registreret af den primære investigator. Enhver deltager, der undlader at deltage mere end to gange, fjernes fra undersøgelsen. Forsøgspersoner, der oplever en uønsket hændelse, vil blive udelukket fra yderligere deltagelse i undersøgelsen.

Hvis en forsøgsperson ønsker at trække sig fra undersøgelsen, vil der blive gjort alt for at færdiggøre og rapportere observationerne så grundigt som muligt frem til tilbagetrækningsdatoen. Forsøgspersoner vil blive bedt om at overveje at give yderligere oplysninger om årsagen(e) til tilbagetrækningen. Alle rapporterede oplysninger vil blive registreret.

Forventet varighed af hver fagdeltagelse Hvert fag forventes at deltage i ni besøg i alt over en periode på 12 måneder; et screeningsbesøg, et behandlingsbesøg for at modtage kirurgisk behandling af det udpegede område, fire opfølgningsgennemgange og tre yderligere besøg til klinisk og radiografisk revurdering og prøvetagning (helt spyt, tandkødscrevikulær væske (GCF), subgingival plak).

Efterforskernes kalibrering og randomisering Patienter vil blive screenet for berettigelse af én undersøger og vil blive tilmeldt én ad gangen på kontinuerlig basis efter at have opnået et kodenummer. En forsøgsbidragyder, der ikke er involveret i dataindsamling, vil udføre randomiseringen og annoncere behandlingsmodaliteten til terapeuten ved hjælp af telefonkommunikation. Kliniske vurderinger vil blive udført af en enkelt eksaminator, som ikke vil have adgang til tidligere optagelser og ikke på anden måde er involveret i andre kliniske procedurer. En investigator-kalibreringsøvelse vil blive udført for at opnå acceptabel intra-eksaminer-reproducerbarhed for PPD, CAL og evaluering af defektanatomi. Intra-eksaminator reproducerbarhed vil blive evalueret af Intraclass Correlation Coefficient (ICC) og Bland-Altman 95% grænser for overensstemmelse (Bland og Altman, 1999).

Statistisk analyse af eksperimentelle data Analysen vil blive udført ved hjælp af IBM Statistics SPSS 20.0, software. Data vil blive udtrykt som middel +/- standardafvigelse (SD). Ubalancer mellem test- og kontrolgrupperne, der genereres af randomiseringsprocedurerne, vil blive vurderet ved hjælp af den uafhængige samples t-test for kontinuerte variable og Fishers Exact-testen eller Chi-Square-testen for kategoriske variabler. Betydningen af ​​behandlingseffekterne på de afhængige variabler CAL-ændringer, PPD-ændringer og radiografiske ændringer vil blive estimeret ved at konstruere lineære blandede modeller ved brug af SPSS MIXED-proceduren. For alle analyser vil den statistiske signifikans blive sat til p<0,05.

Etiske overvejelser/godkendelser af stamcellekulturer Biohellenika, Thessaloniki, Grækenland leverer topmoderne faciliteter og laboratorier, der opererer under de strengeste regler for behandling og opbevaring af stamceller. Laboratorierne er licenseret i henhold til regeringens bekendtgørelse 26/24-3-2008 (regulering af græsk lov i henhold til europæisk lov 2004/23/K af og Rådet 31-3-2004 for etablering af prototyper af kvalitet og sikkerhed for donationen, køb, kvalitetskontrollerer kryokonservering, opbevaring og distribution af humane væv og celler (EEL 102/7-4-2004) og de relaterede retningslinjer 2006/17 EK (EEL 38/9/2006) og 2006/86EK (EEL 294) /25-10-2006). Licensen F 6172/17514/1269 er offentliggjort i Gov. paper 2589 31/12/2009.

Siden november 2014 har Biohellenika opereret under den nye lov 3984, offentliggjort i Gov-papir nr. 150, 2011 efter en positiv anbefaling fra National Transplant Committee til Department of Health, og i øjeblikket er den nye licens ved at blive offentliggjort i Gov-papiret.

Laboratorierne og procedurerne er akkrediteret af American Association of Blood Banks (AABB), sidste inspektion den 30. september 2014 og af National System of Accreditation i henhold til ISO 15189:2007. Også laboratorierne er certificeret i henhold til ISO 9001:2008, til behandling, kvalitetskontrol og kryokonservering af autologe cellelinjer og ISO 13485:2003 for kryokonserveringssystemet, som også er et internationalt patent af Biohellenika.

Renrum fungerer efter retningslinjerne fra BSR Ingenieur-Buro med ISO 14644-5. Sikkerhedsniveauerne opfylder alle standarderne ISO 27001, og virksomheden er licenseret og reguleret af Datatilsynet.

Laboratorierne bliver undersøgt 24 timer for luftkvalitet og udstyret med Cryo-View-databasesystem, ISBT 128 stregkodningssystem, temperatur-væske N2 niveau, sikkerhedsalarmer og to strømgeneratorer.

Studieskema Klinisk design og interventioner til autolog transplantation af BM-MSC'er Forsøgspersoner med svær kronisk parodontitis vil blive planlagt til at modtage ikke-kirurgisk paradentosebehandling under lokalbedøvelse ved hjælp af hånd- og kraftdrevne instrumenter, foruden motivation i parodontal pleje og grundige mundhygiejneinstruktioner . Forsøgspersoner vil blive klinisk revurderet seks uger efter afslutningen af ​​ikke-kirurgisk behandling, og de forsøgspersoner med resterende parodontale lommer (PPD & CAL ≥ 6 mm; infrabony komponent ≥ 3 mm), og ingen åbenlyse tegn på tandkødsbetændelse vil blive screenet for egnethed til at deltage i nuværende undersøgelse. Screeningsbesøget vil omfatte en indledende fuldmund-parodontal undersøgelse, intra-oral røntgenundersøgelse og opfyldelse af inklusions-/eksklusionskriterier. I tilfælde af egnethed vil undersøgelsens karakter blive forklaret i detaljer til alle fag og en underskrevet samtykkeerklæring godkendt af Tandlægeskolens Etiske Udvalg, AUTh. vil blive indhentet fra hver deltager. Derefter vil patienterne blive tilfældigt fordelt i en af ​​de tre behandlingsgrupper (-A, -B og -C). En enkelt defekt vil blive behandlet hos hver patient.

Efterfølgende vil en ossøs biopsi og blodprøver blive indsamlet fra deltagerne i gruppe A under strengt sterile forhold. Hver prøve vil derefter straks blive placeret i sterile rør og vil blive transporteret til Biohellenika, Thessaloniki, Grækenland (http://www.biohellenika.gr) til stamcelleisolering og ekspansion i henhold til en streng protokol (Bakopoulou et al. 2013, Bakopoulou et al. under forberedelse). Da MSC'er vil blive isoleret og udvidet in vitro i GLP-klasse rene rum, der opfylder kvalitetsretningslinjerne fastsat af Den Europæiske Union, og der ikke vil blive brugt dyrereagenser under forsøgene til autolog transplantation, anses cellerne for at være sikre til human klinisk celleterapi. . I Biohellenika-faciliteter vil der blive opsamlet 60 ml veneblod fra hvert individ i gruppe A kort efter biopsihøsten, således at autologt serum bruges til isolering og dyrkningsudvidelse af de autologe stamceller. Derudover vil autolog fibrinlim blive brugt til at indlæse BM-MSC'erne på kollagen fleece. Derudover vil en blodprøve på 20 ml blive indsamlet fra forsøgspersoner i gruppe B for at give fibrinlim, som vil berige kollagenfleece før kirurgisk placering i knogledefekten. Endelig vil forsøgspersoner i gruppe C ikke blive indkaldt til blodudladning, da de infrabenede defekter hos disse individer vil blive behandlet kirurgisk ved debridement med åben klap uden supplerende brug af podematerialer.

Som en del af GLP-kvalitetskontrollen vil MSC'erne blive analyseret for sterilitet og endotoksiner og vil også blive testet for potentiel kontaminering fra bakterier (BD BACTEC™), mycoplasma og endotoksiner (LAL-test).

Lokalbedøvelse (1,8 ml 2 % lidocain med 1:80.000 adrenalin; Lignospan special, Septodont) vil blive infiltreret i de bukkale og linguale aspekter af de involverede tænder og undgå papiller. Derefter vil der blive udført strengt intrasulkulære snit for at bevare tandkødsvævet og især den interdentale papilla forbundet med knogle-tanddefekten (Cortellini, 2012; Cortellini og Tonetti 2007). Defekten vil blive debrideret, og roden vil blive omhyggeligt høvlet med den kombinerede brug af Gracey curetter og motordrevne instrumenter (EMS Piezon®, EMS, Nyon, Schweiz). Der vil blive sørget for at fastholde bløddelsvæggen af ​​defekterne, og den knogleske defekt vil blive skyllet med saltvand for at kontrollere blødningen.

I gruppe A vil podningsmaterialet (BM-MSC'er beriget med fibrinlim) blive leveret i to insulinsprøjter, der hver indeholder 5x10E6 celler/100μl fibrin og vil forsigtigt blive fyldt på kollagen fleece og polymeriseret med tilsætning af CaCl2. Efterfølgende vil biokomplekset forsigtigt blive pakket ind i defekten, indtil fuldstændig udfyldning. Håndtering af stilladset sker med omhu for at undgå ødelæggelse af levedygtige celler.

I gruppe B vil kollagenfleece beriget med fibrinlim uden levedygtige celler udfylde den vertikale knogledefekt med forsigtighed. I gruppe -A og -B vil leveringen af ​​fibrinlim med/uden levedygtige celler være identisk, således at behandleren er blindet for procedurerne.

Gruppe C vil patienter modtage åben klapdebridering og rodafhøvling af rodoverfladen på samme måde som forsøgspersoner i gruppe -A og -B, men der vil ikke være nogen supplerende brug af podematerialer.

Operatøren vil være blindet for behandlingsmodaliteten (Gruppe -A og -B), mens i gruppe C, da der ikke vil blive brugt podematerialer, vil behandlingsmodaliteten blive indlysende for operatøren, men dette vil finde sted mod afslutningen af ​​operationen , efter indsamling af kliniske data. Papillakonserveringsteknikker og minimalt invasive kirurgiske teknikker vil blive tilstræbt i alle grupper, hvorved man undgår at score periosteum. Flapper vil blive genplaceret og sutureret ved hjælp af en enkelt modificeret intern madrassutur (5-0 Monosyn, Braun) ved det defektassocierede interdentale område, og lignende suturer vil blive brugt til at lukke flapperne i andre interdentale områder. To uger efter operationen vil der blive udført klinisk observation for hændelsesløs heling eller tilstedeværelse af uønskede vævsreaktioner efterfulgt af suturfjernelse.

Caseserier til vævsteknologi I en serie af cases (fem) med lignende inklusion/kriterier som ovenfor, men uden at gennemgå randomisering, anvendes vævsmanipulation efter samme metodik som i gruppe A. I disse tilfælde er den vævsmanipulerede konstruktion (biokompleks) anvendes til at behandle isolerede interdentale periodontale defekter ved hjælp af en nydesignet kirurgisk teknik, den såkaldte "lukket kirurgisk teknik". Kort sagt indebærer denne teknik tilbagetrækning af tandkødsflapper på en lukket måde uden at dissekere bløddelene eller interdentalpapillen. Denne teknik minimerer vævstraumer, postoperativt ubehag og forbedrer blødt vævs æstetik.

Postoperativ behandling Postoperativ smerte vil blive kontrolleret med Ibuprofen (600 mg) ved afslutningen af ​​den kirurgiske procedure og 12 timer senere, hvis du har smerter. Amoxicillin (500 mg / 8 timer i fem dage) vil blive ordineret til alle deltagere. Alle patienter vil blive instrueret i at bruge 0,12 % klorhexidin to gange dagligt og undgå at børste, bruge tandtråd og tygge hårdt på det behandlede område i fire uger. I løbet af denne 4-ugers periode vil der blive påbegyndt en streng postoperativ støtteprogrambehandling med intervaller om ugen, og derefter vil patienterne holde op med at skylle med klorhexidinopløsning og genoptage mundhygiejnen. Interdental rengøring vil begynde seks uger efter operationen for alle grupper. Derefter vil forsøgspersoner blive set efter tre, seks og 12 måneder til parodontal støttende behandling.

Kliniske optagelser Fuldmund- og stedspecifikke parodontale optagelser inklusive BOP; Plaque Index (tilstedeværelse/fravær af plak); PPD og CAL vil blive bestemt ved hjælp af en manuel parodontal probe (Hu-Friedy XP-23/QW) til nærmeste millimeter på seks steder pr. tand og parallelt med den lange akse på fire tidspunkter; baseline, 6-, 9-, 12-måneder. Kliniske målinger på de udpegede steder (infrabony defekter) vil blive bestemt før operation og før anæstesi (baseline). Intra-kirurgiske vurderinger vil blive udført én gang under operationen.

Intrakirurgiske kliniske vurderinger Defektmorfologien (en-, to-, trevægge eller kombination) vil blive bestemt intra-kirurgisk af antallet af knoglevægge forbundet med læsionen; Afstanden mellem cemento-emaljeforbindelsen og bunden af ​​defekten (CEJ-BD) bestemmes i mm; Afstanden fra CEJ til det mest koronale interproksimale niveau af knoglekammen (CEJ-BC) vil blive bestemt i mm; Den totale defektdybde: afstanden mellem knoglekammen og bunden af ​​defekten (BC-BD) bestemmes i mm; Bredden af ​​defektbredden (vandret afstand mellem knoglekammen og rodoverfladen) vil blive bestemt i mm.

Hvis CEJ ikke kan påvises på grund af en cervikal restaurering, vil restaureringsmarginen (RM) tjene som referencepunkt for kliniske og radiografiske målinger.

Radiografisk evaluering Intraoral digital radiografi vil blive brugt til at bestemme knogleregenereringen af ​​infrabony defekterne på seks tidspunkter; baseline, 6 uger, 3, 6, 9, 12 måneder. Standardiserede periapikale digitale røntgenbilleder (RadioVisioGraphy; Trophy Radiology S.A., Paris, Frankrig) vil blive opnået ved brug af den lange kegle parallelle teknik. For at standardisere eksponeringsgeometrien vil en tilpasset bideblok af et elastisk aftryksmateriale blive justeret på sensorholderen, opbevaret i forseglede plastbeholdere ved stuetemperatur og vil blive genbrugt under hver tilbagekaldende radiografisk aftale.

På samme måde som den intra-kirurgiske vurdering vil følgende anatomiske pejlemærker blive defineret på røntgenstrålerne: cementoenamel junction (CEJ), det mest koronale niveau af den alveolære knogle (BC) og det apikale omfang af knogletab ( BD). Mere detaljeret vil placeringen af ​​CEJ blive identificeret; det mest koronale område, hvor det periodontale ledbånd bevarer en jævn bredde, vil blive identificeret på røntgenbilledet for at angive den mest apikale forlængelse af knogletab. Den infrabenede defekt vil blive beregnet ved at måle bredden af ​​defekten ved det mest koronale aspekt og ved bunden; afstanden mellem CEJ-BD og BC-BD; afstanden mellem CEJ-BC; vinklen mellem rodens lodrette akse og den interdentale knoglevæg (Tonetti et al. 1993). Radiografisk evaluering af knogleregenerering vil blive defineret på en high definition monitor af den samme kalibrerede undersøger, som er blindet for behandlingsmodaliteten og ikke har adgang til tidligere optagelser. Vurderinger vil blive udført ved hjælp af måleværktøjet til numeriske målinger (VixWin™ Platinum|Gendex-software) med reference til en metalstang med standardlængde (5 mm), der vil blive fastgjort til sensoren.

Indsamling af prøver. Prøver vil blive indsamlet i følgende rækkefølge på seks tidspunkter; baseline, 6 uger, 3, 6, 9, 12 måneder.

(i) Spyt Spyt vil blive opsamlet forud for kliniske parodontale målinger eller enhver periodontal intervention og generelt om morgenen efter en faste natten over, hvor forsøgspersonerne anmodes om ikke at drikke (undtagen vand) eller tygge tyggegummi. Hele spytprøver opnås ved opspytning i 30 ml polypropylenrør i 5 minutter.

(ii) GCF Gingival crevikulær væskeprøver vil blive opnået fra de bukkale interdentale aspekter af defekterne. Før GCF-opsamling, vil overfladerne blive forsigtigt lufttørret og isoleret fra spyt ved at placere bomuldsruller og bruge en spytudkaster. Derefter fjernes supragingival plak forsigtigt med sterile curetter, og papirstrimler (Periopaper, OraFlow Inc., Smithtown, NY, USA) vil blive placeret i parodontallommen, indtil der mærkes mild modstand i 30'erne. Der vil blive udvist forsigtighed for at undgå mekanisk traume, når strimlerne placeres, og de strimler, der er kontamineret med blod, vil blive kasseret. Hver strimmel pr. patient vil blive opbevaret i et separat 1,5 ml mikrocentrifugerør og opbevaret ved -70°C. Før brug vil proteinerne på strimlerne blive elueret i 500 µl phosphatbufret saltvand (PBS) suppleret med BSA (1 % v/v).

(iii) Plaque Efter GCF-indsamling vil subgingival plak blive indsamlet fra det udpegede sted. Prøveudtagningsområdet vil blive isoleret fra spyt, forsigtigt tørret med luft, og efter at det er sikret, at der ikke er supragingivale plakaflejringer til stede, vil to papirpunkter blive placeret i 30 sekunder i parodontallommen, og en samlet prøve vil blive indsamlet. Alle prøver vil blive opbevaret i Eppendorf-rør (Eppendorf, Hamborg, Tyskland) ved -80°C før behandling. Papirpunkter vil blive brugt til opsamling af mikrobiel plak for at undgå mekanisk forstyrrelse af parodontale væv.

Datahåndtering Efterforskerne skal sikre, at forsøgspersonens anonymitet opretholdes. På enhver undersøgelsesrelateret dokumentation bør forsøgspersoner kun kunne identificeres ved deres initialer, køn og/eller emnenummer. Personlige oplysninger (dvs. medicinske kort) opbevares på et separat, sikkert sted, væk fra andre undersøgelsesspecifikke data med begrænset adgang til kun den primære investigator.

Processen med informeret samtykke Det er hovedefterforskerens ansvar at indhente skriftligt samtykke fra forsøgspersonen. Formularen til informeret samtykke vil bestå af to separate dokumenter; en subjektinformationsformular og en subjektinformeret samtykkesignaturformular; begge dokumenter godkendes af Tandlægeskolens etiske udvalg, AUTh forud for studiet. Oplysningsskemaet om emnet vil give en fyldestgørende forklaring på et ikke-teknisk sprog, som er forståeligt for emnet, af undersøgelsens formål, målsætninger, metoder, forventede fordele og potentielle farer. Den primære investigator skal derefter give forsøgspersonen rigelig tid til at læse og forstå formularen til informeret samtykke og til at overveje deltagelse i den kliniske undersøgelse. Den primære investigator og forsøgspersonen skal både underskrive og datere formularen, før forsøgspersonen kan deltage i den kliniske undersøgelse. Hvert forsøgsperson vil derefter få udstedt en kopi af deres behørigt underskrevne og daterede informerede samtykkeerklæring og enhver anden skriftlig information.