- ICH GCP
- Registr klinických studií v USA
- Klinická studie NCT02448056
MiRNA jako diagnostický a prognostický biomarker hepatocelulárního karcinomu
Hepatocelulární karcinom (HCC) je nejčastější primární rakovinou jater a třetí hlavní příčinou úmrtí souvisejících s rakovinou na celém světě. Léčba HCC zahrnuje chirurgickou resekci, lokální terapie, jako je radiofrekvenční ablace a injekce etanolu, transarteriální chemoembolizace, sorafenib a nejlepší podpůrná péče. I po úspěšné léčbě, jako je chirurgická resekce, však většina pacientů trpěla recidivou nebo progresí nádoru. Protože systémy klinického stagingu nedokážou přesně předpovědět výsledek pacientů s HCC, je velmi zajímavé hledat sérové biomarkery pro HCC. Mezi nimi je nejlépe prozkoumaný alfa-fetoprotein (AFP). Použitelnost AFP pro HCC po chirurgické resekci nádoru nebo po lokální terapii je však stále nejistá.
MikroRNA (miRNA), 17- až 25-nukleotidové nekódující RNA, jsou u rakoviny často dysregulovány a objevují se jako nový neinvazivní biomarker pro screening rakoviny, diagnostiku, sledování účinnosti terapie a předpovídání prognózy. MiRNA jsou stabilně exprimovány v séru jako jejich odolnost vůči endogenní RNáze a snadno se skladují s vysokou stabilitou. Několik studií ukázalo abnormální expresi lidských sérových miRNA u mnoha rakovin, jako je rakovina jater, kolorektální rakovina a rakovina slinivky břišní. Senzitivita miRNA jako diagnostického biomarkeru HCC může být až 80 %. Použití miRNA polí může generovat miRNA podpisy a zlepšit senzitivitu a specificitu biomarkeru pro diagnostiku nádoru a predikci prognózy.
V této studii vědci vytvoří platformu miRNA jako biomarkery pro diagnostické nebo prognostické nástroje HCC. Výzkumníci budou také porovnávat úroveň exprese miRNA před a po léčbě v séru a korelovat expresi miRNA mezi sérem a nádorovou tkání.
Přehled studie
Postavení
Detailní popis
Pozadí:
Hepatocelulární karcinom (HCC) je šestou nejčastější rakovinou a třetí úmrtností na rakovinu na světě (Kamangar et al., 2006). Léčba hepatocelulárního karcinomu zahrnuje chirurgickou resekci, lokální terapie, jako je radiofrekvenční ablace (RFA) a perkutánní injekce etanolu (PEI), transarteriální chemoembolizace (TACE) a nejlepší podpůrná péče (Bruix a Sherman, 2005). U pacientů, kteří nejsou kandidáty na chirurgickou intervenci nebo lokální terapii, se doporučuje sorafenib (Cheng et al., 2009; Llovet et al., 2008). I po úspěšné léčbě, jako je chirurgická resekce, však většina pacientů trpěla recidivou nebo progresí nádoru (Bruix a Sherman, 2005; Llovet et al., 2002; Llovet et al., 2008). Přestože bylo vyvinuto několik stagingových systémů HCC, jako je stagingový systém Okuda, AJCC systém, BCLC stagingový systém a skórovací systém CLIP, prognostická hodnota každého stagingového systému není konzistentní (Chen et al., 2009), a použitelnost každého stagingového systému závisí na zvolené metodice léčby.
Vzhledem k nedostatku systémů klinického stagingu v predikci výsledku HCC je velmi zajímavé hledat sérové biomarkery k predikci prognózy HCC (Fujiyama et al., 2002; Marrero a Lok, 2004). Mezi nimi je nejvíce dobře prostudovaný alfa-fetoprotein (AFP). AFP se používá jako marker v diagnostice HCC (Bruix et al., 2001) a jako prognostický faktor pro nově diagnostikovaný HCC (1998). AFP je také cenný jako prediktivní faktor pro odpověď na chemoterapii (Chan et al., 2009). Použitelnost AFP pro HCC po chirurgické resekci nádoru nebo po lokální terapii je však stále nejistá. U pacientů s HCC a normální sérovou hladinou AFP nelze APF použít jako prognostický faktor. Další biomarkery, jako je glipekan-3, jsou stále ve vývoji (Marrero a Lok, 2004).
MikroRNA (miRNA), 17- až 25-nukleotidové nekódující RNA, jsou u rakoviny často dysregulovány a objevují se jako nový neinvazivní biomarker pro screening rakoviny, diagnostiku, sledování účinnosti terapie a predikci prognózy (Wu et al., 2007). MiRNA jsou stabilně exprimovány v séru jako jejich odolnost vůči endogenní RNáze a snadno se skladují s vysokou stabilitou (Aref et al., 2014). Několik studií prokázalo abnormální expresi lidských sérových miRNA u mnoha rakovin, jako je rakovina jater, kolorektální rakovina a rakovina slinivky břišní (Huang et al., 2010; Liu et al., 2012; Qi et al., 2013). Senzitivita miRNA jako diagnostického biomarkeru HCC by mohla být až 80 % (Yin et al., 2014). Použití miRNA čipů může generovat miRNA podpisy a dále zlepšit senzitivitu a specificitu biomarkeru pro diagnostiku nádoru a predikci prognózy.
Účel zkoušky:
- Identifikovat sérovou miRNA jako diagnostický nebo predikční biomarker pro HCC.
- Korelovat s hladinou exprese miRNA mezi sérem, nádorovou tkání HCC a přilehlou nenádorovou tkání.
- Sbírat a uchovávat deoxyribonukleovou kyselinu (DNA) pro budoucí průzkumný výzkum genů/genetických variací, které mohou ovlivnit odpověď na léčbu u HCC.
- Sbírat a uchovávat přebytečnou plazmu a nádorové tkáně pro budoucí průzkumný výzkum proteinů/genů/genetických variací, které mohou ovlivnit odpověď na léčbu u HCC.
Metody: Design studie Toto je prospektivní studie. Všichni pacienti musí poskytnout informovaný souhlas. Celkem bude zařazeno 200 pacientů ve věku > 20 let, kterým byla diagnostikována HCC v National Taiwan University a Far-Eastern Memorial Hospital. Diagnostická kritéria HCC jsou podle kritérií AASLD z roku 2011 (Bruix et al., 2011). Stručně řečeno, uzliny větší než 1 cm nalezené při ultrazvukovém screeningu cirhotických jater by měly být dále vyšetřeny jednou dynamickou studií, buď CT nebo kontrastní MRI. Pokud je vzhled typický pro HCC (tj. hypervaskulární s vymýváním v portální/venózní fázi) v jedné technice, léze by byla diagnostikována jako HCC. Pokud nálezy nejsou charakteristické nebo vaskulární profil není mezi technikami náhodný, léze by měla být biopsie. Pro klinický staging budou u těchto pacientů aplikovány dva stagingové systémy, včetně BCLC stagingu a klinického TNM systému. Klinicko-patologická data budou sbírána prospektivně. Zaznamenají se klinické výsledky, včetně toxicity léčby, léčebné odpovědi definované podle revidovaných kritérií RECIST, progrese onemocnění a celkové přežití.
Odběr vzorků a séra Vzorky krve budou odebírány ve 3 časových bodech před léčbou, 7 dní po léčbě a jeden měsíc po léčbě. Vzorky krve budou při odběru separovány v plazmě a mononukleárních buňkách a před dalším použitím budou skladovány při -20°. Mezi léčebné metody patří operace, TACE, RFA, PEI nebo antiangiogenní činidlo včetně použití sorafenibu.
Odběr tkání Budou získány tkáně HCC (T) a odpovídající nenádorové jaterní tkáně (NT). Chirurgické vzorky budou ihned po operaci zmraženy a skladovány při -140°C.
Virový marker povrchový antigen hepatitidy B (HBsAg) a protilátka proti HCV (anti-HCV) budou u každého pacienta kontrolovány pomocí komerčně dostupných souprav pro imunosorbční testy s enzymatickými vazbami. U HBsAg pozitivního pacienta budou HBeAg a anti-HBe měřeny enzymatickým imunosorbčním testem. Hladina HBV DNA v séru bude měřena vlastní polymerázovou řetězovou reakcí TaqMan v reálném čase (PCR). U anti-HCV pozitivních pacientů bude HCV RNA měřena interní TaqMan PCR v reálném čase
Izolace RNA, reverzní transkripce a pole miRNA Vzorky krve odebrané do zkumavek obsahujících EDTA a centrifugované při 4 000 x g po dobu 15 minut pro separaci plazmy. Plazma přenesená do čisté mikrocentrifugační zkumavky a znovu odstřeďována při 12 000 x g po dobu 5 minut a 200 ul plazmy bude přeneseno do nové mikrocentrifugační zkumavky a skladováno při -80 _C až do analýzy. RNA bude izolována pomocí High Pure miRNA Isolation Kit (Roche, Mannheim, Německo) podle pokynů výrobce a poté uložena při -80 °C až do experimentu.
Reverzní transkripční reakce Pro analýzy miRNA pomocí kvantitativní polymerázové řetězové reakce v reálném čase (qRT-PCR) bude 100 ng celkové RNA reverzně transkribováno pomocí TaqMan miRNA Reverse Transscription Kit (Applied Biosystems, Carlsbad, CA, USA). Všechny reakce budou provedeny tak, jak je uvedeno v protokolu výrobce.
TaqMan pole TLDA s nízkou hustotou budou analyzovány pro identifikaci profilu odlišně exprimovaných miRNA mezi třemi sadami vzorků (před ošetřením, 7 dní po ošetření, jeden měsíc po ošetření). Stručně řečeno, celková RNA bude reverzně transkribována do cDNA pomocí TaqMan MicroRNA Reverse Transscription Kit a Megaplex RT set pool A a B verze 3.0 (Applied Biosystems). RT produkt bude vložen do TaqMan Array Human MicroRNA A+B Cards Set v3.0 (Applied Biosystems), což umožní současnou kvantifikaci 667 lidských miRNA. TaqMan microRNA testy a analýzy budou provedeny na přístroji ABI 7900HT (Applied Biosystems). Všechny reakce byly provedeny podle standardních protokolů výrobců. Kvantitativní data exprese miRNA byla získána a normalizována pomocí softwaru ABI 7900HT SDS (Applied Biosystems).
Kvantitativní PCR v reálném čase (qRT-PCR) Exprese miRNA detekovaná pomocí čipů TaqMan s nízkou hustotou bude také studována v nádorech HCC a/nebo jejich párové normální jaterní tkáni pomocí analýzy qRT-PCR, jak bylo popsáno dříve (Lee et al. ., 2011). RNU6B snRNA byla použita jako endogenní kontrola. Každý mikroRNA test byl proveden trojmo. Exprese mikroRNA byla uváděna jako delta Ct hodnota (Ct hodnota RNU6B - Ct hodnota cílové mikroRNA). Výzkumníci definovali skupiny nádorů nebo buněk s vysokou nebo nízkou expresí na základě střední hodnoty exprese každé mikroRNA.
Statistická analýza Celkové přežití a přežití bez progrese bude hodnoceno pomocí Kaplan-Meierovy metody. Jakmile je proteomickou studií identifikován specifický protein, pacienti budou rozděleni na skupinu s vysokou expresí a skupinu s nízkou expresí podle střední hladiny plazmatické exprese miRNA všech pacientů; rozdíl přežití mezi skupinou s vysokou expresí a skupinou s nízkou expresí bude analyzován pomocí log-rank testu. p-hodnota menší než 0,05 bude považována za významnou.
Typ studie
Zápis (Očekávaný)
Kontakty a umístění
Studijní kontakt
- Jméno: Ja-Der Liang, Master
- Telefonní číslo: 886-2-23123456
- E-mail: jdliangntu@ntu.edu.tw
Studijní místa
-
-
-
Taipei, Tchaj-wan, 100
- National Taiwn University Hospital
-
Kontakt:
- Ja-Der Liang, Master
- Telefonní číslo: 886-2-23123456
- E-mail: jdliangntu@ntu.edu.tw
-
-
Kritéria účasti
Kritéria způsobilosti
Věk způsobilý ke studiu
Přijímá zdravé dobrovolníky
Pohlaví způsobilá ke studiu
Metoda odběru vzorků
Studijní populace
Popis
Kritéria pro zařazení:
- HCC, diagnostikovaný podle kritérií zobrazení AASLD nebo histopatologicky.
Kritéria vyloučení:
- Nula
Studijní plán
Jak je studie koncipována?
Detaily designu
Kohorty a intervence
Skupina / kohorta |
---|
Předběžná úprava
Všichni zapsaní pacienti s HCC.
|
Doléčování jeden týden
Všichni zapsaní pacienti s HCC.
|
Po léčbě jeden měsíc
Všichni zapsaní pacienti s HCC.
|
Co je měření studie?
Primární výstupní opatření
Měření výsledku |
Časové okno |
---|---|
Přežití pacienta
Časové okno: 5 let
|
5 let
|
Spolupracovníci a vyšetřovatelé
Spolupracovníci
Vyšetřovatelé
- Vrchní vyšetřovatel: Ja-Der Liang, Master, National Taiwan University Hospital
Termíny studijních záznamů
Hlavní termíny studia
Začátek studia
Primární dokončení (Očekávaný)
Dokončení studie (Očekávaný)
Termíny zápisu do studia
První předloženo
První předloženo, které splnilo kritéria kontroly kvality
První zveřejněno (Odhad)
Aktualizace studijních záznamů
Poslední zveřejněná aktualizace (Odhad)
Odeslaná poslední aktualizace, která splnila kritéria kontroly kvality
Naposledy ověřeno
Více informací
Termíny související s touto studií
Další relevantní podmínky MeSH
Další identifikační čísla studie
- 201504020RINC
Tyto informace byly beze změn načteny přímo z webu clinicaltrials.gov. Máte-li jakékoli požadavky na změnu, odstranění nebo aktualizaci podrobností studie, kontaktujte prosím register@clinicaltrials.gov. Jakmile bude změna implementována na clinicaltrials.gov, bude automaticky aktualizována i na našem webu .