Omega-3 Plus Nízkodávkové denní suplementace aspirinu v nechirurgické terapii k léčbě agresivní parodontitidy

Metodika studie je podle CONSORT-STATEMENT 2010 pro randomizované kontrolované klinické studie.

Design studie Studie je navržena jako prospektivní, intervenční, paralelní, zaslepená, randomizovaná, kontrolovaná klinická studie superiority.

Zdroj dat Populace této studie bude vybrána mezi pacienty odeslanými do Vědeckého a technologického institutu – ICT – São José dos Campos, College of Dentistry. Pacienti vyplní dotazník o zdravé anamnéze, aby se ujistili, že mají lékařskou kvalifikaci pro účast v této studii. Na základě výpočtu výkonu pro tuto studii bude zahrnuta populace 38 pacientů. Vezmeme-li v úvahu α 5% a 10% chybu typu β (90% síla) k detekci rozdílu alespoň 1 mm v redukci hloubky sondování kapes ≥ 5 mm mezi skupinami, pro standardní odchylku 0,94 od předchozí studie hodnotící různé antimikrobiálních látek v léčbě GAgP (Xajigeorgiou et al., 2006), bude potřeba 19 pacientů v každé skupině.

Klinické parametry Všechny klinické parametry budou hodnoceny jedním zaslepeným, vyškoleným a kalibrovaným vyšetřujícím (CFA) před parodontální terapií (základní hodnota) a 3 a 6 měsíců po použití manuální sondy. Měření bude provedeno na šesti místech na zub (meziobukální, bukální, disto-bukální, distolingvální, lingvální a meziolingvální) u všech zubů, kromě třetích molárů.

Budou hodnoceny následující klinické parametry: 1) index plaku v plných ústech (FMPI); 2) Krvácení při sondování (BoP); 3) Hloubka sondy (PD): vzdálenost od dna sulku/kapsy k okraji dásně; 4) Gingivální recese (GM): vzdálenost od volného okraje gingivy ke spojení cement-smalt (CEJ); 5) Úroveň klinického připojení (CAL): vzdálenost od spodní části sulku/kapsy k CEJ. CEJ bude identifikována pečlivou sondou na cervikální oblasti.

Kalibrace a randomizace Na začátku bude vybráno celkem deset pacientů s GAgP. Určený vyšetřující lékař (CFA) změří CAL a PD u všech pacientů dvakrát během 24 hodin, s intervalem ≥ 1 hodina mezi vyšetřeními. Poté budou míry podrobeny vnitrotřídnímu korelačnímu testu a zkoušející bude posouzen jako kalibrovaný, pokud dosáhne 90% shody.

Pacienti budou rozděleni do dvou skupin podle počítačem vytvořeného seznamu. Alokaci provede zkoušející (NC), který se přímo nepodílel na vyšetřovacích nebo léčebných postupech.

Léčebné protokoly

Všichni pacienti budou léčeni parodontální terapií prostřednictvím jednostupňového, celoústního, ultrazvukového debridementu (FMUD). Během jediného sezení pacienti dostanou lokální anestezii a parodontální debridement ultrazvukovým zařízením (Cavitron - Dentsply EUA) a subgingiválními hroty (UI25KSF10S, Hu-Friedy). Všechna nemocná místa budou instrumentována v tomto jediném sezení. Debridement bude provádět jediný zkušený a vyškolený parodontolog (NA), odlišný od vyšetřujícího lékaře. Bezprostředně před mechanickou terapií budou pacienti zařazeni do jednoho ze dvou léčebných protokolů:

Testovaná skupina (n = 19): FMUD + 3 g omega-3 polynenasycených mastných kyselin a suplementace 100 mg aspirinu denně po dobu 180 dnů; Kontrolní skupina (n = 19): FMUD + placebo pilulky.

Všichni pacienti začnou užívat pilulky bezprostředně před sezením FMUD.

Mikrobiologické hodnocení Subgingivální mikrobiologické vzorky budou odebrány na začátku léčby, 3 a 6 měsíců po terapii. Místo bude izolováno sterilním bavlněným válečkem a supragingivální biofilm bude opatrně odstraněn pomocí parodontálních kyret a sterilní papír bude vložen do periodontální kapsy na 30 s (Hartoth et al., 1999). Vzorek bude uložen ve sterilních mikrozkumavkách. Vzorky budou poté lyofilizovány a odeslány na Oddělení parodontologie na Floridské univerzitě, kde budou vzorky analyzovány.

Vyhodnocení cytokinů Pro analýzu imunologických změn bude na začátku, 3 a 6 měsíců po léčbě, odebrána crevicular gingival fluid (CGF). Každé místo bude izolováno sterilním bavlněným válečkem a supragingivální biofilm bude odstraněn. Poté bude CGF odebrán pomocí proužků Periopaper (Periopaper, Oraflow, Plainview, NY, USA), vložených do kapsy po dobu 15 sekund. Bude měřen objem odebrané tekutiny (Periotron 8000, Oraflow). Proužky Periopaper budou uchovávány ve sterilní zkumavce obsahující 300 μl fosfátového fyziologického roztoku (PBS) s 5 % Tween-20 a skladovány v mrazáku při -20 °C až do multiplexního testu. V CGF bude měřena hladina následujících cytokinů: interferon (IFN) -γ, interleukiny (IL) -10, -1β, -4, -6, -8, tumor nekrotizující faktor (TNF) -α, zánětlivé makrofágy protein 1α (MIP1α), 1α monocytární chemotaktický protein (MCP-1α). 10-plexní vysoce citlivá souprava (Millipore Corporation, Billerica, MA, USA) bude použita podle pokynů výrobce a analyzována pomocí platformy MAGpixTM (MiraiBio, Alameda, CA, USA). Vzorky budou analyzovány jednotlivě (každá kapsa samostatně) a koncentrace budou vypočteny pomocí standardní 5-parametrové křivky v programu Xponet (Millipore Corporation). Koncentrace každého markeru bude uvedena v pg/ml. Všechny analýzy koncentrací cytokinů budou provedeny dvojmo.

Statistická analýza Budou provedeny dvě analýzy: Per Protocol a Intention-to-treat (Moher, 2010; Gupta, 2011; Day, 2008). Pro každý z nich bude vypočítán průměr a standardní odchylka v každém z parametrů. Plná ústa PI, GI, PD, CAL a GR budou podrobeny testu Shapiro-Wilk, aby se vyhodnotila distribuce těchto dat, a poté podrobeny testu rozptylu pro srovnání v rámci skupiny i uvnitř skupiny. Kromě toho bude před a po terapii vyhodnocen počet kapes ≥ 5 mm, frekvence uzavírání těchto kapes, průměrné snížení PS a zisk CAL těchto kapes provedením vnitroskupinových a meziskupinových analýz.

Koncentrace každého cytokinu bude analyzována testem rozptylu pro intra a meziskupinové srovnání.