Efecto de la rapamicina sobre biomarcadores relacionados con la tolerancia en receptores estables de trasplante hepático

Objetivo: Comprobar en receptores de trasplante hepático identificados como no tolerantes si la suspensión de anticalcineurínicos seguida de tratamiento durante 6 meses con sirolimus modifica el patrón de expresión del conjunto de genes asociados a la tolerancia

Antecedentes: Sirolimus es un fármaco inmunosupresor que se utiliza para contrarrestar la autoinmunidad y prevenir el rechazo agudo del injerto en humanos y tiene notables propiedades promotoras de la tolerancia en modelos animales de trasplante.

Hipótesis/Objetivos específicos: Nuestra hipótesis es que sirolimus promueve vías tolerogénicas en el trasplante de hígado humano.

1. Comprobar en receptores de trasplante hepático identificados como no tolerantes si la suspensión de los anticalcineurínicos seguida de un tratamiento de 6 meses con sirolimus modifica el patrón de expresión del conjunto de genes asociados a la tolerancia
2. Probar en receptores de trasplante hepático identificados como no tolerantes si la conversión de inhibidores de calcineurina a sirolimus modifica las respuestas inmunitarias de tipo memoria.
3. Evaluar en receptores de trasplante hepático identificados como no tolerantes si la conversión de la monoterapia con inhibidores de la calcineurina a sirolimus afecta la frecuencia, el fenotipo y la función de subconjuntos de linfocitos de sangre periférica potencialmente inmunorreguladores
4. Probar en receptores de trasplante de hígado identificados como no tolerantes si la conversión de inhibidores de calcineurina a sirolimus promueve cambios epigenéticos relacionados con la inmunorregulación y el desarrollo/progresión del cáncer

Métodos propuestos:Experimentos de expresión génica: cuantificaremos la expresión en sangre periférica de un conjunto de genes previamente identificados como predictivos de la retirada exitosa de la inmunosupresión en receptores estables de trasplante de hígado. Se obtendrán muestras de sangre antes y 6 meses después de la conversión al tratamiento con sirolimus. La medición de los niveles de expresión génica se realizará empleando PCR TaqMan en tiempo real. La clasificación de los pacientes en las categorías de tolerantes/no tolerantes se realizará utilizando umbrales y algoritmos predictivos desarrollados en nuestro laboratorio.

Estudios de inmunofenotipado: cuantificaremos en sangre periférica varios subconjuntos de células mononucleares implicadas en vías inmunorreguladoras antes y 6 meses después de la conversión a tratamiento con sirolimus. Las mediciones se realizarán empleando citometría de flujo.

Ensayos funcionales: aislaremos células T reguladoras (Treg) CD4+CD25+ de sangre periférica mediante Sorter antes y 6 meses después de la conversión al tratamiento con sirolimus. Se realizarán experimentos de dilución en serie en un ensayo no específico de antígeno para evaluar las propiedades supresoras relativas de las Treg. Los ensayos IFNg ELISpot se realizarán en paralelo empleando células mononucleares de sangre periférica como células respondedoras para medir las respuestas aloinmunes específicas del donante.

Medición de la metilación del ADN: el ADN del receptor se extraerá de muestras de sangre periférica antes y después del tratamiento con sirolimus durante 6 meses y se usará para realizar estudios de metilación del genoma completo empleando la plataforma de matriz ILLUMINA.

Resultados esperados: Esperamos definir con precisión los efectos de sirolimus en las vías tolerogénicas previamente identificadas en humanos y evaluar la capacidad de este fármaco para mejorar la proporción de receptores hepáticos que se someten a un destete inmunosupresor exitoso.