Effekt av Rapamycin på toleransrelaterade biomarkörer på stabila levertransplantationsmottagare

Syfte: Att testa hos levertransplanterade mottagare som identifierats som icke-toleranta om utsättning av kalcineurinhämmare följt av 6 månaders behandling med sirolimus ändrar uttrycksmönstret för uppsättningen gener som är associerade med tolerans

Bakgrund: Sirolimus är ett immunsuppressivt läkemedel som används för att motverka autoimmunitet och för att förhindra akut transplantatavstötning hos människor och har anmärkningsvärda toleransfrämjande egenskaper i djurtransplantationsmodeller.

Hypotes/specifika mål: Vi antar att sirolimus främjar tolerogena vägar vid mänsklig levertransplantation.

1. Att testa hos levertransplanterade mottagare som identifierats som icke-toleranta om utsättande av kalcineurinhämmare följt av 6 månaders behandling med sirolimus ändrar uttrycksmönstret för uppsättningen gener som är associerade med tolerans
2. För att testa hos levertransplantationsmottagare som identifierats som icke-toleranta om omvandling från kalcineurinhämmare till sirolimus ändrar immunsvar av minnestyp.
3. Att testa hos levertransplanterade mottagare som identifierats som icke-toleranta om konvertering från monoterapi med kalcineurinhämmare till sirolimus påverkar frekvensen, fenotypen och funktionen hos potentiellt immunreglerande perifera blodlymfocytundergrupper
4. Att testa hos levertransplanterade mottagare som identifierats som icke-toleranta om konvertering från kalcineurinhämmare till sirolimus främjar epigenetiska förändringar relaterade till immunreglering och cancerutveckling/progression

Föreslagna metoder: Genexpressionsexperiment: vi kommer att kvantifiera uttrycket i perifert blod av en uppsättning gener som tidigare identifierats som förutsägande för framgångsrik immunsuppressionsabstinens hos stabila levertransplantationsmottagare. Blodprov kommer att tas före och 6 månader efter övergång till sirolimusbehandling. Mätning av genuttrycksnivåer kommer att utföras med hjälp av TaqMan PCR i realtid. Klassificering av patienter i de toleranta/icke-toleranta kategorierna kommer att utföras med hjälp av trösklar och prediktiva algoritmer utvecklade i vårt laboratorium.

Immunfenotypningsstudier: vi kommer att kvantifiera i perifert blod olika mononukleära cellundergrupper som är inblandade i immunregulatoriska vägar före och 6 månader efter konvertering till sirolimusbehandling. Mätningar kommer att utföras med flödescytometri.

Funktionella analyser: vi kommer att isolera CD4+CD25+ regulatoriska T-celler (Treg) från perifert blod genom Sorter före och 6 månader efter konvertering till sirolimusbehandling. Seriella utspädningsexperiment kommer att utföras i en antigen icke-specifik analys för att bedöma de relativa undertryckande egenskaperna hos Tregs. IFNg ELISpot-analyser kommer att utföras parallellt med användning av mononukleära celler från perifert blod som svarsceller för att mäta givarspecifika alloimmuna svar.

Mätning av DNA-metylering: mottagar-DNA kommer att extraheras från perifera blodprover före och efter 6-månaders sirolimusbehandling och används för att utföra studier av helgenom-metylering med hjälp av ILLUMINA array-plattformen.

Förväntade resultat: Vi förväntar oss att exakt definiera effekterna av sirolimus på tidigare identifierade tolerogena vägar hos människor och att bedöma förmågan hos detta läkemedel att öka andelen levermottagare som genomgår framgångsrik immunsuppressionsavvänjning.