Effekt av Rapamycin på toleranserelaterte biomarkører på stabile levertransplantasjonsmottakere

Mål: Å teste hos levertransplanterte mottakere identifisert som ikke-tolerante om seponering av kalsineurinhemmere etterfulgt av 6 måneders behandling med sirolimus endrer uttrykksmønsteret til settet av gener assosiert med toleranse

Bakgrunn: Sirolimus er et immunsuppressivt legemiddel som brukes for å motvirke autoimmunitet og for å forhindre akutt transplantatavstøtning hos mennesker og har bemerkelsesverdige toleransefremmende egenskaper i dyretransplantasjonsmodeller.

Hypotese/spesifikke mål: Vi antar at sirolimus fremmer tolerogene veier ved human levertransplantasjon.

1. For å teste hos levertransplantasjonsmottakere identifisert som ikke-tolerante om seponering av kalsineurinhemmere etterfulgt av 6 måneders behandling med sirolimus modifiserer uttrykksmønsteret til settet med gener assosiert med toleranse
2. For å teste hos levertransplanterte mottakere identifisert som ikke-tolerante om konvertering fra kalsineurinhemmere til sirolimus modifiserer immunresponser av hukommelsestype.
3. For å teste hos levertransplanterte pasienter identifisert som ikke-tolerante om konvertering fra kalsineurinhemmer monoterapi til sirolimus påvirker frekvensen, fenotypen og funksjonen til potensielt immunregulerende perifere blodlymfocytter.
4. For å teste hos levertransplanterte mottakere identifisert som ikke-tolerante om konvertering fra kalsineurinhemmere til sirolimus fremmer epigenetiske endringer relatert til immunregulering og kreftutvikling/progresjon

Foreslåtte metoder: Genekspresjonseksperimenter: vi vil kvantifisere ekspresjonen i perifert blod av et sett med gener som tidligere er identifisert som prediktive for vellykket immunsuppresjonsabstinens hos stabile levertransplantasjonsmottakere. Blodprøver vil bli tatt før og 6 måneder etter overgang til sirolimusbehandling. Måling av genekspresjonsnivåer vil bli utført ved bruk av sanntids TaqMan PCR. Klassifisering av pasienter i tolerante/ikke-tolerante kategorier vil bli utført ved å bruke terskler og prediktive algoritmer utviklet i vårt laboratorium.

Immunfenotypingsstudier: vi vil kvantifisere i perifert blod ulike mononukleære celleundergrupper som er involvert i immunregulatoriske veier før og 6 måneder etter konvertering til sirolimusbehandling. Målinger vil bli utført ved bruk av flowcytometri.

Funksjonelle analyser: vi vil isolere CD4+CD25+ regulatoriske T-celler (Treg) fra perifert blod ved Sorter før og 6 måneder etter konvertering til sirolimusbehandling. Serielle fortynningseksperimenter vil bli utført i en antigen ikke-spesifikk analyse for å vurdere de relative undertrykkende egenskapene til Tregs. IFNg ELISpot-analyser vil bli utført parallelt ved å bruke mononukleære celler fra perifert blod som responderceller for å måle donorspesifikke alloimmune responser.

Måling av DNA-metylering: mottaker-DNA vil bli ekstrahert fra perifere blodprøver før og etter 6-måneders sirolimus-behandling og brukes til å utføre hele-genom-metyleringsstudier ved bruk av ILLUMINA array-plattformen.

Forventede resultater: Vi forventer å nøyaktig definere effekten av sirolimus på tidligere identifiserte tolerogene veier hos mennesker og å vurdere kapasiteten til dette stoffet til å øke andelen levermottakere som gjennomgår vellykket immunsuppresjonsavvenning.