Effekt af Rapamycin på tolerancerelaterede biomarkører på stabile levertransplantationsmodtagere

Formål: At teste hos levertransplanterede modtagere, der er identificeret som ikke-tolerante, om seponering af calcineurinhæmmere efterfulgt af 6-måneders behandling med sirolimus modificerer ekspressionsmønsteret af sættet af gener forbundet med tolerance

Baggrund: Sirolimus er et immunsuppressivt lægemiddel, der bruges til at modvirke autoimmunitet og til at forhindre akut transplantatafstødning hos mennesker og har bemærkelsesværdige tolerancefremmende egenskaber i dyretransplantationsmodeller.

Hypotese/specifikke mål: Vi antager, at sirolimus fremmer tolerogene veje ved human levertransplantation.

1. At teste hos levertransplantationsmodtagere, der er identificeret som ikke-tolerante, om seponering af calcineurinhæmmere efterfulgt af 6-måneders behandling med sirolimus ændrer ekspressionsmønsteret af sættet af gener forbundet med tolerance
2. At teste hos levertransplanterede modtagere, der er identificeret som ikke-tolerante, om konvertering fra calcineurinhæmmere til sirolimus ændrer hukommelsestypens immunrespons.
3. At teste hos levertransplanterede modtagere identificeret som ikke-tolerante, om konvertering fra calcineurinhæmmer monoterapi til sirolimus påvirker frekvensen, fænotypen og funktionen af ​​potentielt immunregulerende perifere blodlymfocytundergrupper
4. At teste hos levertransplanterede modtagere identificeret som ikke-tolerante, om konvertering fra calcineurinhæmmere til sirolimus fremmer epigenetiske ændringer relateret til immunregulering og kræftudvikling/progression

Foreslåede metoder: Genekspressionseksperimenter: vi vil kvantificere ekspressionen i perifert blod af et sæt gener, der tidligere er identificeret som forudsigende for vellykket immunsuppressionsabstinens hos stabile levertransplantationsmodtagere. Blodprøver vil blive taget før og 6 måneder efter konvertering til sirolimusbehandling. Måling af genekspressionsniveauer vil blive udført ved anvendelse af TaqMan PCR i realtid. Klassificering af patienter i de tolerante/ikke-tolerante kategorier vil blive udført ved hjælp af tærskler og prædiktive algoritmer udviklet i vores laboratorium.

Immunfænotypeundersøgelser: vi vil kvantificere forskellige mononukleære celleundergrupper i perifert blod, der er impliceret i immunregulerende veje før og 6 måneder efter konvertering til sirolimusbehandling. Målinger vil blive udført ved hjælp af flowcytometri.

Funktionelle analyser: vi vil isolere CD4+CD25+ regulatoriske T-celler (Treg) fra perifert blod ved sortering før og 6 måneder efter konvertering til sirolimusbehandling. Serielle fortyndingseksperimenter vil blive udført i et antigen ikke-specifikt assay for at vurdere de relative undertrykkende egenskaber af Tregs. IFNg ELISpot-assays vil blive udført parallelt med anvendelse af mononukleære celler fra perifert blod som responderceller for at måle donorspecifikke alloimmune responser.

Måling af DNA-methylering: modtager-DNA vil blive ekstraheret fra perifere blodprøver før og efter 6-måneders sirolimus-behandling og bruges til at udføre hele-genom-methyleringsundersøgelser ved hjælp af ILLUMINA-array-platformen.

Forventede resultater: Vi forventer præcist at definere virkningerne af sirolimus på tidligere identificerede tolerogene veje hos mennesker og at vurdere dette lægemiddels kapacitet til at øge andelen af ​​levermodtagere, der gennemgår vellykket immunsuppressionsfravænning.