Effet de la vitamine D comme traitement d'appoint chez les patients atteints de tuberculose à évolution pulmonaire (VitaminD)

Nous allons inclure sur 60 patients diagnostiqués TBP confirmé avec et sans diabète sucré, par frottis positif et culture pour Mycobacterium tuberculosis sensible aux médicaments de première intention (rifampicine, isoniazide, pyrazinamide et éthambutol), qui seront regroupés comme suit : 1 ) les patients qui reçoivent de la vitamine D (VD) (n = 30) et 2) les patients qui ne reçoivent pas de vitamine D (NVD) (n = 30) en plus du traitement médicamenteux de la tuberculose médicamenteuse de première ligne. Des échantillons de sang doivent être prélevés chaque mois jusqu'à la fin du traitement. Le groupe de participants VD recevra un traitement avec une dose quotidienne de vitamine D 200 unités internationales (UI) pendant les deux premiers mois de traitement. Tous les patients qui participent doivent donner leur consentement écrit.

Tout d'abord, nous allons séparer les cellules mononucléaires du sang périphérique avec le réactif Ficoll. Ensuite, pour la détermination des cytokines intracellulaires en conditions basales et après la stimulation antigénique avec M.tuberculosis, la technique de cytométrie en flux sera utilisée et les résultats seront analysés dans un cytomètre en flux. Nous allons infecter des cellules avec la souche M. tuberculosis à une multiplicité d'infection (MOI) de 1 et 10, afin de déterminer la phagocytose et l'activité bactéricide du sang total périphérique des patients, en utilisant des unités formant colonies (UFC) et la coloration. L'extraction de l'ARN sera effectuée selon le fournisseur du kit. La réaction d'amplification va s'effectuer avec Applied Biosystems et Sybr Green Master Mix. Nous allons utiliser le test t de Student non apparié, pour les paramètres de distribution normale.