Metodi anestetici e profilo di espressione genica (GeSTA)

Utilizzando una tabella di randomizzazione generata dal computer, i pazienti ospedalizzati sottoposti a artroplastica d'anca elettiva saranno assegnati in modo casuale consecutivamente a ricevere anestesia generale (gruppo GA), regionale (gruppo RA) o integrata (gruppo IA). Saranno esclusi dallo studio i pazienti con controindicazione all'anestesia spinale o al posizionamento del catetere lombare, nonché i pazienti obesi, con ipertensione arteriosa non controllata da farmaci orali, gravi malattie polmonari, cardiovascolari, renali, epatiche, cerebrovascolari o psichiatriche.

I campioni di sangue intero (10 mL) saranno ottenuti da tutti i pazienti arruolati in tre momenti: la mattina presto il giorno dell'intervento (T0), dopo l'intervento (T1) e il terzo giorno (T2) dopo l'intervento. I campioni saranno raccolti in tubi di eparina e le PBMC saranno isolate e utilizzate per l'analisi dell'espressione genica. Il siero ottenuto dopo la centrifugazione del sangue sarà utilizzato per analisi ematologiche e biochimiche come glutammato ossalacetato transaminasi (GOT), glutammato-piruvato transaminasi (GPT), bilirubina (BIL), creatinina (CREA), creatina fosfochinasi (CPK), emoglobina (HB) .

La dimensione del campione è stata determinata secondo Lee-Whitmore* e G*Power Ftest per ANOVA Effetti fissi, omnibus, unidirezionale (Lee ML, Whitmore GA. StatMed. 2002;21: 3543-3570). Assumendo una distribuzione di Poisson per il valore atteso dell'espressione genica falsa positiva dei 9 geni scelti e fissando a 1 il massimo valore atteso per i falsi positivi E(R0) e considerando tutti gli 84 geni come non espressi differenzialmente (G0=G= 9), la probabilità α per ogni singolo gene tra i geni G che non sono espressi differenzialmente è data da α=E(R_0 )/G=1/9=0.011, con la correzione di Bonferroni diventa α_c=(0.011)/3=0.037. Questo è l'errore di tipo I di un'espressione falsa positiva. Inoltre, considerando come endpoint primario l'aumento di piega dell'espressione genica, assumendo una distribuzione log-normale con deviazione standard di 0,7 tipica dell'espressione genica medio-alta e quindi conservativa per la determinazione della dimensione del campione e imponendo una differenza minima su scala logaritmica tra i 3 gruppi di 0,5 con una potenza di almeno 0,8 e un errore di tipo I corretto secondo Bonferroni α=0,05/3=0,0167 (che è più piccolo e quindi conservativo, rispetto al precedente α_c) la dimensione minima del campione (G*POWER)^ per ciascun gruppo è di 30 pazienti, considerando un 10% di drop-out, la dimensione del campione scelta è stata di 33 pazienti per gruppo che porta a una dimensione totale del campione di 99 pazienti.

Test ^F - ANOVA: effetti fissi, omnibus, unidirezionale Analisi: a priori: calcolo della dimensione del campione richiesta Input: dimensione dell'effetto f = 0,7 α err prob = 0,0167 Potenza (1-β err prob) = 0,8 Numero di gruppi = 3 Output: parametro di non centralità λ = 14,7000000 Critico F = 4,7803455 Numeratore df = 2 Denominatore df = 27 Dimensione totale del campione = 30 Potenza effettiva = 0,8009945

La distribuzione normale delle variabili continue sarà valutata mediante il test di Kolmogorov-Smirnov. Il test Chi-quadro sarà utilizzato per valutare le variabili categoriali. Le differenze tra i gruppi saranno valutate mediante test ANOVA parametrici seguiti dal Tukey test. Verrà eseguita un'analisi di regressione multipla per valutare l'influenza dei parametri biochimici sull'espressione genica in risposta agli anestetici considerando fattori confondenti quali età, sesso, indice di massa corporea, fumo. I valori di p<0.05 saranno considerati statisticamente significativi. Tutti i test saranno eseguiti utilizzando software (SPSS, Chicago, USA).