ドナー特異的 B 細胞の同定と抗体媒介性拒絶反応

感作され、パネル反応性抗体 (PRA) が 20% を超える患者は、待機リスト (33%) で不均衡に増加するクラスターを構成し、感作されていない患者よりも移植を受けるまでに長く待たなければなりません。 待機リストの 36 か月までに、10% が移植を受ける前に死亡しました。 移植を受ける人は脱感作が必要です。 現在の脱感作プロトコルには、B 細胞を除去するための抗 CD20 モノクローナル抗体、形質細胞および血漿交換を除去するためのプロテアソーム阻害剤、および/または形成済みのドナー特異的抗体 (DSA) を除去するための静脈内免疫グロブリン (IVIG) が含まれます。 これらのプロトコルの成功は、単一抗原ビーズ (SAB) luminex 技術を使用して測定できます。 これらの脱感作プロトコルは、平均蛍光強度 (MFI) を大幅に減少させることが示されています。 通常、脱感作プロトコルは、HLA クラス II 分子を認識する抗体よりも HLA クラス I 分子を認識する抗体を除去するのにより効果的です。 残念なことに、プレコンディショニングの後でも、感作された患者は、移植前にドナー特異的抗体を持たない患者よりも抗体介在性拒絶反応 (ABMR) を発症する可能性が高くなります。 現在、DSA の血清レベルは脱感作後に測定されますが、ドナー特異的 B 細胞 (DSB) は測定されません。 B細胞および/または形質細胞が治療後に残る可能性があります。 ドナー特異的 B 細胞は、移植とそれに伴う抗原への暴露により、再刺激されて抗体を産生し、さらに抗体を産生する形質細胞に発達する可能性があります。 したがって、脱感作が成功したかどうかを判断するためのより良い方法は、上記のように SAB 技術を使用して DSA レベルを調べ、DSB を調べて、これらのセルが脱感作プロトコルによって適切に除去されたかどうかを判断することです。

特定の目的 1 仮説: 血清 DSA が十分にクリアランスされているが、依然として DSB の集団がかなりある患者は、ABMR を発症する可能性が高くなります。

特定の目的 1 では、研究者は最先端の技術を利用して、DSB を HLA クラス I テトラマーで染色することにより、感作患者に存在する抗 HLA 抗体、特にドナー特異的抗体のレベルを観察します。 このメソッドにより、DSA のソースである DSB の列挙と特徴付けが可能になります。 研究者は、脱感作の前後、および移植後のDSBおよびドナー特異的形質細胞（DSPC）の数を決定します。 さらに、研究者は、移植前と移植後の DSB の表現型と活性化状態を調べます。 HLA クラス I テトラマーは、特定の対立遺伝子の MHC クラス I 分子であり、ペプチド結合溝内のペプチドでリフォールディングされ、C 末端テールでビオチン化され、フィコエリトリン (PE) などのフルオロフォアに結合したストレプトアビジンを使用して四量体化されます。 同様に、HLA クラス II テトラマーは、MHC クラス II 対立遺伝子でできています。 B細胞は、それが産生する可溶性抗体と正確な特異性を持つ膜結合抗体を保持します。 結合は抗体の特異性によってのみ決定されるため、四量体は、その特定の HLA クラス I 対立遺伝子に対する抗体を表面に持つ B 細胞にのみ結合します。 同時に、細胞を他のマーカーで染色して、DSB の活性化状態と表現型を決定します。 このアッセイは、フローサイトメトリーを使用して行われます。 さらに、研究者は、すべての時点で Elisa によって BAFF および APRIL サイトカイン レベルを測定します。 これらのサイトカインは、B 細胞の発達に密接に関連しています。 ある種の脱感作後にBAFFが上昇し、新しいB細胞の発生を促進する可能性があることを示唆するデータがあります。

特定の目的 1 仮説: 血清 DSA が十分にクリアランスされているが、依然として DSB の集団がかなりある患者は、ABMR を発症する可能性が高くなります。

特定の目的 1 では、研究者は最先端の技術を利用して、DSB を HLA クラス I テトラマーで染色することにより、感作患者に存在する抗 HLA 抗体、特にドナー特異的抗体のレベルを観察します。 このメソッドにより、DSA のソースである DSB の列挙と特徴付けが可能になります。 研究者は、脱感作の前後、および移植後のDSBおよびドナー特異的形質細胞（DSPC）の数を決定します。 さらに、研究者は、移植前と移植後の DSB の表現型と活性化状態を調べます。 HLA クラス I テトラマーは、特定の対立遺伝子の MHC クラス I 分子であり、ペプチド結合溝内のペプチドでリフォールディングされ、C 末端テールでビオチン化され、フィコエリトリン (PE) などのフルオロフォアに結合したストレプトアビジンを使用して四量体化されます。 同様に、HLA クラス II テトラマーは、MHC クラス II 対立遺伝子でできています。 B細胞は、それが産生する可溶性抗体と正確な特異性を持つ膜結合抗体を保持します。 結合は抗体の特異性によってのみ決定されるため、四量体は、その特定の HLA クラス I 対立遺伝子に対する抗体を表面に持つ B 細胞にのみ結合します。 同時に、細胞を他のマーカーで染色して、DSB の活性化状態と表現型を決定します。 このアッセイは、フローサイトメトリーを使用して行われます。 さらに、すべての時点で Elisa によって BAFF および APRIL サイトカイン レベルを測定します。 これらのサイトカインは、B 細胞の発達に密接に関連しています。 ある種の脱感作後にBAFFが上昇し、新しいB細胞の発生を促進する可能性があることを示唆するデータがあります。

治験責任医師は、同意が得られたら被験者から採血を行い、このサンプルを使用して、以前に SAS 抗 HLA 抗体分析によって特定されたものと同じタイプの HLA クラス I 四量体を認識する抗体を産生する B 細胞のベースラインを確立します。 患者が移植を受ける直前と直後に、SAB 抗 HLA 抗体分析、四量体分析、および BAFF/APRIL Elisa を繰り返します。 分析は、移植後 6 週間から 2 か月の間にも実施されます。

特定の目的 2 仮説: 慢性拒絶の間、脱感作によく反応し、脱感作後に耐性を維持できる患者は、残存 DSB が少なくなります。

特定の目的 2 では、研究者は同じ技術を利用して、患者が ABMR による慢性拒絶反応を経験したときに、DSA と DSB を定量化し、特徴付けます。 この場合、患者は移植時に DSA を持っていなかった可能性がありますが、移植後に de novo DSA (dnDSA) を発症し、拒絶反応を引き起こしました。 または、患者は DSA を患っており、脱感作に成功し、一定期間耐性を維持した後、耐性を失うか、dnDSA を発症した可能性があります。 タイムラインは特定の目的 1 に似ています - 研究者は次の時点でサンプルを採取します: ABMR の診断時、脱感作後 1 週間、脱感作後 2 ～ 3 か月でリバウンドを探します。

新しい被験者の登録に加えて、研究者は健康な正常な個人も登録し、対照として機能させます。