공여자 특이적 B 세포 및 항체 매개 거부반응의 확인

PRA(패널 반응성 항체)가 > 20%인 감작된 환자는 대기자 명단(33%)에서 불균형하고 증가하는 클러스터를 구성하며 감작되지 않은 환자보다 이식을 받기 위해 더 오래 기다려야 합니다. 대기자 명단에서 36개월까지 10%가 이식을 받기 전에 사망했습니다. 이식을 받는 사람은 탈감작이 필요합니다. 현재 탈감작화 프로토콜에는 B 세포를 제거하기 위한 항-CD20 단클론 항체, 형질 세포 및 혈장 교환을 제거하기 위한 프로테아좀 억제제 및/또는 미리 형성된 기증자 특이적 항체(DSA)를 제거하기 위한 정맥 면역글로불린(IVIG)이 포함됩니다. 이러한 프로토콜의 성공 여부는 단일 항원 비드(SAB) 루미넥스 기술을 사용하여 측정할 수 있습니다. 이러한 둔감화 프로토콜은 평균 형광 강도(MFI)를 크게 감소시키는 것으로 나타났습니다. 탈감작 프로토콜은 일반적으로 HLA 클래스 II 분자를 인식하는 항체보다 HLA 클래스 I 분자를 인식하는 항체를 제거하는 데 더 효과적입니다. 불행하게도 사전 조정 후에도 감작된 환자는 이식 전에 기증자 특정 항체가 없는 환자보다 항체 매개 거부반응(ABMR)이 발생할 가능성이 더 높습니다. 현재, DSA의 혈청 수준은 탈감작 후에 측정되지만 기증자 특정 B 세포(DSB)는 측정되지 않습니다. 치료 후에도 B 세포 및/또는 형질 세포가 남아 있을 수 있습니다. 기증자 특이적 B 세포는 이식 및 그에 수반되는 항원에 대한 노출 시 재자극되어 항체를 생산하고 또한 항체를 생산하는 형질 세포로 발달할 수 있습니다. 따라서 둔감화가 성공했는지 여부를 결정하는 잠재적으로 더 나은 방법은 위에서 설명한 SAB 기술을 사용하여 DSA 수준을 살펴보고 DSB를 살펴보고 이러한 셀이 둔감화 프로토콜에 의해 적절하게 제거되었는지 확인하는 것입니다.

특정 목표 1 가설: 혈청 DSA의 적절한 청소율을 가지고 있지만 여전히 상당한 DSB 집단을 가지고 있는 환자는 ABMR이 발생할 가능성이 더 높습니다.

특정 목표 1에서 조사관은 HLA 클래스 I 테트라머로 DSB를 염색하여 감작된 환자에게 존재하는 항-HLA 항체, 특히 기증자 특정 항체의 수준을 관찰하기 위해 최첨단 기술을 활용할 것입니다. 이 방법을 사용하면 DSA 소스인 DSB를 열거하고 특성화할 수 있습니다. 조사관은 탈감작화 전과 후 및 이식 후 이후에 DSB 및 기증자 특이적 형질 세포(DSPC)의 수를 결정할 것입니다. 또한 조사관은 이식 전과 이식 후 DSB의 표현형 및 활성화 상태를 살펴볼 것입니다. HLA 클래스 I 테트라머는 펩타이드 결합 홈에서 펩타이드로 리폴딩되고, C 말단 꼬리에서 비오티닐화되고, 피코에리트린(PE)과 같은 형광단에 결합된 스트렙타비딘을 사용하여 테트라머화되는 특정 대립유전자의 MHC 클래스 I 분자입니다. 마찬가지로 HLA 클래스 II 테트라머는 MHC 클래스 II 대립유전자로 구성됩니다. B 세포는 또한 생산하는 용해성 항체의 정확한 특이성을 갖는 막 결합 항체를 보유합니다. 결합은 항체의 특이성에 의해서만 결정되기 때문에 테트라머는 표면에 특정 HLA 클래스 I 대립유전자에 대한 항체가 있는 B 세포에만 결합합니다. 동시에 세포는 DSB의 활성화 상태와 표현형을 결정하기 위해 다른 마커로 염색됩니다. 이 분석은 유동 세포 계측법을 사용하여 수행됩니다. 또한 조사관은 모든 시점에서 Elisa의 BAFF 및 APRIL 사이토카인 수준을 측정합니다. 이러한 사이토카인은 B 세포 발달과 밀접한 관련이 있습니다. 새로운 B 세포 발달을 향상시킬 수 있는 일부 형태의 탈감작 후에 BAFF가 상승한다는 데이터가 있습니다.

특정 목표 1 가설: 혈청 DSA의 적절한 청소율을 가지고 있지만 여전히 상당한 DSB 집단을 가지고 있는 환자는 ABMR이 발생할 가능성이 더 높습니다.

특정 목표 1에서 조사관은 HLA 클래스 I 테트라머로 DSB를 염색하여 감작된 환자에게 존재하는 항-HLA 항체, 특히 기증자 특정 항체의 수준을 관찰하기 위해 최첨단 기술을 활용할 것입니다. 이 방법을 사용하면 DSA 소스인 DSB를 열거하고 특성화할 수 있습니다. 조사관은 탈감작화 전과 후 및 이식 후 이후에 DSB 및 기증자 특이적 형질 세포(DSPC)의 수를 결정할 것입니다. 또한 조사관은 이식 전과 이식 후 DSB의 표현형 및 활성화 상태를 살펴볼 것입니다. HLA 클래스 I 테트라머는 펩타이드 결합 홈에서 펩타이드로 리폴딩되고, C 말단 꼬리에서 비오티닐화되고, 피코에리트린(PE)과 같은 형광단에 결합된 스트렙타비딘을 사용하여 테트라머화되는 특정 대립유전자의 MHC 클래스 I 분자입니다. 마찬가지로 HLA 클래스 II 테트라머는 MHC 클래스 II 대립유전자로 구성됩니다. B 세포는 또한 생산하는 용해성 항체의 정확한 특이성을 갖는 막 결합 항체를 보유합니다. 결합은 항체의 특이성에 의해서만 결정되기 때문에 테트라머는 표면에 특정 HLA 클래스 I 대립유전자에 대한 항체가 있는 B 세포에만 결합합니다. 동시에 세포는 DSB의 활성화 상태와 표현형을 결정하기 위해 다른 마커로 염색됩니다. 이 분석은 유동 세포 계측법을 사용하여 수행됩니다. 또한 모든 시점에서 Elisa의 BAFF 및 APRIL 사이토카인 수준을 측정합니다. 이러한 사이토카인은 B 세포 발달과 밀접한 관련이 있습니다. 새로운 B 세포 발달을 향상시킬 수 있는 일부 형태의 탈감작 후에 BAFF가 상승한다는 데이터가 있습니다.

조사관은 일단 동의를 얻은 피험자로부터 혈액을 채취하고 이 샘플을 활용하여 이전에 SAS 항-HLA 항체 분석으로 식별된 것과 동일한 유형의 HLA 클래스 I 테트라머를 인식하는 항체를 생성하는 B 세포의 기준선을 설정합니다. 환자가 이식을 받기 직전과 직후에 SAB 항-HLA 항체 분석, tetramer 분석 및 BAFF/APRIL Elisas가 반복됩니다. 분석은 또한 이식 후 6주 내지 2개월 사이에 수행될 것이다.

특정 목표 2 가설: 만성 거부반응 동안 탈감작에 잘 반응하고 탈감작 후에 내성을 유지할 수 있는 환자는 잔여 DSB가 더 적을 것입니다.

특정 목표 2에서 조사관은 환자가 ABMR로 인한 만성 거부반응을 경험할 때 동일한 기술을 사용하여 DSA 및 DSB를 정량화하고 특성화합니다. 이 경우 환자는 이식 당시 DSA가 없었으나 이식 후 de novo DSA(dnDSA)가 발생하여 거부 반응을 일으켰을 수 있습니다. 또는 환자가 DSA를 가졌고 성공적으로 탈감작되었으며 일정 기간 동안 내성을 유지한 다음 내성을 잃거나 dnDSA가 발생했을 수 있습니다. 타임라인은 특정 목표 1과 유사할 것입니다. 조사관은 다음 시점에서 샘플을 채취합니다: ABMR 진단 시, 둔감화 1주 후, 반동을 찾기 위해 둔감화 후 2~3개월.

새로운 피험자 등록에 추가하여 조사관은 대조군으로 사용할 건강한 정상인도 등록할 것입니다.