体外受精治療における生児出生率に関して、卵子と精子のより短​​い曝露と標準的な孵卵を比較した研究

1. バックグラウンド

   体外受精（IVF）技術は現在、不妊カップルの治療に一般的に使用されています。 体外受精のより良い結果を得るには、体外受精技術を最適化して胚の品質を高めることが重要です。 IVF 手順では、卵母細胞と精子は通常一晩共培養されますが、この長期培養では、卵母細胞と受精卵が最適以下の培養条件にさらされ、精子によって生成される活性酸素種 (ROS) が増加する可能性があります[1]。 高レベルの活性酸素種 (ROS) は胚の品質に悪影響を及ぼし、透明帯の硬化を引き起こし、胚の着床能力を損なう可能性があります [2-4]。 研究によると、哺乳動物の卵母細胞の受精は、配偶子が出会ってから 20 分後に成功することが示されています [5]。 精子は 15 分以内に卵丘細胞を通過することができ、卵母細胞が 1 時間以内に多数の精子に曝露されると 80% が受精することができます [1]。 精子への長時間の曝露による卵母細胞への悪影響を回避する試みとして、短時間の共培養授精プロトコルが開発されました。 これは、卵母細胞と精子の長期間の同時培養は必要ではない可能性があり、有害である可能性さえあることを示唆しています。 一部の報告では、1〜6時間の精子と卵母細胞の接触時間が体外受精の結果を改善すると示唆しています[1,2,6,7]が、他の研究では、短い授精時間ではそのような利点は報告されていません[8,9,10]。

   最近発表されたメタ分析では [11] 配偶子の短期間の共培養が臨床妊娠の有意に高い率と関連していたことが示されています (RR: 1.84、95% CI: 1.24-2.73)。 妊娠継続中 (RR: 1.73、95%CI: 1.27-2.33) より高い着床率 (RR: 1.80、95% CI: 1.43-2.26) 通常の授精よりも。 しかし、正常な受精率 (RR: 0.98、95% CI: 0.93-1.02)、 良質の胚 (RR: 1.24、95% CI: 1.0-1.53​​) および多精子 (RR: 0.84、95% CI: 0.7-1.01) 標準授精と比べて大きな差はありませんでした。 別のコクランのメタ分析[12]では、733人の女性を対象とした8つのRCTが含まれており、同様の結果が得られました。 しかし、報告されているのは臨床妊娠率と継続妊娠率のみであり、標準的な授精よりも短期間の共培養グループで有意に高かった。 流産率については、167 人の女性を含む 1 つの試験で 6 件の流産がありました。 この質の低い証拠は、短期間の共培養と標準授精の間で流産の確率に有意差がないことを示唆しました（OR 1.98、95% CI 0.35～11.09、P = 0.44）。 また、含まれた研究では生児出産は報告されておらず、短時間の共孵卵が標準的な夜間授精プロトコールと比較して生児出生率を向上させるかどうかは不明である。

   割り当ての隠蔽や盲検化の欠如など、これらの研究の品質に固有の欠点により、利用可能な証拠の品質が制限されます。 これらの問題をより適切に評価するには、標準的な夜間授精プロトコールと比較して、短時間の共培養が高い出生率と低い流産率に寄与するかどうかを評価する、より適切に設計されたRCTが必要です。

2. 目的:

   この無作為化二重盲検対照研究の目的は、体外受精治療を受けている女性における標準的な孵卵と比較して、卵子を精子に短時間曝露した場合の臨床的有効性（特に出生率）を比較することである。

3. トライアルデザイン:

体外受精治療を受けている合計 280 人の不妊女性が、密封された封筒に入れたコンピューターで生成された乱数によって、次の 2 つのグループのいずれかに無作為に割り付けられます。

卵子の精子への曝露時間が短いグループ: 卵子は精子に 2 時間曝露されます。 標準培養グループ: 卵子は精子に 20 時間曝露されます。

被験者の治療

卵巣刺激を含む体外受精のすべての技術は、現地のプロトコルに従って行われます。

4.1 卵巣刺激と体外受精

すべての女性は、ロングアゴニストまたはアンタゴニストプロトコルを使用した卵巣刺激による体外受精治療を開始しました。 長期プロトコルでは、下垂体脱感作のためにゴナドトロピン放出ホルモン類似体（GnRHa）が投与され、月経周期の2～3日目に経膣超音波検査と血清E2測定が行われます。 ヒト更年期性ゴナドトロピン（hMG）または組換えFSHは、同センターの標準手術手順に従って、胞状卵胞数、女性の年齢、過去の卵巣反応に基づいて1日あたり150～300 IUから開始される。 卵巣反応は、ホルモンモニタリングの有無にかかわらず、連続経膣スキャンによってモニタリングされました。 さらなる投与量の調整は、担当臨床医の裁量による卵巣の反応に基づいて行われます。 アンタゴニストプロトコルの場合、アンタゴニスト (セトリチド0.25mg) 毎日）卵巣刺激の6日目からhcgプライミングの日まで投与されます。

3 つの先行卵胞が 18 mm 以上の場合、卵母細胞の最終成熟を引き起こすために、hCG 10,000 IU またはオビドレル 250 mg が投与されます。 採卵は約 36 時間後に手配されます。

4.2 授精手順

すべての精液サンプルは、従来のスイムアップ手順によって調製されました。 採卵後 2 時間で、成熟した各卵母細胞に約 50,000 ～ 100,000 個の運動精子が授精されます。

4.3.代入とマスキング

OPU当日、患者は、密封された封筒に入ったコンピューター生成のランダム化リストに従って、検査技師によって卵母細胞を採取された後、より短い培養グループまたは対照グループにランダム化されます。 研究全体が完了するまで、患者と臨床医の両方は割り当てられたグループを知らされなかった。

対照群 対照群に割り当てられた女性は、すべての卵子が 20 時間精子に曝露され、裸化後 1 日目 (20 時間) に受精がチェックされます。

介入アーム 介入アームに割り当てられた卵母細胞の場合、すべての卵母細胞を精子に 2 時間曝露し、1.5 ml の平衡培地を含む 2 つの器官皿で穏やかに洗浄し、その後、平衡化した新鮮な培地の対応する微小液滴に移します。 周囲の卵丘細胞は卵巣から除去されずに保持されます。

4.4 受精および胚の評価 両方のグループの卵母細胞を脱着し、2 つの前核および 2 つの極体の存在をチェックして受精を確認します。 他のすべての結果（つまり、受精なし、前核が 1 つ、多精子症、変性）も記録されました。

胚の形態は培養中毎日評価されます。 胚は以下の基準に従ってスコア付けされます。 簡単に言うと、胚は次のように分類されます。 グレード A、細胞断片化なし。グレード B、断片化 20% 未満。グレード C、20% ～ 50% の断片化。グレード D、>50% の断片化。 胚ごとの割球の数も記録されました。 グレード A および B の胚は「良質の胚」を構成しました。

移植はチーム臨床医によって行われ、経腹超音波ガイド下で標準プロトコルに従って最大 2 個の胚が交換されます。 黄体期のサポートは医師の裁量で行われます。

4.5 フォローアップ戦略:

両腕への胚移植から2週間後に妊娠検査を行います。 新鮮胚移植後 2 週間で妊娠検査結果が陽性となったすべての女性は、さらに 5 週間後に経膣超音波検査を受け、妊娠の継続を示す胎児の心臓を伴う胎嚢の存在を確認します。

流産や子宮外妊娠などの初期の妊娠喪失を含むすべての妊娠結果に関するデータが収集されます。

結果の収集に関して一貫性を達成するために、各センターの女性ごとに標準化された症例報告書（CRF）が作成されます。 これらの CRF には、受けた治療、妊娠転帰、妊娠合併症、分娩方法、出産転帰に関する詳細が含まれます。

統計

5.1 分析計画: ベースライン データ収集の一部として収集された人口統計学的要因と臨床的特徴は、カテゴリ変数のカウント (パーセンテージ)、正規分布連続変数の平均 (標準偏差 [SD])、または中央値 (四分位 [IQR]他の連続変数の場合は範囲​​全体）。

参加者の転帰は、プロトコールまたは受けた治療（治療意図）からの逸脱に関係なく、参加者が割り当てられたグループで分析されます。比較統計分析では、主要アウトカムの相対リスク (RR) (95% CI) (すべての二分法二次アウトカムの 99% CI)、正規分布した連続二次アウトカムの平均差 (99% CI)、または中央値の計算が必要になります。偏った連続変数の差 (99% CI)。

すべての分析では、ランダム化のバランスをとることによって導入された治療群間の相関関係を考慮して最小化係数が調整されます（これにより、治療効果は別として、治療群間の結果が同様になるように強制されます）。

調整されたリスク比は、対数二項回帰モデルを使用して推定されます。二項モデルが収束しない場合は、ロバストな分散推定量を備えた対数ポアソン回帰モデルを使用して推定されます。 正規分布した結果には線形回帰が使用され、偏った連続変数には分位点回帰が使用されます。

事前に指定されたサブグループ分析には、卵割と胚盤胞期の移植が含まれます。

6. サンプルサイズの推定:

2010 年から 2012 年までの当センターの平均出生率は、転院 1 件あたり 30% でした。 最近発表されたメタ分析[11]によると、配偶子の短期間の共培養は、妊娠継続率の有意に高いと関連していた(RR: 1.73、95%CI: 1.27-2.33)。 通常の授精よりも。

治療グループでの出生率 = 50% (70% 増加) と仮定します。検出力が 90%、両側 5% レベルの統計的有意性がある場合、各部門で 124 人の女性を採用する必要があります。 追跡調査のための10％の損失を説明するために、各グループで140人の被験者、または研究全体で280人の被験者を募集します。

7. 安全性の評価

最近発表されたメタ解析の結果[11,12]では、配偶子の短時間の培養では、標準的な授精と比較して、正常な受精率、良質な胚、多精子率に大きな差がないことが示されました。 したがって、この研究では安全性に大きな懸念はないはずです。

8. ソース データ/ドキュメントへの直接アクセス:

治験関連のモニタリング、監査、治験審査委員会の審査、規制検査が許可されています。

9. 品質管理と品質保証

患者は、生殖補助医療の管理に十分な経験を持つリストに記載された研究者によって管理されます。 治験の実施を監督する治験運営委員会が設置される。

10. 倫理

すべての患者様から書面による同意が得られます。 英語と中国語の患者情報シートと同意書が同封されます。 倫理承認は上海第一母子保健病院治験審査委員会から得られる予定。

11. データの処理と記録の保管

すべてのデータは 3 年間保存されます。 指定された研究看護師は、データのコーディング、モニタリング、検証を含むデータ管理を担当します。

12. 融資と保険

この研究は、MerckSerono China Research Fund for 不妊専門家から資金提供を受けます。

13. 出版方針

この研究の結果は、査読済みの科学雑誌への掲載を検討するために提出されます。

14. サプリメント

この研究はヘルシンキ宣言および適正臨床基準（ICH-GCP）に従って実施されます。