체외 수정 치료의 정상 출산율에 대한 정자에 대한 난모세포의 짧은 노출과 표준 배양을 비교하는 연구

1. 배경

   체외 수정(IVF) 기술은 이제 불임 부부의 치료에 일반적으로 사용됩니다. IVF의 더 나은 결과를 얻으려면 IVF 기술을 최적화하여 배아의 품질을 향상시키는 것이 중요합니다. IVF 절차에서 난모세포와 정자는 일상적으로 하룻밤 동안 함께 배양되며, 이로 인해 난모세포와 접합체가 이 장기 배양에서 정자에 의해 생성된 반응성 산소종(ROS)이 증가된 차선의 배양 조건에 노출될 수 있습니다[1]. 높은 수준의 활성산소종(ROS)은 배아의 질에 악영향을 미쳐 투명대를 경화시키고 배아의 착상 능력을 손상시킬 수 있습니다[2-4]. 연구에 따르면 엄마 난모세포의 성공적인 수정은 배우자가 만난 지 20분 후에 발생합니다[5]. 정자는 15분 이내에 난구 세포를 통과할 수 있으며, 난모세포의 80%는 1시간 이내에 다수의 정자에 노출되었을 때 수정될 수 있습니다[1]. 정자에 대한 장기간 노출로 인해 난모세포에 미칠 수 있는 해로운 영향을 피하기 위한 시도로 간단한 공동 배양 수정 프로토콜이 개발되었습니다. 이는 난모세포와 정자의 장기간 공동 배양이 필요하지 않을 수 있으며 심지어 해로울 수도 있음을 의미합니다. 일부 보고서에서는 1-6시간의 정자-난모세포 노출 시간이 IVF 결과를 향상시킨다고 제안합니다[1,2,6,7]. 그러나 다른 연구에서는 짧은 수정 시간으로 그러한 이점이 없다고 보고합니다[8,9,10] .

   최근 발표된 메타 분석에 따르면[11] 배우자의 짧은 공동 배양은 상당히 높은 임상 임신율과 관련이 있었습니다(RR: 1.84, 95% CI: 1.24-2.73). 진행 중인 임신(RR: 1.73, 95%CI: 1.27-2.33) 및 더 높은 이식률(RR: 1.80, 95% CI: 1.43-2.26) 표준 수정보다. 그러나 정상적인 수정률(RR: 0.98, 95% CI: 0.93-1.02), 양질의 배아(RR: 1.24, 95% CI: 1.0-1.53) 및 다정자(RR: 0.84, 95% CI: 0.7-1.01) 표준 수정에 비해 크게 다르지 않았습니다. 또 다른 Cochrane 메타 분석[12]에는 733명의 여성을 대상으로 한 8개의 RCT가 포함되었으며 유사한 결과를 얻었습니다. 그러나 그것은 임상적 임신율만을 보고했으며, 표준 수정보다 짧은 공동 배양 그룹에서 유의하게 더 높은 진행 중인 임신율을 보고했습니다. 유산율은 1건의 임상시험에서 167명의 여성을 포함한 6건의 유산이 있었습니다. 이 낮은 질의 근거는 짧은 공동 배양과 표준 수정 간에 유산 확률에 유의한 차이가 없음을 시사했습니다(OR 1.98, 95% CI 0.35~11.09; P = 0.44). 그리고 포함된 연구에서 정상 출산이 보고되지 않았기 때문에 짧은 공동 배양이 표준 야간 수정 프로토콜에 비해 평생 출생률을 향상시키는지 여부가 불분명합니다.

   할당 은폐 및 눈가림 없음과 같은 이러한 연구의 품질에 내재된 단점은 사용 가능한 증거의 품질을 제한합니다. 이러한 문제를 더 잘 평가하려면 짧은 공동 배양이 표준 야간 수정 프로토콜과 비교하여 더 높은 출생률과 더 낮은 유산률에 기여하는지 여부를 평가하기 위해 더 잘 설계된 RCT가 필요합니다.

2. 목표:

   본 무작위, 이중 맹검 대조 연구의 목적은 IVF 치료를 받는 여성의 표준 배양과 비교하여 정자에 대한 난모세포의 짧은 노출의 임상적 효과(특히 정상 출생률)를 비교하는 것입니다.

3. 시험 디자인:

IVF 치료를 받는 총 280명의 불임 여성이 봉인된 봉투에 넣은 컴퓨터 생성 난수에 따라 다음 두 그룹 중 하나로 무작위 배정됩니다.

난모세포의 정자 노출 시간 단축 그룹: 난모세포는 2시간 동안 정자에 노출됨 표준 배양 그룹: 난모세포는 20시간 동안 정자에 노출됨

피험자의 치료

난소 자극을 포함한 IVF의 모든 기술은 현지 프로토콜을 따릅니다.

4.1 난소 자극 및 IVF

모든 여성은 긴 효능제 또는 길항제 프로토콜을 사용하여 난소 자극으로 IVF 치료를 시작했습니다. 긴 프로토콜의 경우 뇌하수체 탈감작을 위해 GnRHa(고나도트로핀 방출 호르몬 유사체)를 투여하고 월경 주기 2-3일에 경질 초음파 검사 및 혈청 E2 측정을 받게 됩니다. 인간 갱년기 성선 자극 호르몬(hMG) 또는 재조합 FSH는 센터의 표준 운영 절차에 따라 전정부 난포 수, 여성의 나이 및 이전 난소 반응을 기준으로 하루 150-300 IU에서 시작됩니다. 난소 반응은 호르몬 모니터링 유무에 관계없이 일련의 경질 스캐닝으로 모니터링되었습니다. 추가 용량 조정은 담당 임상의의 재량에 따라 난소 반응을 기반으로 합니다. 길항제 프로토콜의 경우 길항제(세트리타이드0.25mg 매일) 난소 자극 6일째부터 hcg 프라이밍 당일까지 투여한다.

3개의 주요 난포가 ≥18 mm인 경우 hCG 10,000 IU 또는 ovidrel 250 mg을 투여하여 난모세포의 최종 성숙을 유발합니다. 난모세포 검색은 약 36시간 후에 이루어집니다.

4.2 수정 절차

모든 정액 샘플은 기존의 swim-up 절차로 준비되었습니다. 난자 채취 후 2시간이 지나면 성숙된 각 난자에 약 50,000~100,000개의 운동성 정자가 수정됩니다.

4.3. 할당 및 마스킹

OPU 당일, 밀봉된 봉투에 담긴 컴퓨터 생성 무작위 목록에 따라 실험실 기술자가 occyte를 선택한 후 환자를 더 짧은 배양 그룹 또는 대조군으로 무작위 배정합니다. 전체 연구가 완료될 때까지 환자와 임상의는 할당된 그룹에 대해 눈이 멀었습니다.

대조군 대조군에 할당된 여성은 모든 난자를 20시간 동안 정자에 노출시키고, 적출 후 1일차(20시간)에 수정 여부를 확인합니다.

중재군 중재군에 할당된 경우 모든 난모세포는 2시간 동안 정자에 노출되고 1.5ml의 평형 배지가 들어 있는 두 개의 장기 접시를 통해 부드럽게 세척된 다음 평형화된 신선한 배지의 해당 미세 방울로 옮겨집니다. 주변 난구 세포는 난구에서 제거되지 않고 유지됩니다.

4.4 수정 및 배아 평가 난모세포의 두 그룹 모두 수정을 확인하기 위해 2개의 전핵과 ​​2개의 극체의 존재에 대해 장식되고 확인됩니다. 다른 모든 결과(즉, 수정 없음, 전핵 1개, 다정자증, 변성)도 기록되었습니다.

배아 형태는 배양의 매일 평가됩니다. 배아는 다음 기준에 따라 채점됩니다. 간단히 말해서, 배아는 다음과 같이 분류됩니다: 등급 A, 세포 분열 없음; 등급 B, <20% 단편화; 등급 C, 20% 내지 50% 단편화; 및 등급 D, >50% 단편화. 배아 당 할구의 수 또한 기록되었습니다. 등급 A 및 B 배아는 "양질의 배아"를 구성했습니다.

이식은 경복부 초음파 유도하에 표준 프로토콜에 따라 교체되는 최대 2개의 배아와 함께 팀 임상의에 의해 수행됩니다. 황체기 지원은 의사의 재량에 따라 제공됩니다.

4.5 후속 전략:

양 팔에 배아 이식 후 2주 후에 임신 검사를 실시합니다. 신선한 배아를 이식한 지 2주 후 임신 테스트에서 양성 반응을 보인 모든 여성은 추가 5주 후에 질식 초음파 검사를 받아 태아 심장이 임신 진행 중임을 나타내는 임신낭의 존재를 확인합니다.

유산 또는 자궁외 임신과 같은 조기 유산을 포함한 모든 임신 결과에 대한 데이터가 수집됩니다.

결과 수집과 관련하여 일관성을 유지하기 위해 각 센터의 각 여성에 대해 표준화된 사례 보고서 양식(CRF)을 작성합니다. 이러한 CRF에는 받은 치료, 임신 결과, 임신 합병증, 분만 방식 및 출생 결과에 대한 세부 정보가 포함됩니다.

통계

5.1 분석 계획: 기본 데이터 수집의 일부로 수집된 인구통계학적 요인 및 임상 특성은 범주형 변수에 대한 개수(백분율), 정규 분포된 연속 변수에 대한 평균(표준 편차[SD]) 또는 중앙값(사분위수[IQR] 또는 전체 범위) 다른 연속 변수의 경우.

참가자의 결과는 프로토콜 또는 받은 치료(치료 의도)의 편차와 관계없이 할당된 그룹에서 분석됩니다. 비교 통계 분석에는 1차 결과(모든 이분법 2차 결과에 대한 99% CI)에 대한 상대 위험(RR)(95% CI), 정규 분포된 연속 2차 결과에 대한 평균 차이(99% CI) 또는 중앙값 계산이 수반됩니다. 왜곡된 연속 변수에 대한 차이(99% CI).

모든 분석은 무작위배정의 균형을 유지함으로써 도입된 치료군 간의 상관관계를 설명하기 위해 최소화 요인에 대해 조정됩니다(치료군 간의 결과가 치료 효과와 별개로 유사하도록 강제함).

조정된 위험 비율은 로그 이항 회귀 모델을 사용하거나 이항 모델이 수렴하지 못하는 경우 강력한 분산 추정기와 함께 로그 포아송 회귀 모델을 사용하여 추정됩니다. 선형 회귀는 일반적으로 분포된 결과에 사용되며 왜곡된 연속 변수에 대한 분위수 회귀에 사용됩니다.

미리 지정된 하위 그룹 분석에는 분열 대 배반포 단계 이동이 포함됩니다.

6. 샘플 크기 추정:

2010년부터 2012년까지 우리 센터의 평균 출생률은 환승당 30%였습니다. 최근 발표된 메타 분석[11]에 따르면 배우자의 짧은 공동 배양은 상당히 높은 임신 진행률과 관련이 있었습니다(RR: 1.73, 95%CI: 1.27-2.33). 표준 수정보다.

치료군에서의 정상 출산을 가정 =50%(70% 증가); 90% 검정력과 양면 5% 수준의 통계적 유의성을 사용하여 각 부문에서 124명의 여성을 모집해야 합니다. 후속 조치에 대한 10% 손실을 설명하기 위해 각 그룹에서 140명의 피험자를 모집하거나 전체 연구에서 280명의 피험자를 모집합니다.

7. 안전성 평가

최근에 발표된 메타 분석[11,12]의 결과는 정상적인 수정, 양질의 배아 및 다정자의 비율이 표준 수정과 비교하여 생식세포의 짧은 시간 부화에서 유의미한 차이가 없음을 보여주었습니다. 따라서, 이 연구에서 주요 안전성 문제는 없어야 합니다.

8. 소스 데이터/문서에 직접 액세스:

시험 관련 모니터링, 감사, IRB 검토 및 규제 검사가 허용됩니다.

9. 품질 관리 및 품질 보증

보조 생식 치료 관리에 충분한 경험이 있는 목록에 있는 조사관이 환자를 관리합니다. 재판 진행을 감독할 재판 운영 위원회가 구성될 것입니다.

10. 윤리

모든 환자로부터 서면 동의를 얻습니다. 영어와 중국어로 된 환자 정보 시트와 동의서가 동봉되어 있습니다. 윤리적 승인은 상하이 제1 산부인과 및 유아 건강 병원 병원의 기관 검토 위원회에서 얻을 것입니다.

11. 데이터 처리 및 기록 보관

모든 데이터는 3년간 보관됩니다. 지정된 연구 간호사가 데이터 코딩, 모니터링 및 확인을 포함한 데이터 관리를 담당합니다.

12. 금융 및 보험

이 연구는 불임 전문가를 위한 MerckSerono 중국 연구 기금에서 자금을 지원합니다.

13. 출판 정책

이 연구 결과는 동료 평가 과학 저널에 게재하기 위해 제출될 예정입니다.

14. 보충제

이 연구는 헬싱키 선언 및 우수임상관리기준(ICH-GCP)에 따라 수행될 것입니다.