증상이 있는 바이러스 감염률을 줄이기 위해 면역 세포의 세포 스트레스 조절

모집 및 모집 과정 기준: 피험자는 SingHealth Investigational Medicine Unit(IMU) 건강한 지원자 데이터베이스 및 모집 포스터에서 모집됩니다. 피험자는 도착 시 읽을 수 있도록 참가자 정보 및 사전 동의서 사본을 받게 됩니다. 연구에 대한 설명회는 연구자가 진행합니다. 그 후 피험자는 정보에 입각한 동의를 얻고 연구에 대한 질문을 자유롭게 할 수 있는 개인실로 안내됩니다. 피험자는 연구 참여 결정을 서두르지 않을 것입니다. 그들은 가족들에게 연구 참여에 대해 이야기하도록 격려받을 것입니다. 가족 구성원과 논의한 후까지 참여 결정을 (편견 없이) 연기할 수 있습니다.

스크리닝 방문 및 절차: 피험자는 SingHealth Investigational Medicine Unit(IMU)을 통해 모집됩니다. 연구 관련 절차 또는 평가가 수행되기 전에 정보에 입각한 서면 동의를 얻을 것입니다. 연구에 모집하기 위한 모든 피험자의 적격성은 스크리닝 방문 중에 평가되어야 합니다. 피험자는 연구에 등록할 자격이 있으려면 섹션 3.3 및 섹션 3.4에 각각 설명된 모든 포함 및 제외 기준을 충족해야 합니다. 투약 전에 적격성 기준을 확인해야 합니다. 스크리닝을 위해 예정된 모든 임상 실험실 테스트는 투여 전 기준선을 설정하기 위해 수집됩니다. 연구가 시작되기 전에 완료되어야 하는 다른 절차에는 전체 신체 검사 및 요로 임신 테스트(가임 가능성이 있는 여성 피험자용)가 포함됩니다.

연구 방문 및 절차: 모든 적격 피험자는 1일차로 진행하여 연속 7일 동안(1-7일차) 매일 2회 메트포르민 1000mg 또는 위약에 1:1로 무작위 배정됩니다. 4일차에 피험자는 연구 약물을 투여하기 전에 YF17D를 1회 투여합니다. 피험자는 1일차(연구 전 약물), 4일차(YF17D 이전), 5일, 7일, 11일, 14일, 18일에 SingHealth IMU에 보고합니다(scRNA-seq 및 T 세포 연구에 동의한 참가자만 해당). ) 및 연구 혈액 샘플링을 위한 32일째. 채혈 일정은 모든 연구 그룹에서 동일합니다. 모든 연구 혈액 샘플은 분석 전에 모집이 완료될 때까지 -80oC에서 보관됩니다. 피험자 모집 및 혈액 수집은 전용 초기 단계 임상 시험 시설인 SingHealth 조사 의학 유닛(IMU)에서 외래 환자 연구로 수행됩니다. 이전 경험을 통해 목표 샘플 크기를 충족하는 데 필요한 참가자 수를 연구에 모집하는 데 어려움이 없을 것으로 예상합니다.

연구 후 후속 조치 및 절차: 연구 후 후속 조치 또는 절차에 대한 요구 사항은 없습니다.

안전 모니터링 계획: 연구는 e-CRF, 원본 문서 및 기타 연구 파일에 대한 액세스를 허용해야 하는 정부 조사관/규제 기관에 의해 평가될 수 있습니다. 검사관은 CRF를 검토하고 원본 문서와 비교하여 정확하고 완전한 데이터 수집을 확인하고 연구가 프로토콜, ICH-Good Clinical Practices(ICH-GCP) 및 모든 해당 규정에 따라 수행되고 있음을 확인합니다.

메트포르민의 알려진 일반적인 부작용으로는 설사, 메스꺼움, 복통, 속쓰림 및 부종이 있습니다. 드문 AE에는 유산산증 및 저혈당증이 포함됩니다. 메트포르민 투약 기간을 10일로 제한하면 이러한 심각한 AE의 위험을 더욱 줄일 수 있습니다. 피험자는 이러한 AE와 관련된 초기 증상을 살펴보고 이러한 증상이 나타나면 즉시 IMU에 보고하도록 훈련을 받게 됩니다. AE 이벤트 용어, 이벤트 시작 및 종료 날짜 및 시간, CTCAE 또는 주어진 치료를 사용하는 심각도, 작업 및 연구 지속에 대한 영향 및 이벤트의 최종 결과는 해결될 때까지 사례 보고서에 기록됩니다. 이벤트의.

연구가 진행되는 동안 조사관은 피험자를 모집할 뿐만 아니라 예정된 방문과 예정되지 않은 방문 모두에서 전체 병력 청취 및 신체 검사를 수행합니다. 조사자는 또한 임의의 잠재적인 부작용에 대해 피험자의 일기를 검토하고 발생하는 경우 최상의 임상 실습을 기반으로 AE를 관리할 것입니다. 연구 프로토콜 준수 여부는 약물 이력, 알약 수, 일지 검사 및 특정 시점의 메트포르민 약물 수준 측정을 통해 확인됩니다.

데이터 품질 보증: PI와 Co-I는 데이터 및 안전성 모니터링을 위해 정기적으로 연구를 검토합니다. 연구 팀 구성원인 두 명의 CRC가 내부 품질 검사를 수행합니다. 한 CRC에서 입력한 데이터는 소스 문서를 사용하여 다른 CRC에서 확인합니다. 연구는 또한 SingHealth Office of Research Integrity and Compliance(ORIC)의 모니터링을 위해 선택되거나 e-CRF, 원본 문서 및 기타 연구 파일에 대한 액세스가 허용되어야 하는 정부 조사관/규제 기관에서 평가할 수 있습니다. 모니터/검사관은 CRF를 검토하고 원본 문서와 비교하여 정확하고 완전한 데이터 수집을 확인하고 연구가 프로토콜, ICH-Good Clinical Practices(ICH-GCP) 및 모든 해당 규정에 따라 수행되고 있음을 확인할 수 있습니다.

데이터 입력 및 저장: 모든 참가자의 데이터는 모집 시 비식별 처리됩니다. CRF, 로그 및 일기와 같은 하드카피 연구 데이터 수집 양식은 연구자의 사이트 파일에 보관되고 SingHealth IMU에 자물쇠와 열쇠로 저장되며 위임된 연구 팀원만 액세스할 수 있습니다. 인구 통계 및 임상 데이터의 직접 데이터 캡처는 소스 문서에서 캡처됩니다. 신분증은 별도의 파일로 다른 사무실에 보관하며, 참가자의 개인정보 보호를 위해 최선을 다하겠습니다. 분석할 데이터에는 익명화된 데이터만 포함됩니다. 전자 데이터 캡처 시스템이 사용됩니다. 모든 전자 데이터는 암호로 보호되며 연구 팀원만 액세스할 수 있습니다. 검체, 테스트 결과 또는 병원체 데이터는 Duke-NUS EID 실험실의 독립 실행형 PC에 저장되어 액세스가 암호로 보호됩니다.

샘플 크기의 결정: 팔당 20개의 샘플 크기는 위약을 받은 참가자와 사전에 위약을 받은 참가자의 전신 증상이 50%에서 10%로 감소(위험 차이 = 0.4 감소 비율 = 0.8)한 것을 감지하는 80% 검정력을 제공합니다. 양면 5% 유형 I 오류율(PASS 13 소프트웨어)에서 메트포르민 대 위약 그룹으로 치료했습니다. 10%의 잠재적 탈락률을 고려하면 총 샘플 크기는 총 44개(암당 22개)입니다. YF 백신 시험에서 피험자 모집에 대한 이전 경험에서 1개월 추적 기간 동안 탈락이 없었습니다. 따라서 우리는 시험 기간 내에 필요한 수의 피험자를 모집할 수 있다고 확신합니다.

통계 분석: 위약과 메트포르민 전처리군 사이의 전신 증상 비율의 차이를 평가하기 위해 피셔의 정확 검정을 사용할 것입니다. AE 비율에 대한 신뢰 구간(CI)은 정확한 방법을 사용하여 추정됩니다. 위험 차이에 대한 CI는 Newcombe의 점수 방법을 사용하여 추정됩니다.

진단 플롯은 모수 분석 또는 비모수 분석에서 원시 데이터 또는 로그 변환 데이터 사용 선택을 결정하는 데 사용됩니다. 28일째 항-YF 중화 항체 역가, 바이러스혈증 및 SBREP-1 발현의 차이를 위약군과 메트포르민군 간에 비교한다. 전신 증상, 면역원성의 분자 상관 관계, 바이러스혈증, 항체 역가 및 메트포르민 사이의 관계를 회귀 방법으로 탐구합니다. 전신 증상이 시작되는 대상과 그렇지 않은 대상 사이의 배경 특성의 차이는 공변량 조정 분석에 포함됩니다.

연구 약물 혈액 수준의 결정: 연구 약물 수준은 액체 크로마토그래피-탠덤 질량 분석(LC-MS/MS) 분석 방법을 통해 측정됩니다. 분석은 싱가포르 종합 병원에서 사용할 수 있는 Shimadzu 8060 LC-MS/MS 시스템에서 수행됩니다.

유전자 발현 연구: 전혈에서의 유전자 발현은 Nanostring nCounter 분석을 사용하여 수행됩니다. 이 분석은 연구자가 증상이 있는 YF17D 감염에 대한 감수성 요인으로 적응형 ER 스트레스를 식별한 마이크로어레이의 적중을 검증하기 위해 이전에 사용한 유전자를 식별하기 위한 다중 접근법을 제공합니다(예비 데이터 참조). 중요한 점은 연구원이 Nanostring과 협력하여 이 시험에서 표적 유전자가 될 ER 스트레스 및 TCA 주기 경로에서 mRNA 전사물을 직접 정량화할 수 있는 포괄적인 프로브 세트를 맞춤화했다는 것입니다. 이 접근 방식은 CSA 예산 제약으로 인해 선택되기도 합니다. 그럼에도 불구하고 연구팀은 백업으로 추가 임상 샘플을 수집하고 RNAseq 사용을 탐색하여 다른 보조금 출처의 추가 자금을 통해 메트포르민의 약물유전체학을 발견할 것입니다.

이 제안된 유전자 발현 연구는 바이러스 연구 및 실험 의학 센터 @ SingHealth Duke-NUS(ViREMiCS)에서 수행될 것입니다. ViREMiCS는 PI와 협력자인 Eng Eong Ooi가 SingHealth Duke-NUS Academic Medicine Center 파트너십의 연구 센터로 설립했습니다. 개념 증명 임상 시험을 지원하고 가속화하기 위해 분자 및 시스템 생물학 도구 제품군을 구축했습니다. 따라서 연구자들은 혈액 샘플에서 유전자 발현을 측정하기 위해 이 접근법을 사용하는 데 어떤 문제도 예상하지 않습니다.

단백질체학 및 대사체학 프로파일링: 혈장 대사체학은 모세관 전기영동/질량분석법(CE/MS) 및 액체 크로마토그래피/질량분석법 LC-MS/MS를 사용하여 검사할 것입니다. , 25]. Proteomics는 LC-MS/MS를 사용하여 측정됩니다. 이러한 분석은 Duke-NUS에 있는 신흥 전염병 및 대사체학 핵심 시설 프로그램에서 사용할 수 있는 핵심 장비를 사용하여 수행됩니다. 이를 통해 향상된 생물학적 통찰력을 지원하는 다중 오믹스 접근 방식을 사용할 수 있습니다.

케모카인 및 사이토카인: 혈청 케모카인 및 사이토카인 수준은 40개 이상의 혈청 케모카인 및 사이토카인을 동시에 측정할 수 있는 Luminex 또는 Olink 분석을 사용하여 측정됩니다.

YF 바이러스혈증 및 PRNT 역가: YF 바이러스혈증 부하는 정량적 실시간 PCR(qRT-PCR)을 사용하여 평가됩니다. 항-YF 중화 항체 역가는 플라크 감소 중화 시험(PRNT)에 의해 측정될 것이다. 요약하면, 50 PFU(플라크 형성 단위)의 YF17D 바이러스를 인간 혈청의 2배 연속 희석액과 함께 37oC에서 1시간 동안 배양한 다음 24웰 플레이트의 Vero 세포 단층에 첨가합니다. 1시간 후, 배지는 흡인되고 세포는 유지 배지에서 카르복시메틸 셀룰로오스 1%로 오버레이됩니다. 5일 후 세포를 고정하고 세척한 후 크리스탈 바이올렛으로 염색합니다. 플라크의 수를 세고 PRNT50 역가를 시그모이드 용량-반응 곡선 적합을 역수 값으로 사용하여 결정합니다.

scRNA-seq 및 T 세포 연구: 단일 세포 RNA 시퀀싱(scRNA-seq)은 메트포르민 치료 전후에 분리된 PBMC에서 수행되어 다양한 면역 세포 하위 집합에 대한 메트포르민 치료의 영향을 결정합니다. 이 제안된 연구는 Duke-NUS의 Genome Biology Facility와 공동으로 수행될 것입니다. 그런 다음 scRNA-seq의 결과를 가이드로 사용하여 유세포 분석법 또는 ELISPOT(효소 결합 면역 흡수 반점) 분석을 사용하여 T 세포 기능과 활동을 평가합니다. 이러한 분석은 Duke-NUS의 신종 전염병 프로그램에서 사용할 수 있는 핵심 장비를 사용하여 수행됩니다.